从土壤分离苏芸金芽孢杆菌

从120个土壤样品检测了11790株芽孢杆菌,其中有81株是产生伴孢晶体的苏芸金芽孢杆菌。它们在生长和对昆虫的致病力上,彼此存在明显差异。从中筛选出了毒力较强的苏芸金芽孢杆菌菌株,从而认为从土壤中分离苏芸金芽孢杆菌有效菌株,是一条新的途径。     

激光对苏芸金杆菌的影响

试验以自土壤分离的苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)Bt—37为出发菌株,选用He-Ne、CO_2和Nd-玻璃激光器,分别对芽孢悬液、营养体悬液和营养体阶段的菌落进行照射。发现三种激光对Bt-37菌株均有致死效应,但致死率各不相同。He-Ne和Nd-玻璃激光能促进菌体生长,芽孢、晶体生成提前:CO_2激光对菌体的生长有抑制作用,因而推迟芽孢、晶体生成时间。镜检机光照射后的存活菌落,未发现形态变异,芽孢、晶体生成时间与对照的差异,与用目视激光显微镜的观察结果相吻合。     

产中性蛋白酶的枯草杆菌478的发酵及其基本特性

枯草芽孢杆菌478是为生皮脱毛选育的一株中性蛋白酶产生茵。500 ml 摇瓶,装量50 ml 培养基,接种一小铲,31℃摇床培养40小时,产酶为5502 u/ml。BF—12—Ⅰ型罐发酵28小时,31℃产酶为5795 u/ml。酶的酪蛋白水解最适 PH 为7.0,活性范围为 PH 6.5～7.5,此间热稳定性较好,40℃两小时失活为12%。酪蛋白水解的最适温度为40～50℃。Fe ~(++)Hg~(++)与 Cu 对酶有抑制作用,Ca~(++)与 Mg~(++)则有激活作用。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析得到9条带。国内外一直沿用的硫化碱脱毛工艺对环境污染严重。酶法脱毛则是解决污染问题的可行途径。半个世纪以来人们对此作了积极的研究。然而,可用的产酶株仍是屈指可数,脱毛工艺的革新受到很大限制。为了推进酶法脱毛工艺向前发展,我们选育了脱毛效果较好的枯草芽孢杆菌478中性蛋白酶产生株。本文对该茵的发酵及其产生的中性蛋白酶的一些基木特性作一报导。     

制革用细菌蛋白酶生产菌222-UV90的选育及其应用研究

枯草杆菌222-UV 90是为生皮脱毛选育的一株中性蛋白酶产生菌。其亲株222是从变质的黄豆粉中分离得到。变异株222-UV 90是经NTG和UV诱变育种获得。发酵试验表明:500ml摇瓶装量50ml培养基,接种一小铲,32℃摇床培养40小时,产酶为8081μ/ml;BF-12-1型发酵罐32℃发酵36-38小时,产酶为8453u/ml。酶在PH6.0-8.0较稳定,35～40℃时活性稳定,40℃两小时仅失活16.7％。Ca~╫和Mg~╫对酶有激活作用,Fe~╫、Hg~╫和Cu~╫则有抑制作用。聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分析得到11条带。酶制剂使用安全无毒。制革脱毛软化应用试验结果表明:该酶用于猪皮正面革脱毛软化效果很好。每克皮用200 Folin单位的酶,38～40℃,pH7～8,1.5～2.0小时脱毛软化同时达到终点。成革质量达灰碱法水平,且可消除制革脱毛过程中硫化物对环境的污染。     

BT——37杀虫菌的初步研究

从山西省娘子关瀑布附近的土壤中分离到一株产晶体的芽孢杆菌,具有苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)的典型特征,编号为 BT——37。该菌伴孢晶体呈园菱形、颗粒状等多种形态。一个芽孢产生一个大晶体的同时,往往又脱落一个或2～3个小晶体。室内生测表明,发酵液对蚁蚕半小时死亡率为82%,2小时达96～100%。稀释4800倍,24小时死亡率97%;对杨树毒蛾、菜青虫有较高毒力;对棉铃虫、粘虫也有一定毒杀作用;对孑孓无效,不影响草蛉幼虫的发育。是一种较有前途的防止鳞翅目害虫的新菌株。本文对 BT——37杀虫菌的生产性能作了考察,提出了以胞外蛋白酶活性作为选择高毒力发酵物培养基的生化参考指标。并对通过改变培养和生产条件以及使用方法提高工业菌剂的毒力,作了初步探索,取得了良好的田间效果。     

环境因素对187菌株灭蚊毒力稳定性的影响

本文探讨了环境因素对Bacillus thuringiensis Var.israelensis79-W-187(Chinese strain)菌株灭蚊毒力的影响。结果表明:187菌株毒力与虫口密度成反比,菌液经济有效浓度,按活孢子数计,每条幼虫菌液活孢子数不能低于7.2×10~3;187菌株毒力热稳定性略高于1897菌株,70℃处理三小时,毒力仍为100%,活孢子数下降很少;pH 对毒力的影响与1897菌株大致相同,pH3-7.5毒力无下降,pH9-12毒力逐级下降,pH13毒力完全消失;不同水质的菌液放置一定时间后对毒力都有明显影响,室外放置10天后毒力消失,而室内放置20天尚有较低毒力,无菌水菌液比自然水菌液毒力下降较慢。     

