Cloning of lea cDNA fragment of carrot (Daucus carota L.) and analysis of its expression features

Addition of concentrated sucrose to MS culture arrests the development of carrot somatic embryo at the stage of cotyledon embryo and, with the sucrose concentration restored to normal level, the embryo thus arrested is reactivated into post-embryonic development. Using the method of RT-PCR, the cDNA fragment of a new member of the Dc3 family of lea has been obtained from carrot somatic embryo under regulated state. As revealed by Northern blotting, strong expression has been observed in carrot somatic embryo under regulated state but the expression was much reduced 12 h after deregulation, and nearly disappeared 24 h after. Based on this finding as well as results of related studies, it is surmised that changing the sucrose concentration in culture enabled carrot somatic embryo under suspension culture to undergo a specific course of development which is comparable to the dormancy-germination process of seeds.     

Cloning oflea cDNA fragment of carrot (Daucus carota L.) and analysis of its expression features

Addition of concentrated sucrose to MS culture arrests the development of carrot somatic embryo at the stage of cotyledon embryo and, with the sucrose concentration restored to normal level, the embryo thus arrested is reactivated into post-embryonic development. Using the method of RT-PCR, the cDNA fragment of a new member of the Dc3 family of lea has been obtained from carrot somatic embryo under regulated state. As revealed by Northern blotting, strong expression has been observed in carrot somatic embryo under regulated state but the expression was much reduced 12 h after deregulation, and nearly disappeared 24 h after. Based on this finding as well as results of related studies, it is surmised that changing the sucrose concentration in culture enabled carrot somatic embryo under suspension culture to undergo a specific course of development which is comparable to the dormancy-germination process of seeds.     

刺槐体细胞胚发生的同步化调控

为了建立一个高频率、同步化发生的体细胞胚培养系统,以二倍体刺槐为材料,对影响刺槐体细胞胚同步化发生的培养基渗透压、培养基中添加的植物生长调节剂、低温等培养环境条件以及悬浮培养结合看护培养方法进行了研究,建立了刺槐体细胞胚同步发生体系.结果表明:1)4 ℃低温条件下处理7 d的胚性愈伤组织,最有利于刺槐体细胞胚的同步化诱导,同步化率可达37.3%;2)培养基中蔗糖质量浓度为50 g/L最适宜调控刺槐的体细胞胚同步化发生,同步化率可达35.0%;3)培养基中的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D)质量浓度为0.1 mg/L时最适宜体细胞胚同步化的调控,体细胞胚发生的同步化率可达43.6%,同时对畸形胚的发生有较好的控制作用;4)将悬浮培养的胚性细胞用50目筛(孔径0.28 mm)过滤,将留在筛上的细胞团接种到铺有滤纸的半固体体细胞胚诱导培养基上(培养基为MS(Murashige & Skoog)+NAA(naphthylacetic acid)0.5 mg/L+ BA(benzyladenine)0.5 mg/L+2-吗啉乙磺酸(MES)500 mg/L+谷氨酰胺 500 mg/L+水解酪蛋白500 mg/L+蔗糖 30 g/L+琼脂3 g/L),培养21 d后,球形胚大量发生,占到总胚状体数目的67.3%.本结果可为其他植物种类的体细胞胚同步化调控研究提供参考.     

