依那普利对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌TGF-1β、LN的影响

目的 观察依那普利（Ena）对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖及分泌转化生长因子-β1（TGF-β1）和层粘连蛋白（LN）的影响.方法 大鼠GMCs分别培养于正常浓度葡萄糖（NG,5.5mmol/L）、高浓度葡萄糖（HG,20mmol/L）及高糖和不同浓度（10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L）的Ena中,同时设空白对照.分别采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫法（RIA）检测不同时间（24 h、48 h、72 h）GMCs增殖情况和细胞培养上清液中TGF-β1、LN的含量.结果 与空白对照组比较,正常糖组和高糖组GMCs增殖增加,TGF-β1、LN分泌增多（P〈0.001）,高糖组更明显（P〈0.001）.与高糖组比较,高、中、低浓度的Ena干预均可逆转上述变化.且在一定浓度范围内,Ena无明显细胞毒性.结论 高糖可致GMCs增殖和TGF-β1、LN分泌增多,Ena可抑制高糖诱导的GMCs增殖与分泌TGF-β1、LN,这可能是其减少细胞外基质（ECM）积聚的机理之一,并有利于延缓糖尿病肾病肾小球硬化（GS）的进展.     

东亚三角涡虫肌球蛋白轻链（MLC）融合蛋白原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

构建了涡虫肌球蛋白轻链融合蛋白原核表达载体,并进行表达,根据涡虫基因文库中肌球蛋白轻链（Mlc）基因完整的ORF序列设计合成特异性51物,通过PCR扩增涡虫Mlc基因,并插入到融合蛋白原核表达载体PET-28a中,转化宿主菌B121（DE3）细胞．0．4mMol／L的IPTG诱导表达MLc蛋白．重组质粒测序和酶切结果显示Mlc基因已正确插入PET-28a中,重组蛋白经SDS—PAGE在18．2KD处有一条明显的蛋白表达条带。western blot检测得到同样大小的条带。结果表明,涡虫His-MLC融合蛋白已成功表达。     

拟南芥基因组中注释为小檗碱桥环酶基因的分子克隆及异源表达

小檗碱桥环酶(BBE)催化(S)-牛心果碱((S)-reticuline)中N-CH3与分子内苄基部分中羟基的邻位芳香碳之间C-C键的形成,该酶属于双共价黄素蛋白家族,是苄基异喹啉类生物碱向小檗碱类生物碱转化的关键酶.迄今,在拟南芥(Arabidopsis thaliana)中尚未发现复杂生物碱,但其基因组测序结果表明拟南芥含有众多可能与复杂生物碱生物合成相关的基因,其中与BBE类似的基因有12个.基于与已知功能的BBE及拟南芥中BBE序列的分析,选定拟南芥中4个注释为BBE的编码基因为目的基因,设计特异引物,从拟南芥cDNA中扩增并克隆到pGM-T载体中,筛选重组子,测序并分析,获得了4个BBE目的基因,分别为AT2G34810、AT5G44400、AT5G44410和AT5G44440.将上述基因克隆至表达载体pET-28a或pET-30a中,分别转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,IPTG诱导实现了上述基因的异源表达.     

中国汉族人群中Vav2基因和Vav3基因多态性与原发性闭角型青光眼之间关系的研究

目的本实验的目的是研究沌以和Vav3基因多态性与中国汉族人群中原发性闭角型青光眼（Prim aryangle-closure glaucoma,PACG）的遗传性是否有联系。方法211名原发性闭角型青光眼患者和206名性别和种族匹配的健康对照者纳入到本病例对照研究中。2个单核苷酸多态（the single nucleotide polymorphisms,SNPs）rs2156323（Vav2）和rs2801219（vav3）的基因分型用聚合酶链反应的限制性片段长度多态性分析（polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism,PCR—RFLP）。这两个基因位点的多态性与PACG遗传性之间的关系用卡方检验来评价。结果rs2156323（Vav2）和rs2801219（Vav3）的基因频率在所有参与者中均没有偏离哈迪一温伯格平衡（Hardy-Weinberg Equilibrium,HWE,P〉0．05）。该两个位点的等位基因频率和基因型频率的分布在PACG患者和正常对照者之间均没有差异。结论本研究的结果显示rs2156323和rs2801219可能不是中国汉族PACG的易感基因位点,Vav2和Vav3基因可能不是中国汉族PACG患者的易感基因。     

