芝麻过敏原的生物信息学分析

通过DNAstar和IEDB等生物信息学软件对7种芝麻过敏原的生物学信息进行分析,采用多种方案对芝麻过敏原的抗原指数、亲水性、表面可及性、柔韧性等参数及其二级结构进行预测,并对预测的抗原表位综合分析．利用SWISS-MODEL进行同源建模并用拉氏图评价其结构稳定性．结果表明,7种芝麻过敏原蛋白均存在多个可能的抗原表位,采用同源建模的方式成功构建了芝麻过敏原蛋白的三级结构模型,拉氏图显示该模型的构象稳定．本研究为制备特异性抗体肽段和过敏原检测等提供了依据．     

鸡卵黄抗体技术在5种草莓病毒快速检测中的应用

利用生物信息学技术对草莓轻型黄边病毒(SMYEV)、草莓斑驳病毒(SMV)及草莓皱缩病毒(SCV)等5种病毒抗原表位进行预测,将预测的抗原肽段及串联表位肽段的DNA片段在大肠埃希氏菌(Escherichia) BL21(DE3)进行原核表达,并将纯化后的抗原表位肽免疫京红一号产蛋鸡.从免疫蛋鸡卵黄中分离卵黄抗体(IgY),并对其进行抗体活性、效价及灵敏度的分析.结果表明,预测到的优势抗原表位肽段分别位于5种草莓病毒外壳蛋白氨基酸序列的27-38、49-82、288-314、62-75、218-238位. 5种优势抗原表位肽及其串联抗原表位肽(5S)均能在Escherichia BL21(DE3)中成功表达. 5S免疫蛋鸡产生的IgY对于5种草莓病毒均具有较强的免疫活性,抗体滴度为1∶1 600,检测灵敏度为10ng.本研究制备的串联抗原表位重组蛋白能诱导蛋鸡产生具有较强免疫活性的IgY抗体,可用于SMYEV、SMV及SCV等5种草莓病毒的同时检测.     

烟曲霉Asp f3和Asp f4的表达纯化与多克隆抗体的制备

侵袭性曲霉病以烟曲霉在肺部定植、侵袭为主,具有较高的致死率.治疗侵袭性曲霉病的关键是早期确诊.目前临床上用于诊断侵袭性曲霉病的血清学方法是检测血清中半乳甘露聚糖循环抗原的GM试验,在敏感性和特异性方面存在局限性.为了用抗重组蛋白多克隆抗体鉴定和分析烟曲霉Asp f3和Asp f4特异性和曲霉广谱性表位,构建检测可疑血清样本中相应抗体的表位嵌合肽,以诊断侵袭性曲霉病.本研究表达纯化了烟曲霉Asp f3和Asp f4重组蛋白,制备了IgG抗体滴度均在1.28×106以上的高滴度的兔抗重组蛋白多克隆抗体.     

构建重组人CatSperl特异抗原原核表达载体

目的:构建重组人Catsper1特异抗原(含胞外区、钙选择孔区和破伤风类毒素通用T细胞表位TT580-590)原核表达载体并表达重组抗原.方法:设计引物,以RT-PCR法扩增人CatSper1的整个跨膜区DNA片段,利用重叠PCR方法合成重组人CatSper1特异抗原DNA片段,并插入到pET-21b和pET-21b-Trx(硫氧还蛋白)的原核表达载体.测序鉴定后转化工程菌株E. coli BL21(DE3)进行诱导表达,并纯化表达的重组蛋白.用TricineSDS-PAGE和Western blotting分析重组蛋白的表达情况.结果:成功构建pET-21b-Catsper1特异抗原和pET-21b-Trx-Catsper1特异抗原原核表达载体,并在BL21(DE3)中诱导表达重组蛋白.Tricine-SDS-PAGE和Western blotting鉴定表明,已获得重组人CatSper1特异抗原包涵体和纯化的可溶重组Trx-Catsper1特异抗原.结论:成功在原核表达系统表达重组人Catsperl特异抗原.     

GFAP单克隆抗体制备及ELISA检测方法研究

制备抗胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)单克隆抗体,并尝试建立双抗夹心ELISA检测方法,为出血性脑卒中早期诊断提供基础材料.用重组人GFAP作为抗原免疫BALB/C小鼠,通过杂交瘤技术制备抗GFAP单克隆抗体;用HRP标记单克隆抗体,ELISA和Western blot检测抗体的亚类、表位和特异性;采用ELISA技术制备GFAP检测试剂盒.获得了7株抗GFAP单克隆抗体,抗体亚类为Ig G2或Ig G1,抗体特异性好.抗体配对成功,ELISA检测重组人GFAP灵敏且稳定.     