碳源对不同产地香樟体细胞胚胎发生及植株再生的影响

【目的】 探究渗透调节物质种类及其不同浓度对香樟体细胞胚胎发生及植株再生的影响,为提高香樟体胚诱导率、优化体细胞胚胎发生体系奠定理论基础。【方法】 以7月初在湖南省郴州、长沙、娄底及怀化市采集的香樟(Cinnamomum camphora L.)的未成熟合子胚为试验材料,分析不同碳源种类、浓度及组合方式对香樟体胚诱导、芽萌发、生根等方面的影响。【结果】 适合香樟的体胚诱导培养基为MS+1.0 mg/L的6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)+0.3 mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)+1.0 mg/L 链霉素+15 g/L 蔗糖+30 g/L 山梨醇+6.5 g/L 琼脂+700 mg/L水解酪蛋白;增殖培养基为MS+15 g/L 蔗糖+30 g/L 山梨醇+6.5 g/L 琼脂+700 mg/L 水解酪蛋白;芽萌发培养基为MS+0.1 mg/L 苯基噻二唑基脲(TDZ)+0.5 mg/L 萘乙酸(NAA)+0.1 mg/L 吲哚丁酸(IBA)+15 g/L 蔗糖+15 g/L 山梨醇+6.5 g/L 琼脂;生根培养基为MS+1.0 mg/L IBA+15 g/L 蔗糖+15 g/L 山梨醇+6.5 g/L 琼脂。【结论】 经过改良,添加15 g/L蔗糖和30 g/L山梨醇的组合碳源,香樟体胚的诱导率明显提高;添加15 g/L蔗糖和15 g/L山梨醇的组合碳源处理的新植株生根条数多、主根明显,生长状况更优。     

菜豆DnaJ-like基因组DNA片段的克隆及其表达分析

以PvSR6 cDNA编码一种菜豆DnaJ-like蛋白，并利用PCR的方法克隆出基因组部分序列。核苷酸列分析表明PvSR6基因在这段编码区无内含子；Southern blot分析表明菜豆基因组中存在多个PvSR6基因拷贝；Northern blot分析结果表明PvSR6是组成型表达蛋白，重金属Hg,Cd,和As，过量的Cu和Zn及受伤，高温，病毒侵袭和水杨酸等均能强烈地诱导其基因在叶片中的表达，表明DnaJ-like蛋白与植物的抗逆性有关。     

胡萝卜籽蛋白的提取工艺优化及性质研究

以胡萝卜籽为原料,采用碱提酸沉法对其中的蛋白质进行提取.通过单因素实验考察料液比、温度、pH值和时间对蛋白质提取率的影响,在此基础上通过正交实验优化出胡萝卜籽蛋白提取的最佳工艺条件,确定了胡萝卜籽蛋白最佳酸沉pH值,并对所提取的蛋白质功能性质进行了研究.结果表明:在料液比为1∶20、温度55℃、pH值为12.0、时间4 h的条件下,胡萝卜籽蛋白的提取率为42.23%,最佳酸沉pH值为4.5,吸水性为3.28 g·g~(-1),吸油性为3.09 m L·g~(-1),乳化性和起泡性相对较差.     

旱芹直播土壤人工种子及胚状体分化过程中的POD、PAL活性变化

旱芹（Apiumgraveolens）无菌苗子叶为外植体，在MS＋1．0mg／L2．4－D＋0．5mg／LKT上诱导产生愈伤组织，然后转入MS＋1．0mg／LABA诱导产生胚状体后用于人工种子包埋，在有菌土壤中获得7％左右的转株＄．当人工种子外面包裹一层酯类共聚物作外膜，并在人工胚乳中加入6％的麦芽糖和1％的活性炭后，使人工种子在有菌蛭石土中的转株率提高到51％．还测定了芹菜胚状体分化过程中的苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性、过氧化物酶（POD）活性、以及木质素和可溶性蛋白质含量的变化．POD及PAL的第二个活性峰在第八天前后出现，似可作为组织启动分化的标志酶．结果表明：PAL、POD活性，木质素合成和管状分子之间有紧密的相关性．     

胡萝卜抗冻蛋白基因的克隆及其在E.coli中的表达

对中国的一个胡萝卜品种进行了冷诱导前后幼苗总蛋白组成的比较、分析 ,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果表明两者在相对分子质量 36 0 0 0附近有一条蛋白带的差别。由此推测实验的胡萝卜品种在冷诱导过程中有抗冻蛋白 (AFP)表达。根据相关的研究结果设计引物 ,以胡萝卜幼苗基因组DNA为模板 ,通过PCR扩增得到了长 10 99bp的抗冻蛋白基因。测序结果表明其与GenBank公布的afp序列仅有 3个碱基的差别。将此抗冻蛋白基因克隆进大肠杆菌表达载体pGEX4T1,在IPTG的诱导下表达出了含有AFP的约 6 0 0 0 0的融合蛋白 ,证明该AFP基因在原核表达系统中可以正常表达     

