胎鼠DRG神经元细胞培养方法的建立

目的建立胎鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元原代培养的方法。方法无菌条件下取E16天的胎鼠DRG进行原代培养,观察神经元生长状态并用神经元特异性烯醇化酶(neuronal specific enolase,NSE)免疫细胞化学染色鉴定细胞。结果培养的DRG神经元可存活1个月左右,并长出突起,形成密集的网络。NSE鉴定细胞阳性表达率高,神经元达到90%左右纯度。结论本文建立了DRG神经元细胞简洁、经济、高效的培养方法并成功鉴定了神经元。为对神经元的深入研究提供了实验模型。     

人胚神经干细胞的体外培养

目的　探讨人胚神经干细胞体外培养的条件和分化情况 ,以摸索出一种切实可行的能获得较纯且多潜能人胚神经干细胞的方法 .方法　采用取 3月龄人胎脑 ,用胰蛋白酶消化法分离单个细胞 ,部分冻存 ,另一部分进行细胞培养 ,加EGF ,bFGF刺激生长 ,有限稀释法获得单细胞克隆 ,血清诱导分化 ,并用免疫组化方法进行鉴定 .结果　EGF和bFGF同时存在于无血清培养基中 ,有大量神经干细胞团生成 ,含血清培养基则诱导神经干细胞分化成为神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞 .结论　神经干细胞的存活和分裂有赖于EGF和bFGF的共同作用 .经冻存后的胎脑细胞同样能分离培养出有活性的神经干细胞 .     

红松成熟胚愈伤组织诱导外植体选择及培养条件优化

【目的】通过培养条件的优化和适宜外植体类型的筛选,解决红松成熟胚愈伤组织诱导中存在的愈伤组织诱导率低、生长状态差、褐化率较高等问题,为建立红松成熟胚体胚发生体系奠定基础。【方法】用5种培养基类型、3种蔗糖浓度和9种植物生长调节剂组合,选择8种来源于成熟种子不同部位的外植体,对愈伤组织诱导的培养条件和适宜外植体类型进行优化和筛选。【结果】① 在5种培养基中,DCR培养基上愈伤组织诱导率高于其他培养基、生长状态好于其他培养基; ② 添加在DCR中的3种蔗糖浓度中,35 g/L时的愈伤组织诱导率最高(92.01%)、褐化率最低(17.01%); ③ DCR添加35 g/L蔗糖情况下,9种植物生长调节剂组合中NAA 2.0 mg/L + 6-BA 1.5 mg/L组合的愈伤组织诱导率最高、褐化率最低、生长状态最佳; ④ 在选出的优化培养条件下,8种来源外植体中,从裸胚上切离的下胚轴的愈伤组织诱导率高、褐化率低,且增殖能力强,具备胚性愈伤组织的形态解剖特征。【结论】红松成熟胚愈伤组织诱导的优化培养条件为DCR +蔗糖35 g/L + NAA 2.0 mg/L+ 6-BA 1.5 mg/L,适宜外植体裸胚上切离的下胚轴。     

传染性法氏囊病病毒在鸡胚细胞上的优化繁殖

研究了传染性法氏囊病病毒在鸡胚细胞上繁殖上的优化条件，结果表明，鸡胚细胞体外增殖培养后对ＩＢＤＶ的敏感性并不减弱，而且有提高。维持培养基中血清浓度的变化对病毒的繁殖影响不大。     

人胚胎脑神经干细胞分离纯化及体外培养的研究

为了探讨人胚神经干细胞体外培养条件下的生物学特性,为其应用于临床治疗奠定基础.取胎龄16周的人流产胚胎,胰酶消化结合机械法分离成单细胞悬液,以2×106个细胞/mL接种到含hEGF和h-bFGF的DMEM/F12、N2培养基进行体外培养;观察细胞生长情况,用10% FBS诱导神经干细胞球分化,免疫细胞化学鉴定. 结果显示从人胚大脑分离出的细胞经悬浮培养可以形成细胞球,表达Nestin蛋白.经诱导分化后具有表达神经元,神经胶质细胞的特异性抗原. 说明人胚神经干细胞在体外可以稳定生长,并能分化成为神经原及胶质细胞.     

