壳聚糖-Fe3O4超顺磁微球固定脂肪酶催化拆分（R,S）-1-苯乙醇

为将脂肪酶固定化,以提高酶的稳定性、使酶可以重复利用和降低生产成本,采用化学共沉淀法制备Fe3O4,以透射电镜、X-射线粉末衍射和红外光谱对所得产品进行表征,并且采用硅烷-戊二醛偶联法和壳聚糖包埋法分别将脂肪酶固定于磁球表面,再以生物拆分(R,S)-1-苯乙醇为模型考察了各种因素对转酯反应的影响。结果表明:化学共沉淀法制备Fe3O4为粒径小于20 nm的磁性纳米粒子;壳聚糖包埋法操作简单、酶载量大;扫描电镜分析揭示固定酶的磁球表面含有大量微孔结构。在最佳条件下,1-苯乙醇的转化率达44.3%,对映体过量值eep为99%,酶的半衰期为121h。反应完成后,施加外磁场可使酶与反应体系迅速分离,固定化酶重复使用11次酶的活性没有明显减少,说明壳聚糖-Fe3O4超顺磁微球固定脂肪酶具有高的活性和稳定性。     

磁性高分子微球合成及其固定化脂肪酶的研究

用化学共沉淀法制备Fe3O4粒子,以油酸为分散剂,与化学单体、胶联剂等处理,经修饰合成磁性高分子微球,固定化脂肪酶水解油酯,测试其固定化脂肪酶的性能.通过测试其固定化时间和固定化酶量以及固定化酶的半衰期等性能,与游离酶性能对比,说明这种磁性材料大大提高了酶的适应温度,增强了脂肪酶的耐受性,提高了脂肪酶的活力回收,磁性粒子高分子微球是一种很好的酶固定化材料.     

用壳聚糖修饰的MCM-48固定化脂肪酶拆分（R，S）-1-苯乙醇

研究了涂覆壳聚糖（CS）的介孔分子筛MCM-48固定化假单胞菌脂肪酶（PSL）,及其在（R,S）-1-苯乙醇转酯化拆分反应中的催化性能．结果表明,壳聚糖与MCM-48的质量比为1：10时,用有机相固定化法制备的固定化酶PsL／CS-MCM-48显示了较高的催化活性及对映选择性,且高于游离酶和纯壳聚糖固定化酶PSL/CS．在PSL／CS-MCM-48的催化作用下,1-苯乙醇的转化率（C）达到46．9％,（S）-1-苯乙醇的对映体过量值（ees）达到87．5％,产物（R）-1-乙酸苯乙酯的对映体过量值（eep）大于99％,对映选择性参数（E）为576．同时,PSL／CS-MCM-48对（R,S）-1-苯乙醇催化转酯化拆分具有良好的重复使用性．     

固定化脂肪酶催化（R，JS）-1-苯乙醇转酯化拆分反应及动力学研究

利用制备的舍Fe304无机磁性复合物FSN固定假单胞茵脂肪酶（Pseudomonas sp Lipase,PSL）,获得具有高活性、高对映体选择性和易分离的固定化酶PSL／FSN．乙酸乙烯酯做酰化试剂,PSL／FSN在正庚烷溶剂中催化（R,S）-1-苯乙醇转酯化拆分反应,40℃反应2h时,（S）-1-苯乙醇对映体过量值eep和（R）-乙酸-1-苯乙酯的对映体过量值eep均为99％,（R,S）-1-苯乙醇的转化率达到理论值。固定化酶PSL／FSN在70℃经2h热处理,其活性和对映选择性没有明显的下降;PSL／FSN重复使用10次,其活性和对映体选择性未出现衰减。基于实验数据,研究了固定化酶催化（R,S）-1-苯乙醇转酯化拆分反应的动力学行为,获得了（R,S）-1-苯乙醇转酯化拆分反应的动力学方程。     

海藻酸钠-壳聚糖固定化漆酶的研究

采用海藻酸钠包埋法和海藻酸钠-壳聚糖包埋-交联法固定化漆酶,探讨了固定化条件、固定化漆酶及游离酶的酶学性质,结果表明：包埋法和包埋-交联法固定化漆酶的最佳条件分别为海藻酸钠浓度3％、CaCl2浓度1．5％和海藻酸钠浓度2％、CaCl2浓度2％、壳聚糖浓度1．5％、戊二醛浓度1％．两种固定化漆酶的最适pH和最适温度相同,分别为5．0和30℃,游离酶pH为4．6,温度20℃．包埋法固定化漆酶、包埋一交联法固定化漆酶和游离酶的米氏常数分别为3．3,2．8,1．22mmol／L．     

