哮喘患者肺泡巨噬细胞中IL－6mRNA表达的研究

应用逆转录酶链反应及索氏转移杂交技术分析过敏性支气管哮喘患者（激素治疗组９例，非激素治疗组１２例）及正常对照组（１０例）肺泡巨噬细胞（ａｌｖｅｏｌａｒｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ，ＡＭ）中白细胞介素一６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６，ＩＬ－６）的ｍＲＮＡ表达。ＩＬ－６／β－ａｃｔｉｎ比值表示。结果发现未用激素治疗的哮喘患者ＡＭ的ＩＬ－６／μ－ａｃｔｉｎ为０．６６±０．３２，显著高于正常对照者（０．３４±０．１３，Ｐ＜０．０１）及激素治疗组（０．４１±０．１５，Ｐ＜０．０５）。提示表达ＩＬ－６的ＡＭ在哮喘的发病机理中可能具有重要的作用，而皮质激素治疗哮喘的机制之一可能与其抑制ＡＭ表达及产生ＩＬ－６的能力有关。     

子宫内膜异位症大鼠子宫内膜白细胞介素-6 mRNA表达的变化

目的：探讨大鼠子宫内膜异位症（内异症）发生、发展过程中子宫内膜白细胞介素－6（IL－6）mRNA表达的变化。方法：利用大鼠内异症动物模型，采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术，检测子宫内膜白细胞介素－6（IL－6）mRNA表达情况。结果：正常对照组，各时间点间2、4、6和8周）IL－6mRNA表达无显著性差异（P＞0．05）。内异症模型组，在成模后2、4、6和8周其在位、异位子宫内膜IL－6mRNA的表达呈增高趋势（P＜0．01）。结论：IL－6mRNA可能与内异症的进展有关。     

非小细胞肺癌患者血清IL-6、IL-18的变化

本文探讨非小细胞肺癌患者血清IL-6、IL-18水平的变化及临床意义。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA),对30例非小细胞肺癌患者及30名正常人血清IL-6、IL-18水平进行测定。结果非小细胞肺癌患者血清IL-6、IL-18水平均低于正常人对照组。得出非小细胞肺癌患者免疫功能低下的结论。     

脑血管疾病患者IL—6基因调控区－174G／C多态性研究

目的：观察73例脑血管疾病患者的IL—6基因调控区—174位点的多态性与疾病的相关关系。方法：PCR扩增、限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)分析和DNA序列测定，认识IL—6基因调控区—174位点的多态性；同时ELISA定量分析73例脑血管病患者和16例正常人血清白细胞介素—6含量。结果：73例脑血管疾病患者比—6基因调控区—174位均为GG型；血清白细胞介素—6水平升高，与正常人血清对比，差异显著。结论：73例脑血管疾病患者末发现IL—6基因调控区—174位点的基因变异。     

猪白细胞介素-6基因的原核表达及其活性研究

用DNA重组技术，将已克隆的猪IL－6 cDNA片段插入pGEX-1λT质粒，转化大肠杆菌，以BamHI和Pst I酶切鉴定重组子，以IPTG诱导融合蛋白表达，并作RT－PCR及SDS－PAGE分析表达情况，从聚丙烯酰胺制备凝胶中回收融合蛋白，用MTT法测定重组蛋白刺激小鼠脾淋巴母细胞增殖反应的活性，并免疫家兔制备高免血清，得到高效表达猪IL－6的质粒pGPIL-6,RT-PCR确证pGPIL-6在大肠杆菌中能正确转录，经SDS－PAGE分析表达蛋白分子量为49kD，融合蛋白具有较高的促小鼠淋巴细胞增殖反应活性，以此免疫家兔，可制备滴度为1：128 000的兔高免血清。     

IL-5与支气管哮喘关系的研究

白细胞介素-5(IL-5)是细胞系特异性的细胞因子,它通过调节噬酸性粒细胞活化、聚集、脱颗粒等参与哮喘的发生和发展,为此,对近几年IL-5在哮喘方面的研究做一综述.     

竞争性RT-PCR检测哮喘患者IL-8表达水平

利用反向ＰＣＲ法,缺失人ＩＬ－８ｃＤＮＡ内部ｂｐ６邓列,构建得到ＩＬ－８突变内标分子。用已知最的该内标分子,通过竞争性ＲＴ－ＰＣＲ法,检测支气管哮喘患者外周血ＩＬ－８基因的表达情况,发现患者Ｌ－８ｍＲＮＡ的表达水平明显高于正常人对照组,这一结果初步表明,利用竞争性ＲＴ－ＰＣＲ技术对支气管哮喘患者进行早期基因诊断,具有一定的可行性。     

猪淋巴细胞白细胞介素-6(PIL-6)基因的克隆和序列分析

将猪外周血淋巴细胞进行体外培养，在Con A的刺激下培养48h后，提取培养的淋巴细胞总RNA，应用RT－PCR扩增猪淋巴细胞白细胞介素－6基因（PIL－6），并克隆到pUC18载体测序。结果发现，PIL－6的cDNA长度为741bp，开放阅读框为636bp，编码212个氨基酸，分子量24kD，等电点5.5；其46－129bp编码PIL－6的信号肽序列，130－681编码PIL－6成熟肽的序列。     