鸡胚细胞的培养

研究了鸡胚细胞的生长规律，葡萄糖的利用和乳酸、氨等代谢产物的积累规律，比较了培养基对细胞生长的促进作用，筛选了合适的微载体，初步探讨了用微载体培养鸡胚细胞的方法。实验结果表明，鸡胚细胞在DMEM培养基中生长良好，最适合的微载体为胶原型微载体，如GT-2，Gytodex-3。     

南方红豆杉离体胚的培养

将南方红豆杉离体胚分别在黑暗和光照条件下置于White、B5、MS、DCR四种培养基上培养,以研究不同培养基对离体胚萌发和生长的影响.实验结果表明不同培养基对离体胚的萌发率有显著影响,以B5培养基效果最好,可达96%左右.胚萌发的时间也随培养基的改变而不同.在同样培养条件下,光照下胚的萌发率略高于黑暗下的萌发率,光照更利于幼苗生长.已萌发的胚在不同培养基上生长的状况不同,以B5培养基的存活率最高（70%）,生根情况最好.本实验为打破南方红豆杉种子休眠提供了一种切实有效的方法,并为南方红豆杉的快繁、保护利用以及紫杉醇的提取提供了潜在的参考价值.     

鸡胚胎干细胞的分离、培养与鉴定的初步研究

采用饲养层培养法,以高糖DM EM为基础培养基,同时添加胎牛血清以及5 ng/m l SCF,l0 ng/m l bFGF和1 000 IU/m l mL IF等细胞因子与鸡胚浸出液等,对鸡的X期胚盘细胞进行离体培养,并利用形态学鉴定、AKP染色、体外分化实验等方法对所获得的细胞克隆进行鉴定。实验结果表明,本实验建立的培养体系培养出了具有多分化潜能的类胚胎干细胞。     

一株乳酸菌培养条件优化及菌种鉴定

针对取自某工厂的一株未知乳酸菌种进行菌株的培养条件优化及菌种鉴定.以乳酸菌在不同固体培养基中的菌落数、菌落大小及溶钙圈大小为检测指标确定乳酸菌分离培养基为最优乳酸菌固体培养基.在此基础上,对其固体和半固体形式中的生长情况进行比较,发现半固体培养较固体培养更适于乳酸菌生长.通过对乳酸菌生长曲线、pH-t曲线的绘制,了解了此种乳酸菌的生长特性.通过菌落形态观察以及生化鉴定实验.如:吲哚试验、接触酶试验、运动性检测、糖发酵试验等鉴定出此种乳酸菌为德氏乳杆菌保加利亚亚种.     

鸡胚气管环组织体外分离培养的探讨

以鸡胚气管纤毛运动作为指示系统,研究不同分离方法即直取法与分离法所培养的鸡胚气管环的成活情况及对气管环纤毛成活的最佳犊牛血清浓度,结果表明:在同等条件下,以分离法所得的鸡胚气管环成活率高、成活时间长并且气管环纤毛在舍2%~3%犊牛血清的培养液中生长最佳.     

Retinal ganglion cells lose response to laminin with maturation

The decisive role played by adhesive interactions between neuronal processes and the culture substrate in determining the form and extent of neurite outgrowth in vitro has greatly influenced ideas about the mechanisms of axonal growth and guidance in the vertebrate nervous system. These studies have also helped to identify adhesive molecules that might be involved in guiding axonal growth in vivo. One candidate molecule is laminin, a major glycoprotein of basal laminae which has been shown to induce a wide variety of embryonic neurones to extend neurites in culture. Moreover, laminin is found in large amounts in injured nerves that can successfully regenerate but is absent from nerves where regeneration fails. However, it is unclear to what extent the mechanisms that regulate axonal regeneration also operate in the embryo when axon outgrowth is initiated. Here we have examined the substrate requirements for neurite outgrowth in vitro by chick embryo retinal ganglion cells, the only cells in the retina to send axons to the brain. We show that while retinal ganglion cells from embryonic day 6 (E6) chicks extend profuse neurites on laminin, those from E11 do not, although they retain the ability to extend neurites on astrocytes via a laminin-independent mechanism. This represents the first evidence that central nervous system neurones may undergo a change in their substrate requirements for neurite outgrowth as they mature.     

绣球菌深层发酵工艺条件的研究

通过单因子试验和多因子正交试验,优化筛选了适于绣球菌摇瓶培养条件。结果表明,适于产菌丝体的摇瓶条件为：培养温度28℃,培养基起始pH4．5,接种量8％,摇瓶转速100r/min;摇瓶培养适于产菌丝体的最适碳氮源及其浓度分别为：可溶性淀粉2．5％,蛋白胨0．15％。适于产胞外多糖的摇瓶条件为：培养温度29℃。培养基起始pH5．5,接种量8％,摇瓶转速100r／min;摇瓶培养最适碳氮源及其浓度分别为：可溶性淀粉2．5％,蛋白胨0．25％。     

一株菲降解菌的分离、鉴定及最佳培养条件的优化

从石油污染场地分离到一株可降解菲的菌株SP 3,经生理生化鉴定和16S rDNA序列对比分析,初步鉴定该菌株为分枝杆菌（Mycobacterium sp.）,该菌能够以菲为唯一碳源,在菲浓度为100 μg/mL的无机盐培养基中,28 ℃摇床培养7 d降解率达到了99%以上。对该菌进行了最佳发酵培养基及培养条件的优化研究,其最佳培养基配方为淀粉1%、牛肉膏1%、Na2HPO4 0.2%、NaH2PO4 0.2%,并通过单因素实验法确定了最佳培养条件为温度30 ℃,初始pH =7.5,培养时间12 h。     