胰蛋白酶固定化技术研究

以脱乙酰壳聚糖为载体,明胶包埋,戊二醛为交联剂,对胰蛋白酶的固定化条件和固定化胰蛋白酶的性质进行研究。文章报道的新工艺是一种制备固定化胰蛋酶的理想方法,它兼有絮凝法迅速方便、包埋法成型容易和交联法强度大等优点。研究中就交联剂用量、明胶用量、ｐＨ 值以及载体与酶的比例对固定化胰蛋白酶的影响进行比较,在所选择的固定化条件下,固定化酶的活性回收率可达５８．２％ 以上。固定化酶的最适温度为６８ ℃,最适ｐＨ 值为７．９, Ｋｍ 值升高,热稳定性、ｐＨ 值贮存稳定性以及在乙醇溶液中的抗变性亦明显高于可溶性胰蛋白酶。在柱式反应器内,当以２．５％ 酪蛋白为底物时,其操作半衰期为４７ ｄ 左右。     

羟基纤维素磁性微球的制备应用

运用化学共沉淀法制备可悬浮磁性流体,通过化学键合－吸附在其表面包被了一层带有羟基功能团的纤维素,制得了粒径均匀,稳定性好,磁响应性高的超顺磁磁性微球。光谱分析证实磁性微球的结构,透射电镜测定了磁性示粒径分布。该微球与戊二醛交联,可用于各种酶的固定。     

仿生合成SiO2载体及其固定脂肪酶的条件研究

采用L-脯氨酸为模板,仿生制备用于固定脂肪酶的二氧化硅载体．SEM、IR表征得知,制备的仿生载体为粒径约3um的SiO2微球,氮气吸附表征得知,SiO2微球内部孔径大小约16．8nm．载体固定脂肪酶的实验结果表明,固定化脂肪酶的相对最佳条件：酶液质量浓度5mg／mL,反应温度40℃,反应时间7h,pH=8,最高固载率可达82．3％,酶活1067U／g载体．     

蚯蚓纤溶酶壳聚糖微球的制备及性质

以蚯蚓纤溶酶为生物大分子模式药物,研究壳聚糖载药微球的制备方法及对药物活性和稳定性 的影响.以壳聚糖为原料,采用超声乳化交联法制备壳聚糖微球,分别吸附和包埋蚯蚓纤溶酶.在油水体积比 15/1,搅拌转速800 r/min,1 mL戊二醛作为交联剂,超声处理5 min条件下乳化交联制备微球,包埋法具有 较高的栽药率和...     

磁微球固定过氧化物酶催化光度检测过氧化氢

采用化学共沉淀法制备Fe3O4,将正硅酸四乙酯水解在Fe3O4粒子表面制得Fe3O4/SiO2核壳磁微球,制备好的微球经红外光谱、X射线粉末衍射和磁强计考察其结构和磁性。在微球表面用3-氨丙基三胺乙基硅烷修饰上氨基,经戊二醛活化以偶联的方式将过氧化物酶固定在磁微球上。固定后的酶催化过氧化氢的同时使氨基二乙基苯胺硫酸盐显色,产生的有色物质在551 nm处有最大吸收,以此建立检测过氧化氢的方法。结果表明,包裹SiO2层的磁微球不改变其核的结构,磁性降低但是不改变超顺磁状态。在最佳条件下,过氧化氢的线性范围是1.29～64.5μmol/L,检出限为8.5×10-7mol/L。固定后的酶可反复使用5次,放置于4℃至少两个月不影响催化效果。     

磁性壳聚糖表面离子液体固定化及其 对丙烯酰胺吸附性能研究

以Fe3O4作为磁性纳米粒子,悬浮交联法制备磁性壳聚糖微球;以戊二醛作为交联剂在磁性壳聚糖微球表面固定离子液体;利用紫外分光光度法研究磁性壳聚糖固定化离子液体对丙烯酰胺的吸附性能.吸附动力学实验表明:2 h吸附容量为1.45 mg/g,3 h吸附基本达到平衡.结果显示:制备的磁性壳聚糖固定化离子液体对丙烯酰胺具有良好的吸附性能.     

两种不同方法固定化β-葡萄糖苷酶的研究

以自制的壳聚糖微球为载体,戊二醛为交联剂,考察了壳聚糖浓度对微球制备的影响,并采用吸附-交联法和交联-吸附法两种方法对β-葡萄糖苷酶固定化进行了研究.结果表明:(1)当壳聚糖:2％乙酸溶液=1∶20(w/w)时,最适合制球,成球粒径平均约为1.5mm.(2)采用交联-吸附法时固定率为43％,储存5天后剩余酶活力为67％,10天后剩余酶活力为52％,采用吸附-交联法时固定率为32％,储存5天后剩余酶活力为60％,10天后剩余酶活力为43％.因此,优化的固定化β-葡萄糖苷酶的方法为交联-吸附法.     