亚甲基蓝固定与异相光敏化体系色氨酸氧化

本文将光敏剂亚甲基蓝（MB）通过吸附固定到阳离子树脂（R）上,研究异相光敏化体系在可见光照射下单线态氧（^1O2）的产生及其对色氯酸（Trp）的氧化。MB—R粉末UV-vis漫反射光谱表明,MB以单分子形态吸附在树脂上。以9,10-二苯蒽（DPA）为^1O2捕获剂,通过化学发光和高效液相色谱两种方法,证明所研究敏化体系使基态氧转化为^1O2。实验数据拟和处理结果表明,^1O2对Trp的氧化反应动力学属二级反应,Trp氧化降解率随光照强度增强而增大,但随Trp初始浓度增大而减小。本文发现在可见光的辐射下与光敏化剂处不同相的色氨酸仍可发生氧化降解,这一结果为探讨食品营养、风味损失等失效变质的机理打下基础。     

黑腹果蝇品系纯合体杂交后代翅型变异的遗传分析

目的探究实验室条件下果蝇杂交后代所表现出的基因连锁、互换与自由组合效应,计算白眼、卷刚毛、小翅基因座位间的距离,并探索可能的基因互作。方法将三隐性（白眼、卷刚毛、小翅）与残翅两种品系的果蝇进行杂交,并使F1代互交,对正反交的F2代进行表型数据统计分析。结果发现F2代出现新性状小皱翅,将其分为3种情况进行讨论,计算出了3个基因座位闻的距离。结论果蝇小翅和残翅基因互作产生了新性状小皱翅;在统计上它是一种“例外”新性状,而不是小翅或残翅范畴里的特情。     

表观遗传基因沉默研究新进展

美国弗吉尼亚联邦大学Massey癌症中心的研究人员确定出了一种蛋白质在血红蛋白基因沉默中的作用。这种蛋白将可能成为在分子水平上治疗遗传性血液疾病如镰刀细胞贫血症和β-地中海贫血症的一个非常有潜力的靶标。这项研究的结果公布在4月的PNAS（美国科学院院刊）中。研究人员首次发现蛋白质MBD2蛋白通过甲基化作用（DNA的一种化学修饰过程）介导胎儿gamma球蛋白基因沉默。     

核受体LXRa靶基因研究进展

核受体的研究近几年已有飞速的发展。LXRa(Liver X Receptor a)是一种与脂类代谢有关的核受体。研究发现LXRa的靶基因具有调节脂类的吸收、运输、转化和生物合成的功能,此外,LXRa在糖类的代谢等方面也有重要的调控作用。研究结果表明LXRa与动脉粥样硬化的发生有非常密切的关系。目前利用LXRa为靶标进行抗动脉粥样硬化药物筛选已经成为一个重要的研究方法。     

循环雌二醇及代谢物与绝经后乳腺癌的相关性

目的探讨循环雌二醇（E2）、4-羟雌二醇（4-OHE2）、2-甲氧雌二醇（2-MOE2）水平及4-羟雌二醇：2-甲氧雌二醇（4-OHE2：2-MOE2）比值与绝经后乳腺癌危险性的相关性。方法采用ELISA法检测绝经后34例乳腺癌、40例乳腺良性（乳腺纤维腺瘤与乳腺囊性增生病）疾病患者和20例正常对照循环雌二醇、4-羟雌二醇、2-甲氧雌二醇水平并计算4-羟雌二醇：2-甲氧雌二醇比值。结果乳腺癌组及乳腺良性疾病组循环2-甲氧雌二醇水平差异无统计学意义（P〉0．05）,但均较正常对照组低（P〈0．05）;乳腺癌组及乳腺良性疾病组4-羟雌二醇：2、甲氧雌二醇比值差异无统计学意义（P〉0．05）,但均较正常对照组升高（P〈0．05）。乳腺癌Ⅰ期～Ⅲ期各期循环雌二醇、4．羟雌二醇、2-甲氧雌二醇、4-羟雌二醇：2-甲氧雌二醇比值差异无统计学意义（P〉0．05）。4-羟雌二醇、2．甲氧雌二醇、4．羟雌二醇：2-甲氧雌二醇比值在乳腺癌ER（-）组与ER（＋）组间差异无统计学意义（P〉005）,但ER（＋）组雌二醇水平较ER（-）组明显升高（P〈0．05）。结论2．甲氧雌二醇与绝经后乳腺疾病负相关;4-羟雌二醇：2-甲氧雌二醇比值可能预示绝经后乳腺疾病危险。     