Nerve regeneration factor promotes nerve regeneration in rat

Nerve regeneration factor (NRF) extracted from an oral liquid of traditional Chinese medicine, as a nerve growth decoction has been reported by previous studies to exert effects of promoting nerve growth and preventing neuron apoptosis. For new insights into the function of NRF on primary cultured neurons, we investigated the neurite outgrowth in cultured rat dorsal root ganglion (DRG) explant treated with NRF by immunofluorescence and the gene and protein expressions of neurofilament-H(NF-H) and growth associated protein 43 (GAP43) in the cultured rat DRG neurons by real-time quantitative RT-PCR and Western blotting, respectively. In addition, we used a rat model of sciatic nerve crush to evaluate the effect of NRF on regeneration of injured sciatic nerve by a combination of walk track analysis, electrophysiological and histological assessments. The in vitro experiments indicated that NRF promoted the neurite growth of DRGs and the expression of NF-H and GAP43 at mRNA and protein levels in DRG neurons, and in vivo experiments showed that NRF improved peripheral nerve regeneration and functional recovery.     

乳酸菌发酵小米糠生产y-氨基丁酸的配方和条件优化

以廉价的农副产品小米糠为培养基原料,L-谷氨酸钠（L-MSG）为合成底物,利用实验室筛选的短乳杆菌发酵生产y-氨基丁酸（GABA）．通过单因子实验探讨了短乳杆菌发酵生产y-氨基丁酸过程中pH、培养温度、培养时间、小米糠及底物添加量的影响．结果表明：适宜的培养条件为pH4．00,30℃,培养72h;优化的培养基组分为小米糠70g/L,谷氨酸钠50g／L．在优化的培养基和发酵条件下,发酵液中y-氨基丁酸的产量可达32．037g／L．     

可降解蓖麻饼粕的蛋白酶产生菌筛选及产酶条件优化

利用酪素平板透明圈法初筛和测蛋白酶活力复筛,从分离自蓖麻饼粕和实验室保存的菌株中筛选出1株高产蛋白酶菌株P3-2,对其产酶条件进行了研究。结果表明,最适碳源为麦芽糖,最适氮源为蓖麻饼粕,Na+对产酶具有促进作用,培养基初始p H值为7.5时出现产酶高峰,最适接种量为4%,培养到36 h和84 h时有两个产酶高峰。经正交试验优化,得到较佳产酶培养基组成:2.0%麦芽糖、1.0%蓖麻饼粕及1.0%Na Cl。     

紫芝液体深层发酵条件的初步研究

以紫芝为研究对象,讨论液体深层发酵碳源、氮源、无机盐和培养条件对菌体生物量的影响,确定紫芝液体发酵最优培养基配方为葡萄糖30,g/L、蛋白胨3,g/L、KH2PO41.2,g/L和MgSO4·7H2O 0.8,g/L.发酵条件为培养温度25,℃,起始pH自然,装液量24%,接种量15%,140,r/min培养7,d.同时,以菌体生物量、胞外多糖和pH为指标,绘制紫芝液态发酵动力学曲线,发酵培养7,d后菌体生物量和胞外粗多糖的含量分别达到最大值3.63,g/L和1.67,g/L.     

Vasoactive intestinal peptide regulates mitosis, differentiation and survival of cultured sympathetic neuroblasts

Although acute, millisecond-to-millisecond actions of neurotransmitters are well documented, diverse longer-term effects have been discovered only recently. Emerging evidence indicates that these signals regulate a variety of neuronal processes, from phenotypic expression to neurite outgrowth. Here we show that a single putative transmitter, vasoactive intestinal peptide, can exert multiple, long-term effects simultaneously: it stimulates mitosis, promotes neurite outgrowth and enhances survival of sympathetic neuron precursors in culture. As the peptide seems to be a normal presynaptic transmitter in the sympathetic system, synaptic transmission may exert hitherto unexpected effects.     

鸡腿菇富锌液体发酵条件的研究

采用单因素试验和正交试验相结合的方法,对鸡腿菇的富锌液体发酵条件进行了研究。结果表明:鸡腿菇富锌液体发酵培养基最佳配方是玉米粉3%,葡萄糖3%,豆饼粉3%,硫酸铵1%、ZnSO440 mg·L-1、KH2PO40.1%、MgSO40.05%、VB1 10 mg·L-1,pH=6;在试验组合中,ZnSO4浓度40 mg·L-1,在250 mL三角瓶中装液量90 mL,培养周期6 d为最适宜的发酵条件。