3种化学诱导物对大鼠GST-P基因表达的影响及机理

大鼠谷胱甘肽Ｓ－转移酶Ｐ基因可被多种化学致癌物诱导表达,采用基因诱导实验,共转染报告质粒瞬时表达实验,凝胶阻滞实验和分子杂交实验探讨了３种化学物诱导ＧＳＴ－Ｐ基因表达的机理。     

人δ珠蛋白基因启动子区-64位C→T点突变对DNA结合蛋白的影响

用凝胶迁移改变实验研究了人δ珠蛋白基因启动子区－６４Ｃ→Ｔ点突变对ＤＮＡ结合蛋白的影响,人工合成两条３６ｂｐ该基因启动子区－８３－－４８ｂｐ之间的片段ＷＯＧ和ＭＯＧ,ＷＯＧ含有野生型“ＣＡＡＴ样盒”以及,ＭＯＧ含有变异型“ＣＡＡＴ样盒”。结果表明：（１）在红系细胞ＭＥＬ,ｋ５６２以及经Ｈｅｍｉｎ诱导的ｋ５６２细胞中,ＭＧ对ＣＣＡＡＴ结合蛋白和ＧＡＴＡ－１的要和力显著增加;（２）经Ｈｅｍｉｎ诱导的ｋ     

小麦黄花叶病毒72ku蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗血清制备

采用逆转录－ＰＣＲ方法,扩增获得小麦黄花叶病毒（ＷＹＭＶ）ＲＮＡ２上的７２ｋｕ蛋白基因,将其克隆到ｐＥＴ３０ａ（＋）上,构建了该基因的原核表达载体ｐＥＴＰ７２。ＳＤＳ－ＲＡＧＥ分析结果显示,经ＩＰＴＧ诱导,７２ｋｕ蛋白基因在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中得到高效表达。以含表达产物的凝胶作为抗原,免疫家兔,首次制备了小麦黄花叶病毒ＲＮＡ２７２ｋｕ蛋白特异性抗血清。     

TMV-RNA 非翻译区对外源基因在整体植物中表达水平的影响

利用ＧＵＳ基因及ＴＭＶ－ＲＮＡ非翻译区序列构建了４种ＧＵＳ基因的植物表达载体,即ｐＢＧ４３７,ｐＢＧ４３８,ｐＢＧ４４０和ｐＢＧ４４０△ＮＯＳ。在这４种表达载体中带双增强子的３５Ｓ启动子的下游分别由ＧＵＳ－ＮＯＳ,Ω－ＧＵＳ－ＮＯＳ,Ω－ＧＵＳ－３’ＵＴＲ－ＮＯＳ和Ω－ＧＵＳ－３’ＵＴＲ组成４个不同的表达框架。转基因烟草ＧＵＳ活性检测表明,转ＰＢＧ４４０植株的ＧＵＳ活性是转ｐＢＧ４３７的５倍,是转     

PKC对HeLa细胞G1/S期进程调控及其机理的研究

研究了ＰＫＣ活性变化对ＨｅＬａ细胞Ｇ１／Ｓ期进程的影响及其作用机理,结果表明：（１）ＨｅＬａ细胞Ｇ１期ＰＫＣ活性的变化影响其Ｇ１／Ｓ期进程,其中Ｇ１期ＰＫＣ活性升高促进Ｇ１／Ｓ期进程,而ＰＫＣ活性降低显著抑制Ｇ１／Ｓ期进程;（２）ＰＫＣ的刺激剂ＴＰＡ促进早期应答基因ｃ－ｍｙｃ与ｃ－ｊｕｎ的表达,ＰＫＣ的抑制剂ＧＦ－１０９２０３Ｘ抑制其表达;（３）ＨｅＬａ细胞Ｇ１／Ｓ期进程中,ＴＰＡ作用促进Ｇ１期Ｃ     