超氧化物歧化酶在斑马鱼早期胚胎中的表达特点

以斑马鱼早期胚胎为研究对象，通过免疫组织化学的方法研究了超氧化物歧化酶（SOD）在斑马鱼体节分化时期的表达特点。结果发现：在体节分化的不同时期，SOD在脊索细胞的胞质部位有不同强度的表达；SOD在脑组织中表达较强，到孵化期，在大脑区域的表达略强于间脑区域。提示SOD不仅存在于成体的抗氧化防线中，在胚胎早期发育过程中以SOD为代表的酶性抗氧化系统就开始逐步建立，维持胚胎组织器官细胞中的正常活性氧浓度，确保胚胎的正常发育。     

中国七叶树悬浮培养体细胞球形胚的增殖与发育研究

以中国七叶树(Aesculus chinensis Bunge)的胚性愈伤组织为材料,进行悬浮培养诱导体胚增殖和发育研究。在MS+2,4D(3 mg/L)+NAA(1 mg/L)+KNO3(1.9 mg/L)+蔗糖(30 g/L)的液体培养基中可获得同步化程度较高的球形胚;采用MS+2,4D(2 mg/L)+KT(0.2 mg/L)+蔗糖(40 g/L)和MS+2,4D(3 mg/L)+BA(0.5 mg/L)+蔗糖(40 g/L),两种培养基均可使体细胞胚保持在球形胚阶段;而MS+TDZ(0.02 mg/L)+蔗糖(30 g/L)可有效解除对球形胚发育的阻遏,促使子叶胚的形成;建立了球形胚增殖和分化的两个悬浮培养体系,同时跟踪观测了液体培养基的pH变化,球形胚增殖方式和球形胚启动和发育动态,以及悬浮培养过程中体胚的形态结构变化。     

红皮云杉体胚发生体系优化和超低温保存技术研究

[目的]通过对红皮云杉(Picea koraiensis)体细胞胚胎发生条件的筛选和超低温保存技术研究,建立其完整的体胚发生体系及超低温保存条件,为红皮云杉优良种质资源的大量繁殖及保存提供基础.[方法]以红皮云杉合子胚为外植体,以两种基本培养基、6种植物生长调节剂组合为培养条件,筛选胚性愈伤组织诱导的适宜条件.并将获得...     

腹泻性贝毒在翡翠贻贝中的积累、排出及其对HSP70表达的影响

以利玛原甲藻(Prorocentrum lima)为饵料,通过室内滤食实验,考查了腹泻性贝毒(diarrheic shellfishpoisoning,DSP)在翡翠贻贝(Perna viridis)体内的累积与排出规律,分析了HSP70基因的表达与毒素累积与排出之间的关系.结果显示,翡翠贻贝暴露于产毒利玛原甲藻后,其滤食率显著下降,存在明显的剂量-效应关系.毒素积累阶段,翡翠贻贝鳃组织中DSP毒素显著增加,均明显高于对照组(P<0.05).停止染毒后,贻贝体内毒素含量显著下降.染毒后,随着毒素的累积,HSP70显著增加,并于第2天达到高峰.这些结果提示,翡翠贻贝对DSP毒素有一定的清除及耐受能力,HSP70基因的诱导表达可能是贻贝对DSP毒素胁迫的一种适应性反应,可能在贻贝抗DSP毒素中发挥重要作用.     

