体外人脐动脉平滑肌细胞不同培养方法的应用研究

探索人脐动脉平滑肌细胞（human umbilical artery smooth muscle cell,hUASMC）体外培养稳定的模型。取人脐动脉,分别用贴块法、贴块＋酶解法进行原代培养,以免疫细胞化学的方法对细胞进行鉴定。结果显示：贴块法成功培养出平滑肌细胞,免疫细胞化学染色显示细胞内a-Actin阳性表达。贴块＋酶解法反复多次均失败。说明对于人脐动脉平滑肌细胞的原代培养,贴块法是一种较实用的方法。     

超声对体外培养大鼠血管平滑肌细胞增殖影响

探讨影响大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的超声辐照强度和时间,分别用30、60、100、150、200W等辐照强度和10、30、60、100 s等辐照时间处理VSMCs.MTT法和细胞上清液NO含量测定法检测细胞的增殖状态.研究结果表明:超声辐照强度为30、60 W和时间为100 s时抑制细胞的增殖显著,且时间与强度之间无互作效应.     

BK通道在血管平滑肌细胞迁移中的作用

观察BK通道在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)上的功能及数量发生变化时,对VSMC迁移速度的影响。用脂质体转染法使BK通道在VSMC上过表达,或用BK通道特异性阻断剂IBTX(iberiotoxin)阻断VSMC上BK通道的功能,在这两种情形下,观察VSMC迁移速度的变化。研究结果表明,当过表达BK通道于VSMC,与正常对照相比,其迁移速度明显减慢;反之,当BK通道功能被特异性阻断剂IBTX阻断后,VSMC的迁移速度明显加快。最后认为BK通道的表达水平与VSMC的迁移速度呈负相关,过表达BK通道抑制VSMC的迁移。     

缝隙连接阻断剂18α-甘草次酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

为探讨缝隙连接是否参与抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖及可能的分子机制,本研究以原代及传代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞为模型,实验分2组：对照组、缝隙连接阻断剂18α-甘草次酸（18α-—Glycyrrhetinicacid,18Q—GA）组。MTT法及流式细胞术检测细胞的增殖活性,染料示踪分子传递法（划痕标记染料传输法）检测细胞的缝隙连接功能,Westernblotting法检测细胞中缝隙连接蛋白40（Cx40）和43（Cx43）表达。结果显示：（1）与对照组相比,18α-GA组MTT法测得的氏,。值及细胞周期S期比例均降低（P〈0．01）,细胞增殖活性减弱;（2）与对照组相比,18α-GA组罗氏黄荧光染料传递百分数显著降低,缝隙连接功能明显减弱（P〈0．01）;（3）与对照组相比,18rGA组Cx40和总Cx43蛋白表达无显著差异（P〉0．05）,磷酸化Cx43与非磷酸化Cx43的比值显著降低（P〈0．01）。由此可知,18α-GA可能主要通过下调血管平滑肌细胞磷酸化Cx43蛋白表达,引起缝隙连接通讯功能减弱,从而抑制了血管平滑肌细胞的增殖。     

兔尿道海绵体平滑肌细胞的原代培养及鉴定

目的为构建组织工程化尿道提供种子细胞。方法切取新西兰兔阴茎头．采用组织块贴壁培养法体外原代培养，光镜、HE染色等观察细胞形态，MTT法作生长曲线间接反应细胞增殖能力，以及免疫组化法鉴定细胞本质。结果经10～14d养后，培养瓶底铺满梭状细胞，呈明显的“峰一谷”样生长。免疫组化法鉴定确认为尿道海绵体平滑肌细胞。结论兔阴茎头平滑肌细胞组织块贴壁法培养简便可靠，细胞可大量扩增，可为于组织工程尿道构建的研究提供种子细胞。     

