兰州百合植物内生及根际土放线菌最适分离培养基的筛选研究

以兰州百合的鳞茎、根及根际土为实验材料,对其植物内生和根际土放线菌在不同的培养基上进行分离培养.根据不同培养基中所得放线菌菌落数量与种类,应用统计学方法,来选择出最适植物内生以及根际土放线菌生长的最适培养基.方法:对兰州百合鳞茎及根部表面消毒处理后,采用组织悬液法将原液涂布于添加抑菌剂的腐殖酸培养基、寡营养培养基、改良的高氏Ⅰ号等10种不同的培养基上.对根际土壤采用120℃预处理1 h,然后将处理后的根际土样作10-1、10-2、10-3梯度稀释并分别涂布于添加抑菌剂的SCA培养基、HVA培养基、葡萄糖—天冬氨酸琼脂培养基等7种不同的培养基上.置于23℃恒温培养箱中培养30 d,统计每个培养基上放线菌菌落数量及种类.结果:不同培养基分离兰州百合植物内生及根际土放线菌,其数量和种类有很大差异.其中,最适于百合鳞茎、根部内生及根际土放线菌生长的培养基分别为IMA-2琼脂培养基(共109株)、腐殖酸培养基(共662株)和改良高氏Ⅰ号培养基(共112株).     

盐碱地放线菌的分离及鉴定

用高氏一号培养基对张掖市盐碱土壤中放线菌进行分离及鉴定,分离到9株菌.不同氯化钠浓度的CM培养基对9株菌进行嗜盐性测定,结果显示：菌株A2、A5、A6属于弱嗜盐放线菌,另外5株属于中度嗜盐放线菌.通过形态特征和生理生化特征鉴定,菌株A1、A2、A4、A5、A7、A8和A9为链霉菌属（Streptomycetes）,A3为链轮丝菌属（Streptoverticillum）,A6为诺卡氏菌属（Nocardia）.     

宣威火腿的微生物生态学初步研究

从宣威火腿上分离到69株真菌、27株放线菌和19株细菌,其中曲、青霉是火腿表面的优势菌,占真菌总分离菌株数的59％。一半左右的真菌、细菌和放线菌能分解利用蛋白。而在分解利用淀粉、纤维素方面,真菌放线菌一般比细菌强。30％以上真菌、放线菌和细菌能在30％的高浓度NaCl培养基中生长。     

稀有放线菌的选择性分离方法

 为了设计稀有放线菌的分离方法,对噬菌体S7,S3,重铬酸钾、萘啶酮酸、利富平、硫酸庆大霉素、柱晶白霉素、放线酮、制霉菌素等抑制剂及几种碳源进行了试验,设计或改良了几种培养基,研究它们分离稀有放线菌的效果.发现噬菌体能有效降低常见链霉菌的出菌率,重铬酸钾抑制真菌、细菌的效果好,MOPS、海藻糖、丙烯酰胺和乙二胺四乙酸能提高稀有放线菌的出菌率.推荐海藻糖-脯氨酸培养基、改良高氏2号、改良脯氨酸培养基作为稀有放线菌分离培养基.还提供了一些分离稀有放线菌的经验.     

稀有放线菌分离方法的研究

在培养基中加入７种不同抑制剂，不同的碳源或氮源及对土壤样品进行预处理等选择性分离各类放线菌，结果发现对土壤真菌，细菌有明显抑制作用而对放线菌无抑制作用的只有重铬酸钾，认为它是选择性分离放线菌的一种高效，便宜的抑制剂。在培养基中加入的碳源或氮源不同，可分离到不同类型的放线菌，找到了在分离不同类型的放线菌时培养基中较好的碳，氮源组合。     

刺五加内生放线菌的分离与多样性研究

从采集自5个不同地点的刺五加全株植物,采用8种分离培养基,从植株不同部位分离,经BOX-PCR排重后,共得到内生放线菌265株.从不同培养基分离出的放线菌数目有较大差异.LNMS培养基分离菌株最多,60株.海藻糖-无机盐培养基分离最少,17株.从刺五加植株根及根茎分离到的放线菌数量最多,占菌株总数的77%,叶中分离的最少,为6%.从吉林柳河和吉林梅河口植株内分离的菌株较多.利用16SrRNA基因序列分析鉴定,菌株分属于7个亚目,9个科,9个属.     