35ku的PF18-3分子在小鼠胸腺细胞凋亡亚群上的特异表达

ＰＦ１８－３抗体是一株大鼠抗小鼠胸腺基质细胞单克隆抗体。在以往的共培养研究中发现该抗体可抑制小鼠胸腺树突状细胞系（ＭＴＳＣ４）诱导的胸腺细胞凋亡作用。目的是观察ＰＦ１８－３抗体识别分子（ＰＦ１８－３分子）的特点及其在ＭＴＳＣ４诱导的胸腺细胞凋亡中的作用。利用流式细胞仪对ＰＦ１８－３分子的表达进行了特性分析，发现ＰＦ１８－３分子除表达于ＭＴＳＣ４表面外，还表达于ＣｏｎＡ活化的胸腺细胞上，但新鲜胸腺细     

高粱psbA基因启动子“-35”元件的突变效应

应用化学合成的２０ｎｔ寡核苷酸引物,诱导高粱ｐｓｂＡ基因启动子“－３５”元件（ＴＩＧＡＣＡ）中的第１位Ｔ碱基和第３位Ｇ碱基发生突变,获得３个突变体ＡＴＴＡＣＡ,ＧＴＧＡＣＡ和ＡＴＧＡＣＡ,在菠菜叶绿体蛋白质提取物系统中,检测突变的及野生型的高粱ｐｓｂＡ基因启动子与蛋白质的结合能力。凝胶阻滞实验结果表明,野生型的具有很强的蛋白质结合条带,单碱基突变的ＡＴＧＡＣＡ和ＧＴＧＡＣＡ的蛋白质条带的强度明显下     

血管生成抑制因子TSF的设计、表达及其对血管生成的抑制效应

ＰＦ４的Ｃ－末端１３肽和ＴＳＰ１的４２９～４５９片段３１肽通过Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ肽桥设计为融合蛋白ＴＳＦ．采用ｐＧＥＸ－２Ｔ载体在 Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９中获得了 ＴＳＦ蛋白的高效表达．采用 ＭＴＴ方法、损伤细胞迁移实验。鸡胚绒毛尿囊膜实验和小鼠移植肿瘤抑制实验,测定了ＴＳＦ及其相关物ＧＳＴ－ＴＳＦ,ＰＦ４（５８－７０）,ＴＳＰ１（４２９～４５９）等对血管生成和肿瘤生长的抑制效应．结果显示ＴＳＦ特异抑制小牛主动脉血管内皮细胞的生长,并有明显的剂量依赖关系;非常显著抑制血管内皮细胞的运动迁移;显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管生成;上述抑制活性ＴＳＦ＞＞ＧＳＴ－ＴＳＦ＞ＰＦ４（５８～７０）＞ＴＳＰ１（４２９～４５９）．ＴＳＦ显著抑制小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌的生长,１．０μｍｏｌ／ｋｇ·ｄ的ＴＳＦ对Ｌｅｗｉｓ肺癌的抑瘤率达到６８．７５％．结果说明ＴＳＦ的重组设计是成功的,ＴＳＦ为一个人工重组的有效的血管生成抑制因子．     

人脑胶质细胞瘤分化相关基因GDR1全长cDNA的克隆和鉴定

人脑胶质细胞瘤是严重危害人类健康的一类恶性肿瘤,选用在ＤＤＲＴ－ＰＣＲ研究中获得的１９个代表新基因的ＥＳＴ之一设计筛库引物,在人ＣＤＮＡＹ语文加中筛出一长度为１５３５ｂｐ的ＣＤＮＡ克隆,其开放读码框码３３４个氨基酸,与已知蛋白无明显同源性属一新发现的ＧｅｎＢａｎｋ接受号为ＡＦ０６８１９５．ＲＴ－ＰＣＲ显示该 物在分化后的ＢＴ－３２５中的表达量明显高于分化前的细胞,暗示该蛋白可能与脑     

p53的过量表达能迅速诱导NIH3T3细胞衰老

将温度敏感型ｐ５３（ｐ５３Ｖａｌｌ３５）基因导入ＮＩＨ３Ｔ３细胞进行过量表达,发现在温度敏感型ｐ５３的活性温度（３２℃）下培养,ＮＩＨ３Ｔ３细胞迅速表现出与衰老相关的形态特征和生化特性,这可能是Ｐ５３过量表达激活了ＮＩＨ３Ｔ３细胞内在的衰老机制从而诱导细胞进入衰老状态。     

