非洲凤仙花细胞悬浮培养条件的优化

探讨了非洲风仙花培养基的类型、培养基激素水平和愈伤组织初始接入量对非洲凤仙花细胞悬浮培养生长的影响.结果表明:MS培养基最适于非洲凤仙花悬浮培养细胞的生长,在初始接入量为10 g/L时细胞增殖最快,附加有1.0 mg/L NAA和2.0 mg/L 6-BA的MS培养基中细胞的增殖率最高.     

缺氧胁迫小细胞团法选育高产黄酮苷悬浮细胞系

以银杏优良品种的种苗诱导愈伤组织,考察了B5,sH,MS,White4种培养基对银杏愈伤组织生长性状和黄酮苷合成能力的影响,采用缺氧胁迫小细胞团法从愈伤组织中筛选高产黄酮苷的细胞系,并对细胞系在悬浮培养时的条件进行了优化.结果表明TZG-1培养周期18d,生长指数为4.12,黄酮苷含量为1.25％,比愈伤组织提高了257.1％;Ms培养基有利于形成质地松软的愈伤组织,当培养基中NH4+与NO3-的浓度比为20.3/39.4或10.3/29.1,蔗糖质量浓度为30g/L或40g/L,pH值为5.6～6.0时,有利于细胞生长和黄酮苷合成.     

甘薯胚性悬浮系的建立及其细胞生长特性研究

徐薯18叶片接种在附加2mg/L,4-D的MS固体培养基上，形成了质地松散的胚性愈伤组织，胚性愈伤组织在附加1mg/L,2,4-D的MS液体培养基中进行悬浮培养，建立了增殖迅速、分散度良好的具有较高体胚分化能力的细胞悬浮系。小型细胞团（直径小于350μm）以2％－4％的接种量转移到无激素MS液体培养基中，可分化出大量体胚。在继代初期，悬浮系pH值呈下降趋势，细胞处于旺盛分裂时期，导致悬浮系鲜质量、干质量、细胞紧实体积（PVC）的显著升值；4d以后，pH值逐渐回升，细胞分裂缓慢而体积增长迅速，导致鲜质量、PVC增加而干质量少有变化；6d以后pH值继续回升而细胞分裂和生长受到明显抑制。     

乌拉尔甘草悬浮单细胞的筛选及培养

乌拉尔甘草种子在消毒后培养无菌苗,截取无菌苗子叶、上胚轴和下胚轴等作为外植体,诱导和继代培养成松散型愈伤组织,然后在振荡培养后过筛获得悬浮单细胞;再对悬浮液进行多级稀释、培养制备小细胞团.结果表明,在舍1.0mg/L2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、1.0mg/Lα-萘乙酸(NAA)、1.0mg/L 6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、0.3mg/L激动素(KT)的MS培养基中,上胚轴能在3～5次继代培养后获得松散型愈伤组织,过80目筛可以获得悬浮单细胞和小细胞团;同样的培养基,悬浮单细胞在琼脂表面、珍珠岩表面和看护培养中培养,看护培养的细胞生长最快、小细胞团形态最佳.     

香樟愈伤组织的诱导和改良

以香樟幼嫩茎段为外植体,以MS为基本培养基,以激素和蔗糖质量分数以及pH为实验因子,设计正交实验,探索诱导其愈伤组织的最优培养基.结果表明,培养基为MS+2,4-D 1.5mg/L1+KT1.0mg/L+20 g/L蔗糖,pH为6.0时,愈伤组织诱导率可达89.9%.对所得愈伤组织进行改良,转入到减少硝酸钾质量分数1/4的继代培养基上,其生长旺盛、结构致密,可用于诱导分化.     

三叶半夏细胞悬浮培养和植株再生的研究

三叶半夏幼嫩叶片在MS+2,4-D2.0mg/L+BA0.5mg/L培养基上一个月内可以诱导出愈伤组织.取颜色鲜黄的愈伤组织进行悬浮振荡培养,经3～4次继代培养得到分散性好的细胞悬浮系.悬浮培养过程中细胞生长曲线呈S型,培养12～16d达对数生长期,细胞鲜重在第18d达到最大值.悬浮液pH值的变化在对数生长期同生长曲线一致.将细胞悬浮液过滤得到的小细胞团接种于MS+NAA0.2mg/L+BA1.0mg/L分化培养基上,40d分化出小植株.     