贵州黄果树土壤放线菌的分离与纯化研究初报

本研究从贵州黄果树采集土壤样品19份,采用平板稀释法和不同培养基对放线菌进行分离、纯化培养。结果表明:不同培养基对贵州土壤放线菌的分离效果差别较大,从贵州黄果树采集的土样中共分离出的32株典型放线菌菌株,经初步鉴定,分别属于链霉菌属、诺卡氏菌、小单孢菌属、放线菌科和非链霉菌属。     

高氏一号干粉培养基的性能测试

将配制的高氏一号干粉培养基与新鲜的高氏一号培养基进行理化特性、灵敏度、保存性能测试和对放线菌接种后培养观察其生长情况。结果表明,高氏一号干粉培养基虽然灵敏度上有所不足,与新鲜高氏一号培养基相差5～10倍,但对于放线菌接种培养完全能满足实验用放线菌的培养分离。高氏一号干粉培养基对放线菌生物制品的生产及检验具有方便、稳定的特点,也具有推广应用的可行性。     

西双版纳橡胶,咖啡和胡椒根际放线菌的抗菌作用研究

对分别分离自橡胶、咖啡和胡椒根际的７５－９５株（８－１１属）放线菌所作的拮抗测定表明，有拮抗作用的菌占４４～４６％，作为优势菌群一链霉菌有一半以上有抑菌作用。特别从三作物根际分离到对使柑桔、胡椒、辣椒三种作物致病疫霉菌（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ），咖啡炭疽（Ｃｏｌｌｅｔａｔｒｉｃｈｕｍｌｏｆｔｅａｎｕｍ）和橡胶褐根病菌（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓｎｏｘｉｕｓ）分别有明显抑制作用的６株资源放线菌，有待开发研究。     

Aspergillus oryzae与Aspergillus niger原生质体的制备、再生与非对称灭活工艺研究

为提高菌丝原生质体的释放量和活力,分别考查了培养基碳源、菌龄、酶浓度、酶解时间及再生培养基种类对Aspergillus oryzae和Aspergillus niger 原生质体释放和再生的影响,并研究了两亲本原生质体的非对称灭活参数。结果表明:（1）以MPY液体培养基为菌丝培养基,按105个孢子/ml培养基的接种量接入新鲜孢子悬液,30 ℃/100 rpm分别振荡培养18和21 h,总浓度15 mg/ml的复合酶液（溶壁酶：蜗牛酶：纤维素酶＝1:1:1）按1 g湿菌丝球/10 mL酶液的比例,于30 ℃/70 rpm条件下酶解2.5 h,然后以高渗豆汁固体培养基为再生培养基,在上述制备工艺参数下两亲本原生质体的释放量和再生率均可达到107个/ml和30％以上;（2）通过灭活曲线确定A. oryzae HN3042原生质体于15 W紫光灯垂直距离13 cm处照射15 min,A. niger CICC2377原生质体于65 ℃水浴10 min,此灭活剂量可使99％以上双亲原生质体非对称失活。     

糙皮侧耳831原生质体的分离和再生

本试验利用蜗牛酶和溶壁酶处理糙皮侧耳幼嫩菌丝,成功地分离出原生质体,原生质体数量为6.0×10~5～1.07×10~7个/ml;再生频率为1.38%,再生菌株出菇正常,生物学效率多在100%以上。     

不同热解温度生物炭改良铅和镉污染土壤的研究

 为了探究热解温度对生物炭修复重金属污染土壤的影响,将300℃、500℃和700℃下制备的生物炭加入铅（Pb）和镉（Cd）污染土壤进行培养,检测重金属形态的变化。结果表明,加入生物炭培养60d后,Pb和Cd污染土壤pH值较对照上升0.35—0.86单位值,土壤中重金属的酸可提取态含量下降,残渣态含量上升,对目标重金属生物有效性降低的改良效果700℃>500℃>300℃;在生物炭添加量相同的情况下,复合污染土壤中Pb的残渣态含量比对应单一污染高50.60%—72.79%,而复合污染土壤中Cd的酸可提取态含量较对应单一污染高7.53%—12.99%;热解温度影响生物炭的表面特征和吸附重金属机制,进而影响生物炭改良土壤中目标重金属形态分布。     

广西四川金矿床区土壤样品中蜡状芽孢杆菌的分离和鉴定

从广西金芽、四川阿西所属的三个金矿区采集了土壤样品55份,采用选择性培养基从10~(-2)稀释度的平皿中分离到阳性菌739株,从中挑取11株,其分出率为1．5％,并对分离株进行了光镜和电镜形态学观察,其大小为1～1．4×2．5～3．5μm;芽孢椭圆形．中生,没有孢囊和伴孢晶体,并对11株分离株的生理生化特性进行了测定,结果表明,除C_（17）分离株V、P反应阴性有待进一步分析外,其余10株都与标准株完全相同,因此,应归属芽孢杆菌属蜡状芽孢杆菌（Bacilluscereus）．     