果蝇胚胎不同表达水平基因内含子序列特征的比较分析

对果蝇胚胎低表达和高表达水平基因内含子的序列结构进行分析,发现2种表达水平的基因内含子序列特征有明显差异.高表达基因的内含子一般比低表达基因的长,其中高表达基因第1内含子的平均长度是低表达基因的2.62倍,第2内含子的平均长度是低表达基因的1.79倍.两类基因第1内含子中的CpG岛含量最高,并且高表达基因内含子中CpG岛含量要高于低表达基因.此外,与低表达基因相比,TATA box、CAAT box和GC box在高表达基因内含子中出现的频数明显要高些,尤其是在第1内含子中.作者还提取出果蝇胚胎2种表达水平基因第1内含子中高频出现的6-mer简单重复序列,发现一些重复序列与实验得到的转录因子结合位点相符合.这些结果提示内含子特别是第1内含子有可能调控果蝇胚胎基因的转录从而影响基因的表达水平.     

高效的苜蓿组织培养再生体系的建立

以保定苜蓿为实验材料,从外植体的基因型、培养基的选择,激素(KT)、水解酪蛋白的浓度等方面探讨了影响保定苜蓿组织培养的因素.结果表明:下胚轴比子叶作为外植体获得的效果更好;改良的SH培养基相对于UM培养基对愈伤组织的诱导更有效;在含有0.2mg/L KT和2 g/L水解酪蛋白的UM培养基上,得到了最大的胚状体诱导率;水解酪蛋白的加入提高了胚状体的质量和成熟率.     

胡萝卜DcPS基因的克隆、进化及根发育中表达分析

补骨素合成酶(PS)是胡萝卜营养物质补骨素生物合成的关键酶.从'黑田五寸'胡萝卜中克隆得到DcPS基因,对其进行了进化和在胡萝卜根发育过程中表达水平分析.结果表明,DcPS基因长1518 bp,编码氨基酸505 aa,属于细胞色素P450超级基因家族.其氨基酸序列含有10个明显的特征,其中含有1个跨膜区,为亲水性蛋白....     

拟南芥Hsp40蛋白AtDjA5在大肠杆菌中的功能分析

通过分析大肠杆菌dnaJ缺失菌株在43℃下的生长表型, 发现AtDjA5及其J Domain能够功能性地替换DnaJ及其J Domain. 免疫共沉淀实验结果表明AtDjA5与DnaK存在相互作用. 由Western blot检测推测AtDjA5能够稳定大肠杆菌热激转录因子σ32并下调热激蛋白DnaK表达量. 这些发现说明AtDjA5在大肠杆菌中具有与DnaJ相似的功能.     

Induction of Apoptosis in Protoplasts and Suspension Cultures of Plant Cells

IntroductionApoptosisisacellularautodestructionprocessfortheactiveeliminationofunwantedcells[1].Apoptosishasbeenobservedinmanyanimaltissuesandwasfoundtoplayavitalroleinnormaldevelopment,maintenanceofhomeostasisandpathologicalprocessesassociatedwithvariousdiseases[2,3].Thereismoreandmoreevidenceshowingthatapoptosisalsooccursinhigherplants[4].However,comparedwiththeresearchinanimals,thestudyofapoptosisinplantsisstillinitsinitialstage.Ourstudyinvestigatestheapoptosis-inducingeffectsofsomeabiotic…     

Cloning, prokaryotic expression,purification and sequence analysis of 20S proteasome subunit gene from T.harzianum

The gene encoding the 20S proteasome subunit（PR29） was cloned from cDNA library of Trichoderma harzianum and expressed in Escherichia coli BL21 （D3） using a pET-28a expression system. The molecular weight of the protein was found to be approximately 29 kDa, as estimated by SDS-PAGE on gels. The target protein was insoluble when induced at 22℃ with 0.4 mmol/L IPTG, while dissoluble if induced at 37℃ with 0.8mmoL/L IPTG. The expressed product was purified through Ni-magnetic beads His Bind. The purity of the fusion protein reached above 80%. The entire eDNA sequence consisted of 1094 bp with 173 and 135 bp in 5＇ and 3＇ untranslated regions respectively. The gene encoding 261 amino acids has no signal peptide sequence. These results could provide a basis for validating the func-tions of PR29. It also provided a preliminary indication for further study of the mechanism and function of proteasome, and more information of proteasome mechanism in T.harzianum could be obtained.