胀果甘草细胞的悬浮培养

切取胀果甘草(Glycyrrhiza inflate)无菌苗的子叶、下胚轴和根段外植体进行愈伤组织的诱导和悬浮细胞培养,建立了胀果甘草细胞悬浮培养体系,测定了悬浮培养细胞的生长曲线,并且研究了接种量、条件培养和激素组合对胀果甘草悬浮细胞生长的影响.结果表明子叶来源的愈伤组织最适合作为胀果甘草细胞悬浮培养的起始培养物;悬浮培养的最佳接种量为 35 g/L;条件培养基的最佳用量为总培养体积的1/3;最适合胀果甘草悬浮细胞生长的培养基是附加了 NAA 1.0 mg/L + KT 0.5 mg/L 激素组合的 MS 培养基.     

蔗糖浓度和外源2,4-D与KT浓度对三七幼叶细胞悬浮培养影响的研究

将云南文山三七幼叶诱导出愈伤组织,并采用悬浮震荡培养三七细胞.细胞培养基质中的碳源浓度和激素浓度对培养细胞生长的影响进行研究,实验结果显示:MS+1.5 mg/L2,4-D+1.0 mg/L KT+28 g/L蔗糖,pH为5.8的培养基最适合文山三七幼叶诱导得到的愈伤组织细胞悬浮的培养.     

茖葱愈伤组织诱导与再分化培养基筛选

以茖葱鳞片为外植体,研究不同培养基对愈伤组织诱导和植株再生的影响.结果表明：茖葱鳞片在MS培养基中诱导的愈伤组织好于White和WPM培养基,说明MS提供的营养物质更有利于茖葱愈伤组织生长.在MS培养基中加入6-BA与2,4-D或NAA不同用量组合都可以诱导茖葱鳞片形成愈伤组织.其中,MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 0.3 mg/L和MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L诱导的茖葱鳞片愈伤组织效果较好;6-BA与2,4-D或NAA组合诱导的茖葱愈伤组织都能够分化出不定芽,而6-BA与NAA组合诱导的不定芽数量较多;在MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L培养基中不定芽诱导率最高,达到97.66%,不定芽增殖数量(5.16个)较多;茖葱芽苗在1/2MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.1 mg/L中不定根发生率最高(平均99.12%)、单株根数最多(平均5.12条);以松针土为基质时,茖葱组培苗成活率最高(平均96.58%).     

虎杖愈伤组织的诱导及其白藜芦醇含量的变化

为了利用细胞工程开发虎杖悬浮细胞培养、积累白藜芦醇,必须探索虎杖松散型愈伤组织的培养基及其培养条件.以灭菌虎杖茎段、叶片、茎尖等为外植体,探讨9种激素组合在琼脂和珍珠岩固体培养基上诱导愈伤组织的出愈时间、出愈率、在继代培养中分化状况和白藜芦醇含量变化.结果表明:珍珠岩作为支撑物,诱导的愈伤组织比琼脂好;含有NAA或KT的培养基,诱导形成的愈伤组织在继代中均可分化;①号培养基(MS+2,4-D 4.0 mg/L+6-BA 2.0mg/L+3%蔗糖)对幼叶、茎段和茎尖等都有出愈时间早、出愈率高和愈伤组织生长速度快、松散,适宜于悬浮细胞的培养;愈伤组织白藜芦醇的含量与其外植体来源呈正相关,其中,由幼茎形成的愈伤组织白藜芦醇舍量(鲜重)最高,达到160 μg/g.     