食用药百合组织培养及其多倍体诱导研究

对食用药百合进行了组织培养和多倍体诱导研究。以百合的鳞片和正在生长的茎尖作为外植体,采用MS培养基作为基本培养基,设置不同浓度激素研究组织培养快繁的最佳方法;在离体培养条件下,初步比较了不同浓度的秋水仙素处理百合的诱变效果。结果表明：在温度25±2℃,光照15h/d,光照强度2000lx,培养基中加蔗糖30g/L、琼脂8g/L、pH5.8培养条件下,鳞片诱导的最适培养基为MS＋6-BA1.5mg/L＋NAA0.2mg/L,茎尖不定芽诱导的最适培养基为MS＋6-BA1.5mg/L＋NAA0.1mg/L,生根的最适培养基为1/2MS＋KT0.1mg/L＋NAA0.2mg/L;0.05%的秋水仙素处理12h诱变效果最佳,诱变率高达40%。     

产转糖基β-半乳糖苷酶菌株F3的鉴定、产酶条件及转糖基活性研究

菌株乃从土壤中筛选得到,具有产生转糖基β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）的特性。根据形态观察及18S rDNA序列分析;菌株乃被鉴定为扩张青霉（Penicillumexpansum）。通过单因子试验和正交试验,对菌株乃产生转糖基阻半乳糖苷酶的培养基组成及发酵条件进行了优化。优化后的培养基组成为葡萄糖2％、酵母粉1％、蛋白胨1．5％、氯化钠0．3％。在初始pH6．0,28℃培养40h时,其产酶量为2245．2U／L,比优化前提高约3倍。菌株乃产生的转糖基肛半乳糖苷酶以pH4．5缓冲液配制的30％乳糖为底物,50℃反应24h,低聚半乳糖产量为30．6％,其中80％以上为三糖。     

真空蒸馏技术提取土壤水实验研究

简要介绍共沸蒸馏、真空蒸馏、离心分离、锌的微量蒸馏4种土壤水提取技术,并对其优缺点进行了比较.对黏土含量较高且达到田间持水量的土壤在提取温度为100℃、连续加热5h条件下,真空蒸馏提取土壤水进行氢氧稳定同位素分析.结果表明:真空蒸馏技术在提取温度为100℃和连续加热5h条件下,土壤水提取百分比接近100%;土壤中有部分弱束缚水被提取出来,约占提取水分的0.45%;对土壤含水量较高的黏土,δ(D)和δ(18O)最大提取误差(提取的土壤水与加入水同位素的差值)分别为-1.2%和-0.07%,提取的土壤水同位素都贫化.     

产转糖基β半乳糖苷酶菌株F3的鉴定 产酶条件及转糖基活性研究

菌株F3从土壤中筛选得到,具有产生转糖基β-半乳糖苷酶(β-galactosidase) 的特性。根据形态观察及18S rDNA序列分析,菌株F3被鉴定为扩张青霉(Penicillum expansum)。通过单因子试验和正交试验,对菌株F3产生转糖基β-半乳糖苷酶的培养基组成及发酵条件进行了优化。优化后的培养基组成为葡萄糖2%、酵母粉1%、蛋白胨1.5%、氯化钠0.3%。在初始pH 6.0,28?℃培养40?h时,其产酶量为2?245.2?U/L, 比优化前提高约3倍。菌株F3产生的转糖基β 半乳糖苷酶以pH 4.5缓冲液配制的30%乳糖为底物,50?℃反应24?h,低聚半乳糖产量为30.6%,其中80%以上为三糖。
     

土壤中耐低温石油降解菌的优选、鉴定及降解性能分析

在低温条件下,从大港油田的石油污染土壤中富集分离出31株耐低温菌,在10℃经初步降解试验,优选出对原油的解率分别为47.64%和39.81%的耐低温高效菌株D17和D24,经鉴定分别为副球菌属和盐单孢菌属.进一步对2株高效菌在10℃进行土壤降解试验,单独投加D17,D24的除油效果明显高于不加菌的除油效果,在10℃经过15d,D17使每7 g土壤中的石油烃含量减少86.5mg;D24使每7 g土壤中的石油烃含量减少15.8 mg.其中菌种D24的降解组分GC-MS分析表明,D24对饱和烃的降解贡献不大,对芳烃组分有较大程度的降解,且对芳烃重质组分的降解性能高于对轻质组分的降解性能.     

一株菲降解菌的分离、鉴定及最佳培养条件的优化

从石油污染场地分离到一株可降解菲的菌株SP 3,经生理生化鉴定和16S rDNA序列对比分析,初步鉴定该菌株为分枝杆菌（Mycobacterium sp.）,该菌能够以菲为唯一碳源,在菲浓度为100 μg/mL的无机盐培养基中,28 ℃摇床培养7 d降解率达到了99%以上。对该菌进行了最佳发酵培养基及培养条件的优化研究,其最佳培养基配方为淀粉1%、牛肉膏1%、Na2HPO4 0.2%、NaH2PO4 0.2%,并通过单因素实验法确定了最佳培养条件为温度30 ℃,初始pH =7.5,培养时间12 h。