一株产伴孢晶体的霉状芽孢杆菌的研究

自济南郊区菜园土中,分离到一株产伴孢晶体的霉状芽孢杆菌。对其进行了形态、培养特征、生理生化反应、血清学反应以及 DNA 的 G+C 含量和 DNA-DNA 杂交率的试验测定。该菌有芽孢,其 DNA 中 G+C 含量为33. 9摩尔%(Tm)。由于该菌产典型的伴孢晶体,初步分析可将其归于苏芸金杆菌类(Baci-llus thuringiensis),并作为一种新亚种,命名为苏芸金杆菌霉状亚种(Baci-llus thuringiensis subsp.mycoides)。     

30种植物提取物对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌抑制作用研究

利用索氏抽提乙醇回流法获得30种植物的乙醇提取物,用滤纸圆片法分析各种植物提取物对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌两种细菌的抑制活性.结果表明,在30种植物提取物中,有14种对大肠杆菌的生长有抑制作用,有21种植物提取物对枯草芽孢杆菌的生长有抑制作用.其中,泽漆提取物对大肠杆菌的抑制作用最强,黄花蒿次之,且提取物抑制作用随浓度的...     

苏芸金芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌基因组DNA同源性及多态性的研究

用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增到６１个标准株、生产用菌株及２４个蜡状芽孢杆菌参比菌株的全ＤＮＡ指纹图,通过计算多态性扩增片段的大小,利用ＮＴＳＹＳ软件进行聚类分析,蜡状芽孢杆菌菌株并未形成独立于苏芸金芽孢杆菌的聚群,这是此近缘种ＤＮＡ分子水平高度同源的新证据．６１个苏芸金芽孢杆菌的聚类结果表明：其ＤＮＡ指纹图与Ｈ－血清型有一定相关性．与引物０９５５－０３相比,引物０９４０－１２对苏芸金芽孢杆菌不同亚种及蜡状芽孢杆菌菌株具有更高的鉴别价值,大多数特异株ＤＮＡ全指纹图有菌株特异性,证实ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术是苏芸金芽孢杆菌及蜡状芽孢杆菌种下分类和鉴定的简便快速有效的方法     

利用木糖母液生产碱性蛋白酶发酵工艺的初步研究

研究了以木糖工业化生产的副产物木糖母液为碳源,利用地衣芽孢杆菌工程菌(Bacillus licheniformis)TCCC11843发酵生产碱性蛋白酶的工艺.对摇瓶发酵工艺进行优化,确定了接种种龄为12,h,接种量为8%,培养基初始p H为6.5,发酵温度为34,℃,在24,h一次补加4.0,m L质量分数为50%木糖母液,此时的发酵液酶活力峰值为7,838,U/m L;在此基础上,又在7,L发酵罐上实现了木糖母液的反馈补料,酶活力在80,h时达峰值,为14,912,U/m L.该结果为工业化生产碱性蛋白酶的发酵工艺优化提供了新的思路.     

脱毛碱性蛋白酶定点突变的初步分析

来自于Bacillus pumilus菌株BA06的碱性蛋白酶DHAP具有良好的脱毛能力. 为了更好地了解DHAP的催化特性和进一步改造使之更加符合制革工艺的要求, 根据蛋白质同源建模和嗜冷嗜热酶氨基酸组成的统计分析结果, 确定了13个氨基酸位点进行定点突变. 通过牛奶平板和对粗酶液在不同温度和热稳定性方面的活性进行了分析. 结果发现位于DHAP空间结构上底物结合“口袋”开口处α-螺旋上的氨基酸残基(E220, V223和K244)严重影响酶的活性; 位于底物结合口袋袋底的三个保守位点V256L、V25     

枯草芽孢杆菌TH2菌株抗菌物质产生的技术研究

通过正交试验,结果表明枯草芽孢生防菌TH2高产抗菌物质培养基的最佳配方为豆饼粉1.5%,玉米粉为0.5%,麦麸0.5%,大米粉0.5%,最佳的培养条件为通气量25ml装瓶量、pH为7.5、温度为28±1℃,这样产生的抗菌物质最多.枯草芽孢生防菌株TH2培养过程中,pH从培养初始的7.0,经下降又逐步上升到48小时的7.8.OD650从培养初始的0.56,逐步上升到36小时的1.10,而后逐渐下降,84小时降到0.85.孢子生成从12小时开始,孢子数达(108cfu/ml),而后逐渐增加,48小时达到高峰,孢子数达58.2(108cfu/ml),随后孢子数逐渐下降,抑菌圈值随着发酵时间增加逐渐增大.     