戊四氮致痫大鼠脑脊液IL-1β、IL-6含量的变化

目的 :探求细胞因子中的白细胞介素 1β(Interleukin - 1β ,IL - 1β)、白细胞介素 6(Interleukin -6,IL - 6)与癫痫发病机理的关系。方法 :将Wistar大鼠分成 3组 ,第一组戊四氮致痫组 (实验组 ) ,第二组生理盐水组 ,第三组正常对照组 ;然后运用双抗体夹心ELISA法 ,对各组大鼠的脑脊液中IL - 1β、IL - 6的量进行测定及分析。结果 :第一组与第二组、第三组相比较均有显著差异 (P <0 .0 1) ,而第二、三组之间无明显差别 (P >0 .0 5 )。结论 :IL - 1β、IL - 6与癫痫发病密切相关     

乙肝病毒感染者血清IL-2、IL-6、TNF-α测定及临床意义

病毒性肝炎是由肝炎病毒所致的一种消化系统的传染病 ,是威胁人类生命健康的主要疾病之一。其中慢性乙型肝炎 ,慢性乙型重型肝炎 ,乙型肝炎肝硬化尤为突出。然而无论是哪种类型肝炎的发病无不与机体免疫应答状态 ,免疫调节功能失调密切相关。本文对乙肝病毒感染者血清白细胞介素 2 (IL - 2 ) ,白细胞介素 6(IL- 6)和肿瘤坏死因子a(TNF -a)进行检测 ,结果乙肝病毒感染者IL- 2水平明显低于健康对照组 (P<0 .0 0 1 ) ,而且HBeAg阳性与抗—HBe阳性之间也存在显著差异(P <0 .2 5) ,IL - 6在乙肝病毒感染者血清中水平显著高于健康对照组 (P <0 .0 0 5) ,HBeAg阳性与抗-HBe阳性之间差异不显著 (P <0 .0 5)。提示机体IL - 2水平的高低与对乙肝病毒感染的敏感性及预后有高度的相关性。IL - 6和TNF -a在病毒感染后产量增加 ,具有免疫调节 ,参于炎介反应等重要作用。     

绵羊肺泡巨噬细胞的分离培养和形态学观察

从绵羊肺组织中分离肺泡巨噬细胞进行原代培养,通过台盼蓝拒染试验和鸡红细胞吞噬试验检测肺泡巨噬细胞活力。利用电子显微镜对原代培养的巨噬细胞进行形态学观察。结果表明,本试验采用的方法适合分离培养绵羊肺泡巨噬细胞,活细胞数能达到90％以上。能为开展细胞病理学和细胞内寄生菌存活机理研究提供很好的试验材料。     

哮喘小鼠骨髓DC细胞因子mRNA的分析

通过体外诱导和扩增小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),研究其中的细胞因子mRNA表达,探讨DC在哮喘中可能的作用机制.为此,利用rmGM-CSF和rmIL-4体外诱导骨髓细胞分化为DC,采用多探针模板的核酸酶保护分析检测骨髓来源的DC中细胞因子mRNA的转录.结果表明,在两种细胞因子的作用下,从骨髓中可以诱导出大量的DC;核酸酶保护分析显示骨髓来源的DC中有IL-13,IL-9和IL-3mRNA的转录,并且哮喘组表达IL-13mRNA和IL-9mRNA的相对水平与对照组相比有明显的差异性,P<0.05;而IL-3mRNA的表达在两组鼠中的表达水平没有差异性,P>0.05.可以认为DC在哮喘的形成和发展中起重要作用,提示了靶向于DC的治疗可能成为哮喘治疗的新目标.     

中国白兔IL-6基因的分子克隆及其表达研究

运用RT-PCR技术对用ConA刺激的中国白兔外周血淋巴细胞(PMBCr)进行了扩增,将纯化后的PCR产物克隆入pMD18-T中进行核苷酸序列测定.结果中国白兔IL-6基因全长726 bp,编码242个氨基酸,其中前26个氨基酸残基构成信号肽序列.与不同物种IL-6基因相比,核苷酸和推导的氨基酸序列有一定的差异.在推导的中国白兔IL-6氨基酸序列中,在108-110位存在1个潜在的N-联糖基化位点,同时存在9个Cys残基.将pTIL-6双酶切,回收目的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中构建了重组质粒pETIL-6,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行了诱导.结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为29.5kDa的重组目的蛋白.经凝胶薄层扫描,目的蛋白表达量可占菌体蛋白的16.2%.     

重组人白细胞介素6工程菌的表达和功能初探

自人外周血的mRNA中获得了白细胞介素6(Interleukin-6, IL-6)cDNA,基因被克隆并在大肠杆菌中表达,在20L发酵罐中每L发酵液可得60g湿菌体,IL-6的表达量约占大肠杆菌全蛋白的30%以上,占包含体蛋白的60%。纯化产物在长期,急性毒性和三致实验正常的基础上,用恒河猴的功能实验表明,在不制造血象降低模型的情况下,仍能明显增加血液中血小板和白细胞的数量。     

人白介素-6表达质粒的构建及在酿酒酵母中的表达

将带有哺乳动物细胞信号肽的人白细胞介素-6(hIL-6)基因片段构建到大肠杆茵-酵母细胞穿梭型质粒pYES2中，获得表达质粒pYES2-hIL-6。另外，将表达质粒pYES2-hIL-6转化到酿酒酵母细胞DBY747中，并将获得的转化子在含2％乳糖的YP培养基中培养到OD600=1．0左右，后用2％的半乳糖进行了诱导表达。结果发现，在培养上清中发现人白介素-6的分泌。     

小鼠IL—6基因的克隆及表达载体的构建

采用常规的分子生物学技术,从小鼠骨髓细胞中克隆了含信号肽序列的IL－6,并构建了表达载体,序列分析表明所克隆的IL－6序列与献已报道的一致,构建的表达载体经鉴定正确。