一个猪免疫球蛋白 IgG H 链基因的克隆、序列分析及表达

用ＲＴ－ＰＣＲ方法从猪脾脏中分离到于段１４２５ｂｐ的ＤＮＡ片段,该片段编码免疫球蛋白基因。经全序列分析证明此片段与前人报道的序列有较高同源性,其Ｃ区属于猪Ｉｇγ链基因亚类３。用ＥｃｏＲＩ和ＮｓｉＩ切点将该片段切焉插入ｐＥＴ－３ｂ（ＮＳＥＢ）（－＿中,表达出约５２ｋｕ的蛋白质,表达量约为２１％。     

人神经元电压门控钙通道γ-3基因的克隆

将小鼠Ｃａｃｎｇ２基因的编码区与ＥＳＴ数据库进行同源性分析，得到一个与小鼠Ｃａｃｎｇ２基因在 ４３５ ｂｐ中有 ７５％同源的 ＥＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ： Ｗ２９０９５）．在该 ＥＳＴ中设计引物与 ｃＤＮＡ文库载体臂上引物行巢式 ＰＣＲ和 ＲＡＣＥ反应，在人脑前叶皮质 ｃＤＮＡ文库和人脑 Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ中获得 ｃＤＮＡ序列 １５４５ ｂｐ，其中包含一个 ９４８ ｂｐ的可读框，编码 ３１５个氨基酸．该可读框经确证命名为 ＣＡＣＮＧ３．ＣＡＣＮＧ３基因与大规模测序中定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１的ＢＡＣ克隆ＡＣ００４１２５完全一致，从而将该基因定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１，并由此获得它的基因组结构，编码区由４个外显子组成．经ＲＴ－ＰＣＲ分析，ＣＡＣＮＧ３在成人脑和胎脑有表达．运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ在视网膜色素变性家系、视网膜色素变性伴耳聋和癫痫家系进行突变检测，未检测到突变．     

肝部分切除及表皮生长因子迅速诱导PC3基因的表达

２／３肝部分切除后数小时内早期反应基因的表达在肝细胞由Ｇ０到Ｇ１期转变和Ｇ１期进程中起关键作用,利用表达性差异显示分析技术研究了２／３肝部分切除后１ｈ的基因表达差异,序列分析揭示一种由神经生长因子（ＮＧＦ）诱导产生的瞬时早期反应基因ＰＣ３基因可能与肝再生调控有关,进而以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交证实２／３肝部分切除可迅速诱导ＰＣ３基因的表达,其表达高峰为术后１～２ｈ,ＥＧＦ在原代培养大鼠肝细胞体系中可迅     

大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因克隆及其原核表达载体构建、表达

通过ＰＣＲ方法克隆出大肠杆菌株Ｈ－３０的胞嘧啶脱氨酶基因，并将其起始密码子ＧＴＧ突变为ＡＴＧ，构建了ＣＤ基因的原核重组表达载体ＰＢＶ２２０－ＣＤ，通过测定胞嘧啶脱氨酶活性筛选出ＣＤ高表达活性克隆Ｈ－３０ＣＤ－１１５－氟胸嘧啶对ＣＤ活性克隆有杀灭毒性，ＤＮＡ序列分析显示ＣＤ高表达活性克隆Ｈ－３０－ＣＤ－１１较基因文库中所报道的ＣＤ基因存在１６个位点碱基改变，引起肽链中氨基酸改变的位点有５人。     