血管段孵育和原代血管平滑肌细胞培养的比较

探讨微血管段孵育方法能否与原代平滑肌细胞培养一样检测蛋白表达,以用于初步的基础研究,解决原代培养耗时、不易存活的问题。分离大鼠肠系膜动脉三级以下分支,使用胶原酶和木瓜蛋白酶混合消化单个血管平滑肌细胞,获取的平滑肌细胞采用含20%胎牛血清的DMEM培养基进行培养。培养的平滑肌细胞经特异性的α-actin进行免疫组化鉴定;血管段孵育是在无菌条件下分离大鼠肠系膜动脉三级以下分支,培养基孵育72 h。分别使用不同浓度的尼氟灭酸(niflumic acid,NFA)孵育原代培养的平滑肌细胞和肠系膜三级分支血管段24 h,观察平滑肌细胞连接蛋白43(connexin43,Cx43)的变化。形态学和免疫组织化学鉴定表明,培养的原代细胞为血管平滑肌细胞。不同浓度NFA处理原代平滑肌细胞能够使Cx43表达量呈浓度依赖性下降,相对于对照组具有统计学意义(P0.01);不同浓度NFA处理血管段能够使Cx43的表达量也呈浓度依赖性下降,相对于对照组具有统计学意义(P0.01)。由此可知,观察平滑肌细胞特异性蛋白Cx43的表达情况,使用血管段孵育的方法检测结果与细胞培养的结果相似。血管段孵育简单易行,可以作为类似实验的初步研究。     

NO诱导血管平滑肌细胞凋亡中Ca^2＋的作用

探讨了NO诱导血管平滑肌细胞凋亡与细胞内游离Ca^2 之间的关系,通过粘附式细胞仪和Ca^2 荧光探针Fluo-3/AM,检测分析了NO在供体SNAP的作用下,血管平滑肌细胞中游离Ca^2 浓度的变化;又通过SNAP与维拉帕米、EGTA、肝素钠、普鲁卡因共同孵育的方法,测了Ca^2 浓度变化在细胞凋亡中的作用,得出SNAP能使细胞中游离Ca^2 浓度升高,而胞外Ca^2 内流在其中起主要作用;并且阻断胞外Ca^2 内流能够抑制SNAP所诱导的血管平滑肌细胞的凋亡,提示了胞内Ca^2 浓度升高可能是SNAP诱导血管平滑机细胞凋亡的一条途径。     

雌二醇对血管平滑肌细胞增殖的影响

1材料和方法1．1体外培养小牛胸主动脉SMC[4]1．2SMC48小时增殖率的测定[5]加药情况如下：0．1ng／mlE2组,lng／mlE2组,10ng／mlE2组,100ng／mlE2组,E2溶剂（DMSO,终浓度＜0．05％）对照和培养液对照;每组两种血清浓度2％,15％,各8孔,继续培养48小时;MTT法检测增殖率。1．3SMC集落形成率的测定[6]分组：0．1ng／mlE2,1ng／mlE2,10ng／mlE2,培养液对照和溶剂对照,12天后计算集落形成率。2结果2．1体外培养SMC形态特征贴决后3－4天SMC自组织块边缘萌出（图版a,b）,原代细胞形状多样,有星形、带状三角形、梭形等…     

血管组织工程内皮细胞分离培养新方法

建立一种简单高效的血管组织工程内皮细胞分离培养方法.无菌分离大鼠主动脉,剪成约5 mm×2 mm的组织块,内膜朝下平铺于含Ⅰ型胶原酶的细胞培养皿中消化30 min,收集内皮细胞;其后,取出组织块继续内膜朝下置于另一培养皿中贴壁培养,直至细胞爬出并融合成单层.观察细胞形态,并分别对两种方式获得的传至第5代的细胞进行Ⅷ因子...     

NO诱导血管平滑肌细胞凋亡中Ca~(2 )的作用

探讨了ＮＯ诱导血管平滑肌细胞凋亡与细胞内游离Ｃａ２＋之间的关系．通过粘附式细胞仪和Ｃａ２＋ 荧光探针Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ,检测分析了ＮＯ在供体ＳＮＡＰ的作用下,血管平滑肌细胞中游离Ｃａ２＋浓度的变化; 又通过ＳＮＡＰ与维拉帕米、ＥＧＴＡ、肝素钠、普鲁卡因共同孵育的方法,观测了Ｃａ２＋浓度变化在细胞凋亡中 的作用．得出ＳＮＡＰ能使细胞中游离Ｃａ２＋浓度升高,而胞外Ｃａ２＋内流在其中起主要作用;并且阻断胞外 Ｃａ２＋内流能够抑制ＳＮＡＰ所诱导的血管平滑肌细胞的凋亡．提示了胞内Ｃａ２＋浓度升高可能是ＳＮＡＰ诱导血管 平滑肌细胞凋亡的一条途径．     