壳聚糖固定化厌氧污泥微球的制备研究

将粉末状壳聚糖制备成一定浓度的溶液,采用包埋法将厌氧污泥固定化。本文详细讨论了壳聚糖固定化厌氧污泥微球制备过程中的主要影响因素,提出了以壳聚糖为载体的固定化厌氧污泥微球的制备方法。     

磁性HRP的酶学研究

以磁性壳聚糖微球作载体对HRP进行固定化研究,同时为了便于比较,还用壳聚糖微球固定HRP.结果表明:磁性壳聚糖微球固定的HRP的理化性质优于壳聚糖微球固定的HRP,磁性酶因具有磁响应性,可方便、快速地从反应体系中分离.     

海藻酸钠固定化脂肪酶的制备及性质研究

本文采用海藻酸钠包埋法得到了固定化脂肪酶。通过条件优化得到了最佳固定化条件：海藻酸钠浓度1.5%,CaCl2浓度3%,固定化时间为1h。该固定化脂肪酶连续反应4批之后,酶活保持稳定,显示了较好的催化稳定性。     

甲醛改性壳聚糖固定酪氨酸酶的工艺研究

壳聚糖珠经戊二醛活化,再用甲醛对其表面进行改性后,用于固定酪氨酸酶。研究了戊二醛体积分数、甲醛体积分数、pH值以及给酶量对壳聚糖固定化酪氨酸酶活力的影响。同时,研究了壳聚糖固定化酪氨酸酶的性能。结果表明:甲醛改性壳聚糖固定化酪氨酸酶的最佳工艺条件为:戊二醛的体积分数为3％,溶液pH=8．0,甲醛体积分数为5％,给酶量为105 U／g载体。载体与戊二醛交联后,载体经甲醛处理再与酶反应,得到的固定化酶显示出很高的使用稳定性。     

高分子微球固定化脂肪酶的合成研究

本实验采用悬浮聚合法制备苯乙烯-二乙烯苯-马来酸酐（St—DVB—cBA）三元共聚高分子微球（0．26～0．33mm）,并用其作为脂肪酶的载体,进行脂肪酶的固定化。实验结果表明,制备固定化脂肪酶的相对最佳条件：脂肪酶加入量2．0mg,载体50mg,反应温度30℃E,反应时间6h,pH=7．0,最高固载率可达80．02％,酶活4150U／g载体。所制得的酶最佳催化条件：反应温度40℃,pH=7．38。     

磁性复合微球固定化脂肪酶的研究

用壳聚糖和二氧化硅共同包裹Fe3O4纳米粒子制得磁性高分子微球,并以此为载体,以戊二醛为交联剂固定化脂肪酶,探讨了固定化过程中戊二醛浓度、固定化时间、固定化pH对固定化酶活力的影响.结果表明,固定化脂肪酶的最佳条件:时间为10h,pH为7.5,戊二醛的浓度为8％.同时还对固定化酶与游离酶的最适温度和最适pH作了测定,固定化酶的最适温度为50℃,比游离酶的最适温度为40℃,提高了10℃;固定化酶的最适pH为7.0,与游离酶的最适pH7.5相比,向酸性偏移了0.5.     

胰蛋白酶固定化新工艺研究

我们以脱乙酰壳聚精为载体，明胶包埋，戊二醛为交联剂，对胰蛋白酶的固定化条件和固定化胰蛋白酶的性质进行了研究．本文报道的新工艺，是一种制备固定化胰蛋酶的理想方法．它兼有絮凝法迅速方便，包埋法成型容易和交联法强度大等优点．本文还就交联剂用量、明胶用量、ＰＨ值以及载体与酶的比例对固定化胰蛋白酶的影响进行了比较．在所选择的固定化条件下，固定化酶的活性回收率可达５６％以上．固定化酶的最适温度为６８℃，最适ＰＨ７．９，Ｋｍ值升高，热稳定性、ＰＨ贮存稳定性以及在乙醇溶液中的抗变性亦明显高于可溶性胰蛋白酶．在柱式反应器内，以２．５％酪蛋白为底物时操作半衰期为４６天左右。     

四氧化三铁吸附包埋固定辣根过氧化物酶及其应用

建立了Fe₃O₄吸附包埋固定辣根过氧化物酶,并与明胶、开孔明胶、海藻酸钠3种不同的固定化方法载体进行了比较,发现该固定化方法具有较高的固定效率。对固定化酶与自由酶的稳定性进行了比较,发现Fe₃O₄吸附包埋固定化HRP的稳定性高于其他固定化HRP和自由酶。此外,测定了不同戊二醛浓度、交联时间、给酶量、Fe₃O₄使用量及明胶浓度对 辣根过氧化物酶固定效果的影响。结果表明,固定化反应的最佳条件如下：最佳给酶量与Fe₃O₄用量比例约为95u HRP/g Fe₃O₄,最佳Fe₃O₄用量与凝胶比例为1.0g Fe₃O₄/10mL 10％～20％,最适戊二醛浓度和交联时间分别为0.5％和30min。在此条件下制备的辣根过氧化物酶 活性约为1.1u/g,酶活固定率约为15％。该固定化酶重复应用于PCP催化去除反应,可获得稳定的PCP去除率。