膜基质金属蛋白酶和金属蛋白酶抑制因子-1 在早期胎盘中的表达及其功能的研究

用原位杂交方法研究了人早期胎盘中膜型金属蛋白酶（ＭＴ－ＭＭＰ－１）和金属蛋白酶抑制因子－１（ＴＩＭＰ－１）的分布。结果表明：（１）在绒毛滋养层细胞和与其邻近的蜕膜细胞中ＭＴ－ＭＭＰ－１和ＴＩＭＰ－１的表达量相对较高;（２）在基底盘,Ｒｏｈｒｓ和Ｎｉｔａｂｕｃｈ纹间的外绒毛膜滋养细胞,滋养层和蜕膜的腺体细胞表达最高;（３）胎膜分离层和绒毛干的少量细胞滋养层细胞以及蜕膜和绒毛干的血管壁上有明显的ＭＴ－     

肿瘤基因预防——一个超前的话题

肿瘤发生是遗传因素与环境因素相互作用的结果. 通常认为,在环境因素中,化学致癌物是主要的危险角色. 因此,从预防角度考虑,防癌的途径主要有两条: 其一是不接触环境化学致癌物. 但这是不可能的, 人们只能做到在日常生活中尽量少接触致癌物. 其次,通过靶基因干预或调节. 致癌物进入机体后都是通过直接或间接方式损伤基因、蛋白质等生物大分子的结构和功能,进而破坏代谢系统和细胞功能达到致癌作用的,因而通过靶基因的直接干预或调节作用,有可能对抗致癌物的作用,预防细胞癌变和肿瘤发生,此即肿瘤的基因预防概念.     

反义技术分离筛选抑制Vero细胞非定标性突变的cDNA片段

甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）可诱发猴肾Ｖｅｒｏ细胞的遗传不稳定,在发生表达改变的表达序列标识（ＥＳＴ）中,筛选到１个片段（片段９）,它的相关基因表达被阻断后,ＭＮＮＧ诱发的非定标突变率显著增高（Ｐ〈０．０５）。表明其相关基因的编码产物具有维持遗传稳定性,抑制哺乳类细胞非定标突变发生的功能。     

孤儿受体TR3 mRNA在大鼠卵泡中的表达和定位

采用原位杂交方法,研究了孤儿受体ＴＲ３ｍＲＮＡ在大鼠卵泡早期发育过程中的定位,结果ＴＲ３ｍＲＮＡ首先在出生后２ｄ（Ｄ２）的卵巢间质细胞中表达;随后在出生后４ｄＤ４）的初级卵泡颗粒细胞（ＧＣ）中表达,ＴＲ３ｍＲＮＡ在ＧＣ的表达随卵泡的发育而增另,在Ｄ６其高量表达逐渐转至ＧＣ外层和膜细胞（ＴＣ）内层,这种表达方式一直维持到小窦状卵泡期（Ｄ１０￣１６）,在Ｄ３０９某些小窦状卵泡的ＧＣ内层又有较高量的表达     

抑制衰老的嵌合基因在水稻中的转化

利用基因枪法把带有特异衰老基因ＳＡＧ１２启动子的ＩＰＴ基因导入水稻,经ＰＣＲ,点杂交以及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析,证明外源基因已整合到水稻基因组中,通过ＧＵＳ活性细胞分裂素含量的分析以及Ｔ１代转基因植株成熟期的形态观察,证明此抑制衰老的自我调节系统在部分转基因水稻中表达,叶片衰老受到明显的抑制。     

人神经元电压门控钙通道 γ -3基因的克隆

将小鼠Ｃａｃｎｇ２基因的编码区与ＥＳＴ数据库进行同源性分析,得到一个与小鼠Ｃａｃｎｇ２基因在４３５ｂｐ中有７５％同源的ＥＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ：Ｗ２９０９５）。在该ＥＳＴ中设计引物与ｃＤＮＡ文库载体臂上引物行巢式ＰＣＲ和ＲＡＣＥ反应,在人脑前叶皮质ｃＤＮＡ文库和人脑Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ中获得ｃＤＮＡ序列１５４５ｂｐ,其中包含一个９４８ｂｐ的可读框,编码３１５个氨基酸。该可读框经确证命名为ＣＡＣＮＧ３