Development of DNA probes for cytotoxin and enterotoxin genes in enteric bacteria

DNA probes to identify the genes encoding toxins in enteric bacteria have been developed. Use of these probes reduces the number of animals required for toxicity testing, as suspect bacteria can be directly tested for the presence of toxin. We have augmented the gene probes available by developing probes against the Escherichia coli enterotoxin LTII and shiga toxin from Shigella dysenteriae 1. The LTII gene from E. coli 357900 was identified and characterised and a suitable internal probe was obtained. The LTII gene was found not to be common among enterobacteriae from various geographical locations. Isolates predominately of animal origin from Nigeria and Thailand hybridized with the probe. The shiga toxin gene was isolated from S. dysenteriae 1 by a combination of in vivo and in vitro methods. An internal probe was identified and used against different serogroups of Shigella and E. coli isolates. The probe was found to hybridize with S. dysenteriae 1 isolates and also some S. flexneri and S. sonnei strains. Representatives were tested for toxin production and found to produce toxin at low levels.     

Endocytosis and inositol hexakisphosphate levels in ras transformants of Dictyostelium discoideum amoebae

Fluid-phase pinocytosis kinetics and lysosomal enzyme secretion parameters were measured in Dictyostelium discoideum amoebae constructed from strain AX3 by transformation with a multicopy plasmid carrying either a normal ras gene (ras-Gly12), a mutated ras gene (ras-Thr12) or by the vector carrying the geneticin resistance gene only (pDNEO2). It was found that the pinocytosis rate and extent as well as the lysosomal enzyme secretion were slightly different in the three strains. These changes, however, were related to minor modifications of the cellular volumes. The overall concentration of inositol hexakisphosphate was similar in the three strains.     

Gene conversion in the chicken immunoglobulin locus: A paradigm of homologous recombination in higher eukaryotes

Gene conversion was first defined in yeast as a type of homologous recombination in which the donor sequence does not change. In chicken B cells, gene conversion builds the antigen receptor repertoire by introducing sequence diversity into the immunoglobulin genes. Immunoglobulin gene conversion continues at high frequency in an avian leukosis virus induced chicken B cell line. This cell line can be modified by homologous integration of transfected DNA constructs offering a model system for studying gene conversion in higher eukaryotes. In search for genes which might participate in chicken immunoglobulin gene conversion, we have identified chicken counterparts of the yeastRAD51, RAD52, andRAD54 genes. Disruption and overexpression of these genes in the chicken B cell line may clarify their role in gene conversion and gene targeting.     

比格犬黑皮质素受体3基因291位点突变与体重性状相关性的分析

分析比格犬MC3R基因突变与体重性状的关系。抽取112只比格犬血液,记录体重数据,然后提取DNA;采用PCR-RFLP技术对MC3R基因G291A位点进行分析,并克隆测序。测序结果表明,291位点表现为G、A二个等位基因和GG、GA及AA三种基因型;统计分析结果显示AA型犬与GG型犬体重比较差异显著（P〈0．05）。犬MC3R基因突变可致体重增加,可作为犬体重标记的候选基因。     

Differential display analysis of gene expression in invertebrates

Screening for differentially expressed genes is a straightforward approach to study the molecular basis for changes in gene expression. Differential display analysis has been used by investigators in diverse fields of research since it was developed. Differential display has also been the approach of choice to investigate changes in gene expression in response to various biological challenges in invertebrates. We review the application of differential display analysis of gene expression in invertebrates, and provide a specific example using this technique for novel gene discovery in the nematode Caenorhabditis elegans.     

青少年特发性脊柱侧凸基因表达谱的研究

目的从疾病基因表达谱的水平研究青少年特发性脊柱侧凸（adolescent idiopathic scoliosis,AIS）的发病机理。方法利用4张Affymetrix公司的U133 Plus2．0基因表达谱芯片检测5个RNA样本的基因表达谱的差异,其中两个正常儿童RNA样本同时与一张芯片进行杂交,AIS轻度、中度与重度组各一个RNA样本分别与一张芯片杂交,用生物信息学方法筛查有表达差异的基因。结果总共筛选出表达异常及与病情程度变化趋势相关的基因42个,涉及17条染色体。结论外周血基因普表达谱的研究表明青少年特发性脊柱侧凸显示有多基因遗传性,是探讨病因和病变进展的一个方法。