人免疫缺陷病毒2型（HIV—2）穿膜蛋白基因片段克隆表达

以人免疫缺陷病毒２（ＨＩＶ－２）的原病毒基因组为模板,通过套式ＰＣＲ扩增得到了ＨＩＶ２的一段特异性膜抗原蛋白基因片段;随后将此片段克隆入诱导表达载体ｐＧＥＸ－５Ｘ－１,获得了重组表达质粒ｐＧＥＸ３６－ＥＮＶ．ＩＰＴＧ对重组表达菌株诱导后,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示重组菌株有特异性表达蛋白带产生。     

重组人普兰林肽原核表达载体的构建及表达

目的构建人普兰林肽基因原核表达载体,并诱导其在大肠杆菌中大量高效表达。方法将胰淀素25位的丙氨酸、28位的丝氨酸和29位的丝氨酸用脯氨酸代替,选用大肠杆菌偏爱的密码子对天然胰淀素碱基序列进行修饰,通过化学合成的方式合成了普兰林肽基因片段,经Kpn I、Hind III双酶切后插入p ET-39b(+)载体,构建p ET-39b+[Pramlintide]重组质粒,转化BL21(λDE3)菌株,筛选重组子,并经IPTG诱导重组蛋白表达。结果构建的普兰林肽基因插入载体位置正确,且序列测定结果与预期一致;在37℃条件下,经0.1 mmol/L IPTG诱导后3 h,重组蛋白表达量最高,且重组蛋白主要存在于胞质蛋白中。结论成功构建重组人普兰林肽原核表达载体,并诱导其在大肠杆菌得以表达,为进一步工业化制备普兰林肽奠定了基础。     

人免疫缺陷病毒2型(HIV-2)穿膜蛋白基因片段克隆表达

以人免疫缺陷病毒２（ Ｈ Ｉ Ｖ２） 的原病毒基因组为模板,通过套式 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增得到了 Ｈ Ｉ Ｖ２ 的一段特异性膜抗原蛋白基因片段;随后将此片段克隆入诱导表达载体ｐ Ｇ Ｅ Ｘ５ Ｘ１ ,获得了重组表达质粒ｐ Ｇ Ｅ Ｘ３６ Ｅ Ｎ Ｖ． Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ 对重组表达菌株诱导后, Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 结果显示重组菌株有特异性表达蛋白带产生     

构建重组人CatSper1特异抗原原核表达载体

目的:构建重组人Catsper1特异抗原(含胞外区、钙选择孔区和破伤风类毒素通用T细胞表位TT580-599)原核表达载体并表达重组抗原。方法:设计引物,以RT-PCR法扩增人CatSper1的整个跨膜区DNA片段,利用重叠PCR方法合成重组人CatSper1特异抗原DNA片段,并插入到pET-21b和pET-21b-Trx(硫氧还蛋白)的原核表达载体。测序鉴定后转化工程菌株E.coliBL21(DE3)进行诱导表达,并纯化表达的重组蛋白。用Tricine-SDS-PAGE和Western blotting分析重组蛋白的表达情况。结果:成功构建pET-21b-Catsper1特异抗原和pET-21b-Trx-Catsper1特异抗原原核表达载体,并在BL21(DE3)中诱导表达重组蛋白。Tricine-SDS-PAGE和Western blotting鉴定表明,已获得重组人CatSper1特异抗原包涵体和纯化的可溶重组Trx-Catsper1特异抗原。结论:成功在原核表达系统表达重组人Catsper1特异抗原。     

负载野生型p53抗原肽HLA-A~*2402四聚体的制备和鉴定

目的:制备负载野生型p53抗原肽的HLA-A*2402四聚体,用于检测卵巢肿瘤患者p53特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)。方法:在p53125-134抗原肽TYS和轻链β2微球蛋白存在时,利用稀释法复性获得负载p53125-134抗原肽(TYSPALNKMF,TYS)的可溶性单体,经生物素酰化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4∶1的比例混合形成HLA-A*2402/TYS四聚体,以流式细胞仪检测特异性CTL的频率。结果:流式细胞术分析显示,卵巢癌患者外周血中可检测减低频率的p53125-134TYS抗原肽特异性CTL。结论:成功制备HLA-A*2402/TYS四聚体。     

基于STM32的STC单片机脱机下载器的设计与实现

为了解决STC单片机程序快速高效升级的问题,提出了基于STM32的STC单片机脱机下载器的方案.用SD卡做为存储介质,存储目标程序文件.在STM32上实现STC单片机的ISP下载协议,将SD中的程序文件下载到目标板中.介绍了下载器的硬件原理、STC单片机下载协议和下载器的软件设计方法.     

面向建筑能源系统的物联网通用网关设计与实现

基于STM32处理器设计了一款具有自配置功能的通用物联网网关,实现了感知层传感网与数据中心服务器之间的协议转换、数据交互等功能.该网关首先通过RS485现场总线实现建筑能耗信息的采集,然后将其以XML文件的形式存储在SD卡中,最后通过以太网的TCP协议将能耗信息上传至服务器中.实际工程项目应用结果表明,该网关能够稳定可靠地运行,满足建筑能源系统物联网对数据采集与传输的需求.     