白介素-10对TNF-α介导血管平滑肌细胞增殖的影响

观察重组人白介素 10 (rhIL_10 )对肿瘤坏死因子 (TNF_α)刺激的离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。体外培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,采用MTS PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。结果显示 ,TNF_α对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用。rhIL_10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响。在TNF_α刺激下 ,低至 10ng mL的rhIL_10可明显抑制血管平滑肌细胞的生长 (P <0 0 5 )。     

加热对血管平滑肌细胞的影响实验研究

 为支架磁感应热疗预防和治疗PTCA术后血管再狭窄提供基础研究数据,对临床常用的316L型不锈钢冠脉支架进行磁感应诱导升温,探讨加热对兔血管平滑肌细胞（VSMCs）的增殖、迁移、凋亡及周期的影响。将平滑肌细胞置于恒温水浴槽中,待其达到预定温度（43、47℃）后持续10min,观察细胞形态变化,采用MTT法检测加热对血管平滑肌细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测VSMC细胞周期和细胞凋亡,划痕实验检测加热对细胞迁移能力的影响,免疫细胞化学法检测不同温度作用后血管平滑肌细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果发现,支架在交变磁场下可以升温至热疗所需温度,加热后细胞增殖受到了显著抑制,43℃组细胞存活率为（83.23±2.87）%,47℃组细胞存活率仅为（37.58±0.78）%。细胞的凋亡率显著增加,47℃组细胞凋亡率为（87.37±2.95）%,与对照组相比具有极显著差异,而43℃组的凋亡率为（6.00±0.26）%,与对照组相比无统计学差异。细胞周期也受到抑制,被阻滞在S期。加热后随着时间的推移,47℃组细胞的迁移能力受到显著抑制,而加热对43℃组细胞的迁移能力无显著影响。免疫细胞化学检测显示,随着温度的升高,PCNA的表达受到明显抑制。研究表明,临床常用冠脉支架在交变磁场下升温可行。加热显著抑制了细胞的增殖并促进了细胞凋亡,使细胞周期阻滞在S期,且抑制了细胞的迁移。加热能显著抑制细胞PCNA的表达,这些可能是加热抑制细胞增殖和迁移、促进凋亡的机制之一。     

兔血管平滑肌细胞和聚羟基丁酯（PHB）的细胞相容性实验研究

探索血管平滑肌细胞和新型可降解材料聚羟基西酯（PHB）的细胞相容性,为组织人工血管的构建寻找理想的支架材料。将组织法体外培养的兔血管平滑肌细胞种植在PHB膜片和PHB三维微孔支架上,在相差显微镜下观察细胞的粘附和生长情况,用MTT法测定细胞粘附率和细胞增殖指数,复合培养7d后进行扫描电镜观察并用流式细胞仪（FCM）测定细胞周期、DNA指数。结果兔血管平滑肌细胞在PHB膜片上粘附率为77％,细胞增殖符合细胞的生长曲线,在PHB三维微孔支架上生长情况良好,并被证实为二倍体细胞。结论是兔血管平滑肌细胞和聚羟基西酯（PHB）的细胞相容性较好,但细胞与材料间的粘附有待进一步改善。     

豚鼠气管平滑肌细胞培养

目的 建立一种简便、快捷的豚鼠气管平滑肌细胞培养方法。方法 幼年豚鼠气管平滑肌组织块原代培养 法。结果 豚鼠气管平滑肌组织块贴壁5～8d后可见细胞自组织块周围长出,细胞长梭形,核位于中央,呈辐射状 向四周生长。两周后细胞长满瓶壁。经α-平滑肌肌动蛋白单克隆抗体(α-smooth muscle actin monoclonal antibody, α-SMA)免疫组化染色鉴定,获得的细胞为平滑肌细胞。结论 豚鼠气管平滑肌组织块培养法可快速获得数量充足 的气管平滑肌细胞。     