应用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析生物诱导后雷公藤悬浮细胞化学成分

利用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱连用技术(UPLC-Q-TOF-MS/MS)和化学计量学结合的方法,分析生物诱导后雷公藤悬浮细胞体系中化学成分的变化.分析样品相似度、层次聚类分析(HCA)和主成分分析(PCA),建立554个共有峰的质谱指纹图谱.结果表明:通过对雷公藤离体培养体系中的质谱指纹图谱分析,鉴定了104种化学成分;生物诱导后雷公藤悬浮细胞和培养液中部分化学成分质量分比显著升高,雷公藤内酯乙、山海棠酸衍生物1、TH1、雷公藤甲素衍生物2、雷酚内酯、雷公藤甲素衍生物1、雷酚新内酯质量比分别提高了7.41,6.50,6.07,5.85,3.63,1.59,1.13倍;质荷比(m/z)为224,278,678,701的未鉴定成分质量比分别提高了2.88,1.57,4.04,6.27倍.     

毛细管电泳分离雷公藤有效成分

用胶束毛细管电泳法分离和测定雷公藤中雷公藤内酯醇和雷公藤内酯酮的含量.在优化分离条件下,2种有效成分的线性范围分别为0.05349～4.33g/L和0.01862～3.46g/L;最低检测限分别为0.05349g/L和0.01862g/L.得到满意的分离效果.     

杜仲细胞的悬浮培养

杜仲外植体在ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ的培养基上可诱导出生长速度快、离散性好、适合于悬浮培养的愈伤组织；愈伤组织在ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＣＨ３００ｍｇ／Ｌ的液体培养基上进行振荡培养，经３～４次继代，即可建立起悬浮细胞系；悬浮细胞的形状为长形、椭圆形、圆形和“月牙”形。     

高生物产量川芎细胞悬浮培养条件优化

在基本培养基为MS的基础上,研究激素浓度、接种量等因素对川芎悬浮细胞生长的影响,建立川芎细胞悬浮培养体系.实验结果表明:川芎悬浮细胞同步化继代培养液生长16 d左右,对数生长中后期时,按照1∶4(V/V)悬浮液,新鲜培养液,以MS+6-BA 0.5 mg·L-1+2,4-D 2 mg·L-1+30 g·L-1蔗糖培养基可获得较高产量的川芎悬浮细胞,湿重达到182.6 g·L-1,干重达到39.2 g·L-1.     

巴戟天细胞悬浮培养生产蒽醌类物质的研究

巴戟天细胞在含NAA0．25mg／L，Kt0．025mg／t,的B5培养基中进行悬浮培养，细胞比生长速率为0．140天^-1，倍增时问为118．8小时，蒽醌含量可达151．27mg／L，为细胞干重的0．81％。巴戟天细胞中蒽醌含量是巴戟天根的2．17倍，蒽醌的比生产速率是巴戟天根的79．3倍。在固体培养愈伤组织中其蒽醌含量和比产率则分别是巴戟天根的6．1倍和209倍。     

红豆杉细胞植板方法的研究

在红豆杉细胞植板中,适宜的培养基是优化的ＭＳ培养基,其中ＮＡＡ浓度为０．５ｍｇ／Ｌ,６ＢＡ浓度为０．５ｍｇ／Ｌ;培养细胞生长周期约４０ｄ;培养基中最优碳源浓度是：蔗糖３０ｇ／Ｌ、葡萄糖１０ｇ／Ｌ．无机盐最佳浓度是：ＮＨ＋４１０ｍｍｏｌ／Ｌ,ＮＯ－３４０ｍｍｏｌ／Ｌ,ＰＯ３－４１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ．研究表明,培养基的ｐＨ值与植板率密切相关．氨基酸及维生素等有机成分能明显促进细胞生长．来自细胞悬浮培养物的条件培养基能显著地促进红豆杉培养细胞的单细胞在低密度植板时的克隆形成     

甜叶菊叶片离体培养及试管无性系的建立

研究了离体条件下甜叶菊（Stiuia rebaudiana Bertoni)叶片愈伤组织诱导和植株再生技术,离体培养以MS为基本培养基并附加300mg/L水解酪蛋白,离体叶片在BA 0．5mg/L和NAA 0．5mg/L的培养基上诱导形成愈伤组织,在BA 0．5mg/L和NAA0．05mg/L的培养基上可诱导愈伤组织分化不定芽,分化频率为100％,不定芽在White基本培养基并附 加NAA0．01mg/L的培养基上诱导生根,生根率可达100％,炼苗后移栽,成活率达95％以上。