基于STM32F103的电子相框的设计

基于STM32F103的电子相框系统读取SD卡中的图像文件通过LCD屏幕将其显示。系统主要由SD驱动、LCD驱动和功能控制模块组成。SD驱动主要由SD接口驱动程序、FAT文件操作程序组成;LCD驱动主要由LCD屏驱动芯片的驱动程序和图片显示程序组成;功能控制模块包括了系统初始化,显示的时间、显示方式的设置,驱动程序调用等功能,功能控制模块是系统的主模块。在介绍了文件系统与图像操作的基础上逐步说明了整个系统的实现。文件系统支持FAT16/32,图像系统支持BMP等多种文件格式。整个系统的设计以模块化为基础,易于升级。     

基于J1939协议的车辆通信系统的设计

提出了一种基于J1939协议的车辆通信系统的设计方案。该系统由发动机电子控制单元、防抱死制动单元、变速器单元组成。每个节点都由高速CAN收发器和集成了CAN控制器的STM32F103ZET6处理器构成。按照J1939协议应用层的规定,编写了相应的应用程序,实现了节点的地址声明及报文解析功能,完成了系统的测试。     

基于 32 位 MCU 的 XLPE 生产线中 Modbus 的实现

为解决 32 位 MCU(Microcontroller Unit)与直流调速器的通讯问题,提出一种基于 Modbus 总线协议的通 讯方法以及实现过程。其中 32 位 MCU 选用 STM32F103 芯片并作为通讯主机,直流调速器选用 ETD DC790P 并作为通讯从机。该方法可以实现一主机多从机的通讯结构,实现一个 32 位 MCU 主机与多个直流调速器从 机通讯。主机通过协议发送指令给从机,从机接到指令做出动作并通过协议回应主机。实验证明,基于Modbus 协议的通讯方法能精准实现主机与多个从机的通讯以及 32 位 MCU 对电机转速转矩等控制,并且 Modbus 实现 方法具有稳定性高、抗干扰能力强、可移植性高等优点。     

客户端无线事务协议分析、设计与实现

研究无线应用协议(WAP)栈中客户端无线事务协议(WTP)的功能，提出了一种基于WIN32环境的设计和实现方案，并指出了在设计和实现过程中涉及到的关键技术。在计算机上模拟调试和下载到移动终端实地调试结果表明：软件功能达到预期设计目标，支持WTP协议规范中的3类事务，并能进行正常通信，软件运行稳定。该设计方案为基于WIN32环境下的协议实现方法提供了一种途径和参考。     

基于Modbus协议的智能仪表自动检测系统

智能仪表广泛应用于配电监控系统,仪表自动检测系统是确保其安全可靠运行的重要保证。为解决传统检测系统效率低、易出错、操作步骤多等问题,采用Modbus-RTU总线协议,设计了一种软硬件结合的智能仪表调试与检验系统,将Modbus通信协议与32位微处理器STM32F103VBT6相结合,实现了仪表的功能测试与精度校准。测试结果表明,仪表检测系统运行稳定、可靠性好、使用方便,大大提高生产效率与产品质量,可在相关行业广泛推广。     

单片机总线技术结合Modbus-RTU协议的智能仪表通讯

为了克服传统仪表通讯技术传输距离短、实时性差、容错率低等缺点,提出一种基于MSP430F149单片机和Modbus-RTU协议的智能仪表通讯解决方案。阐述了Modbus-RTU协议的基本规范,对通信数据的接收、解析、校验、打包、发送等原理进行详细地分析,并对其硬件和软件的实现方法进行了详细介绍。通过协议测试软件Mod Scan32验证了该设计方案的可行性和稳定性。实践证明,采用MSP430系列单片机开发的现场总线技术以其低功耗、可靠、经济实用的特点在智能仪表系统中有着良好的应用前景。     

PPP协议在FreeBSD中的实现分析

FreeBSD是一个开放源码的、完全32位的操作系统，它提供了PPP对等网络服务功能．介绍了FreeBSD操作系统及PPP协议的概念，分析了PPP的协议规范及该协议在FeeeBSD的实现．     

Gen-2标签的RFID认证协议的研究

针对RFID系统的Gen-2类标签容量有限的特点,提出了一种基于Gen-2标签的RFID认证协议,将标签32位ID号分为低16位和高16位,利用标签的CRC-16位生成相应校验码作为密文传输.该协议避免了已有协议在安全性方面的5个缺陷,提高了数据库查询速度、降低了RFID标签的设计成本.并利用BAN逻辑对所提出协议的目标、假设和消息传递进行形式化分析,从理论上证明了该协议是安全可达的.