滹沱河饶阳段表土花粉的初步研究

滹沱河饶阳段主流相、边滩相和堤外平地表土花粉分析表明,地处半干旱的华北平原,其河流沉积物的表土花粉组合主要来源于空气中的花粉雨其木本植物花粉以外来花粉成份为主,草本植物花粉主要由当地的草本植物成份组成。表土花粉可能成为冲积物花粉的一部分。     

地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的热稳定性研究

本文研究了环境因子对液体碱性蛋白酶２７０９＾＃热稳定性的影响，多种氨基酸、低浓度的各种离子以及羟基化合物等均能提高２７０９＾＃的热稳定性，氨基酸中以丝氨酸效果最好，Ｃａ＾２＋能极大的提高酶热稳定性，多糖类对酶的热稳定性效果不明显，但与适量合用，可显著提高酶的热稳定性。     

东亚钳蝎人工饲养的生态特点及养殖技术的初步研究

东亚钳蝎在人工饲养的条件下,明显表现了怕强光、怕强风、怕噪音、喜欢弱光和相互残害的生态特点。蝎子是肉食性动物,我们选取了38种昆虫和26种动物肉进行了饲喂试验,其中有18种昆虫,11种动物肉喜欢吃;18种昆虫,11种动物肉较喜欢吃:有2种昆虫和4种动物肉不喜欢吃。饲养蝎子的方法,包括池养、缸养、盆养及瓶养等。饲养密度每平方米养成蝎500～600条,仔蝎3000～5000条,孕蝎200～300条。蝎子的繁殖为卵胎生,每年产仔一次,平均每只母蝎一胎产仔28.16个。对蝎子的求偶、交配、产仔及母蝎保护仔蝎的行为均作了观察。近几年来,东亚钳蝎生存的自然条件受到破坏,影响了蝎子的繁衍。随着医药业的发展,对中药全蝎的需要量增加,群众大量捕获,致使蝎子种群的生长、繁殖受到干扰,数量大大下降。为此,应加强蝎子自然资源的保护,合理开发利用,发展人工养殖,以满足社会的需要。     

苏芸金杆菌发酵水平与溶氧关系的研究

在对苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis,B.t)发酵生理特性研究的基础上,证实了B.t发酵过程中发酵液中溶氧(DO)浓度是影响发酵永平的关键因素。在12L玻璃发酵罐试验中,通过优化供氧条件,使发酵水平(活芽孢数)得以提高。如搅拌转速由300r/min增加至600r/min,菌数可提高47.1%;适当增加搅拌器直径,菌数可提高13.6%。发酵全过程采用变转速控制,菌数比300 r/min定速控制提高36%,轴功耗较600r/min定速控制节约50%。在20t发酵罐放大试验中,调整内部结构后,使溶氧水平提高,菌数比改造前增加了15.3%。     

产中性蛋白酶工程菌的构建及其发酵条件的初步优化

为构建1株产中性蛋白酶的工程菌株并对其发酵条件进行优化,以中性蛋白酶工业生产菌株枯草芽孢杆菌AS1.398的基因组为模板,采用PCR技术扩增获得中性蛋白酶基因npr,与高拷贝质粒pWB980连接并转入蛋白酶缺陷型菌株枯草芽孢杆菌WB600中得到重组工程菌WB600/pWB980-npr.在初筛平板上工程菌蛋白酶活力明显高于工业生产菌AS1.398,工程菌发酵活力可达1,398.3,U/mL.通过对其发酵工艺进一步优化,在接种量5%、装液量100,mL/500,mL、摇床转速180,r/min、温度34,℃的条件下发酵48,h,发酵液的酶活力可达2,487.5,U/mL,比优化前提高了78%.     

脱水胰凝乳蛋白酶制备方法的改进

对脱水胰凝乳蛋白酶（ＡｎＣｈｔ）的制备方法进行改进．在粗品ＡｎＣｈｔ亲和层析纯化前再进行一次ＰＭＳＦ化学修饰，降低ＡｎＣｈｔ中残存的蛋白水解酶活力．分析表明，用该方法制得的ＡｎＣｈｔ与抑制剂ＢＰＴＩ结合的化学计量及强度均接近于理论值，并且其催化活力几乎全部丧失，表明纯度很高，可用于Ｃｈｔ与其底物间的分子识别     

复合脱硫的初步研究

实验通过生物脱硫与吸附剂结合脱硫的初步研究,对红平红球菌（Rhodococcus.erythropolis）LSSE8-1与不同成分吸附剂的复合体系中羟基联苯（HBP）残留量的测定,结果显示无论在BSM培养基还是生理的条件下,Mg2＋的存在都有促进作用。     

芽孢杆菌嗜热蛋白酶的性质研究

对芽孢杆菌嗜热蛋白酶的性质进行了研究.该酶的分子量为32kD,最适作用pH为9 0,最适作用温度为85℃,具有良好的pH稳定性(在60℃时,pH稳定范围为6 0～11 0;在80℃时,pH稳定范围为6 0～10 0)和热稳定性(90℃时酶活的半衰期为20min).钙离子和有机溶剂能提高该酶的热稳定性,而EDTA和PMSF则能抑制该酶活性.