2-APB对Wistar大鼠脑微动脉平滑肌细胞间缝隙连接的抑制作用

为探讨2-APB对Wistar大鼠脑微动脉平滑肌细胞间缝隙连接的作用。采用全细胞膜片钳技术,观察2-APB对Wistar大鼠脑微动脉段上平滑肌细胞膜电容(Cinput)、膜电导(Ginput)和膜电阻(Rinput)的影响。结果显示,应用2-APB后Wistar大鼠脑动脉段平滑肌细胞的Cinput、Ginput减小或Rinput增大。当2-APB浓度≥100μmol/L时Wistar大鼠脑微动脉段上平滑肌细胞的Cinput、Ginput分别从81±18 pF和3.5±0.43 nS降至10.5±1.3pF(n=7,P0.01)和0.35±0.03nS(n=7,P0.01),这与单个平滑肌细胞十分接近。由此可知,2-APB可以浓度依赖性的抑制Wistar大鼠脑微动脉平滑肌细胞间缝隙连接。     

15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞上ERK1／2活性的影响

目的从细胞分子水平上研究15-酮基二十碳四烯酸（15-ketoeicosatetretraenoicacid,15-KETE）对大鼠肺动脉平滑肌细胞上ERKl／2的活性的影响。方法通过酶法分离、培养SD大鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonaryarterialsmoothcells,PASMCs）,使用Westernblot技术观察15-KETE对大鼠PASMCs上ERKl／2活性的影响。结果1）10～mol／L15-KETE作用从0．5h到24h与对照组（未加15-KETE）比较,对ERKl／2总量没有明显的影响。2）与对照组比较,15-KETE处理0．5、1．0、2．0、4．0、8．0h明显增强P—ERKl／2（P〈0．05）。3）与对照组比较,10、10^-7和10～mol／L15-KETE明显增强p-ERKl／2（P〈0．05）,随15-KETE浓度增大,p-ERKl／2增多。4）与15-KETE作用比较,ERKI／2抑制剂PD9805920μmol／L、50txmol／L和U01260．1txmol／L、1btmol／L均能抑制15-KETE对ERKl／2的活化（P〈0．05）,并且随着抑制剂浓度增大,抑制作用加强。结论15-KETE对大鼠肺动脉血管平滑肌细胞上的ERKl／2表达没有明显的影响,但能激活肺动脉血管平滑肌细胞ERKI／2．使其磷酸化,并呈时间一剂量依赖关系。ERKl／2通路的特异性抑制剂PD98059、U0126能抑制15-KETE对ERKl／2的磷酸化。     

Inhibition Mechanism of Emodin on Rabbit Vascular Smooth Muscle Cells Proliferation

ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＥｍｏｄｉｎｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓ[1] ,ｗｈｉｃｈｅｘｉｓｔｓｉｎｍａｎｙｍｅｄｉｃａｌｐｌａｎｔｓｓｕｃｈａｓｒａｄｉｘ ｐｏｌｙｇｏｎｉｍｕｌｔｉｆｌｏｒｉ,ｒｈｉｚｏｍａｐｏｌｙｇｏｎｉ,ｅｔｃ .Ｅｍｏｄｉｎｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｍｅｄｉｃｉｎｅ .Ｉｔｈａｓｍａｎｙｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｓｕｃｈａｓａｎｔｉ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ,ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇｂｌｏｏｄｌｉｐｉｄｓｃｏｎｔｅｎｔ ,ｅ…     

血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息传递

血管内皮细胞和血管平滑肌细胞之间存在着肌内皮间缝隙连接，进行电和化学的信息传递，以协调血管的舒缩活动。电信号可以从内皮细胞到平滑肌细胞进行传递，相反，也可以从平滑肌细胞到内皮细胞进行传递。内皮源性超极化因子、乙酰胆碱、缓激肽、第二信使等物质亦可引起内皮细胞或，和平滑肌细胞细胞膜的超极化或去极化，参与血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息传递。