C型产气荚膜梭菌PCR快速检测方法的建立

为了对产气荚膜梭菌进行快速检测,本研究以GenBank发表的产气荚膜梭菌α毒素、β毒素作为参考,应用生物学软件设计扩增C型产气荚膜梭菌α毒素和β毒素的特异性引物,预期基因片段大小分别为1 110 bp与927 bp;建立PCR反应体系并设置反应条件;反应结束后对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳进行检测。结果表明,设计的引物可以良好的扩增出C型产气荚膜梭菌的α毒素和β毒素基因,扩增的基因片段大小与预期的一致,阴性水对照与ε毒素对照扩增电泳泳道均为阴性。此方法用于判定C型产气荚膜梭菌的毒素型是可行的。     

淀粉-脂质复合物制备及其体外益生作用

作为膳食纤维的抗性淀粉(RS)对人体营养与健康起积极作用.由淀粉和脂质形成的淀粉–脂质复合物被定义为一种新型抗性淀粉RS5.通过差示扫描量热仪(DSC)、衰减全反射–傅里叶变换红外光谱(ATR-FTIR)、激光共聚焦显微–拉曼光谱(LCM-Raman)和X射线衍射仪(XRD)研究抗性淀粉的热力学性质、短程有序性和长程有序性,并通过体外发酵实验分析其益生作用.结果表明:制备的RS5为包含V型和B型晶体结构的复合物,具有较好的热稳定性,凝胶化峰值温度为116.2℃,高于RS2的87.9℃.与对照组相比,RS2可显著增加乳酸菌、双歧杆菌和拟杆菌数量,而抑制产气荚膜梭菌的增殖;RS5可显著增加乳酸菌、双歧杆菌和拟杆菌数量,有效抑制肠杆菌、肠球菌和气荚膜梭菌增殖. RS5组发酵液具有较低pH(4.7)和较高的益生元指数(13.08).因此,与RS2相比,RS5具有更好的益生效果.     

多重聚合酶链反应检测污水中产气荚膜梭菌

根据产气荚膜梭菌产生4种主要毒素（α、β、ε、τ-毒素）可分为A～E5种菌型。依据产气荚膜梭菌的5种毒素基因的序列，设计5对PCR引物，建立多重聚合酶链式反应（PCR）方法，以快速区分5种类型的产气荚膜梭菌，68份环境样品（生活污水、屠宰场污水）的常规检测和基因分型共检出55株产气荚膜梭菌，其中A型产气荚膜梭菌51株，占总数的90%以上，B，C，D3种类型只占5%。试验未检出E型产气荚膜梭菌，所有的分离株未发现带有肠毒素，结果表明：目前污水中主要存在的菌型为A型菌，其他菌型的产气荚膜梭菌很少，而多数是非致病性产气荚膜梭菌。     

肠道菌群模式菌株的HPLC分离条件优化及其表征

采用高效液相色谱分别考察了肠道菌群模式菌株及各单菌的色谱行为,成功建立了HPLC分离分析肠道菌群模式菌株的最佳洗脱方法,即阶梯式梯度洗脱.结果显示,肠道模式混合菌株经过高效液相色谱分离得到5个明显的洗脱组分,分别为0.10 mol·L~(-1)(脆弱拟杆菌和金黄色葡萄球菌)、0.20 mol·L~(-1)(青春双歧杆菌和鼠李糖乳杆菌)、0.25 mol·L~(-1)(粪肠球菌)、0.30 mol.L~(-1)(奇异变形杆菌、克雷伯肺炎杆菌和产气荚膜梭菌)和0.50 mol·L~(-1)(大肠杆菌和产气荚膜梭菌)洗脱峰.色谱柱的上样浓度为培养菌液(OD600=0.576)的5倍时,其最大上样量为500μL,且方法分辨率高、重现性好、结果稳定.     

微量法测定产气荚膜梭菌α毒素

为了快速、灵敏地测定样品中的产气荚膜梭菌α毒素，本实验以产气荚膜梭菌培养滤液经硫酸铵分段盐析、丙酮分段沉淀及凝胶过滤得精制α毒素，在96孔细胞板上，经卵黄反应浊度(微量)法测定精制α毒素及培养滤液卵黄反应滴度分别为1：32768和1：2048，且该方法特异性强、稳定性好，是产气荚膜梭菌α毒素的一种快速、简便的检测手段．     

气性坏疽伴多重感染1例

产气荚膜杆菌是引起气性坏疽的主要病原菌,吉林市中心医院在一开放性骨折患者的脓汁和血液中同时各分离出1株产气荚膜杆菌,并伴肺炎克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌的多重感染,现报告如下:     

浅谈水处理中的微生物应用新发现

本文介绍了目前水污染相关的几种微生物在水处理中的新的应用发现:一、采用产气荚膜梭菌作为指示菌来检测水中病原微生物,随着对它研究的深入,产气荚膜梭菌可能成为水污染的指标之一。二、在常温状态下通过投放生活状态的酵母菌能够消除水中的蓝藻污染,分析其可行性,并通过实验探究出酵母菌治理蓝藻污染的过程。     

奶犊牛直肠主要正常菌群的检测及其定植规律的研究

采用稀释滴种法,对奶犊牛直肠内容物中８种主要正常菌群（双歧杆菌、乳杆菌、真杆菌、类杆菌、大肠杆菌、消化球菌、梭菌、肠球菌）进行定性和定量分析,将所得结果进行统计学处理,得到奶犊牛直肠８种主要正常菌群的对数均值．犊牛出生６ｈ后可检测到大肠杆菌、类杆菌和梭菌;１２ｈ后,８种菌群全部检测出来,并以大肠杆菌、梭菌为优势菌。随着厌氧菌大量增殖,需氧菌和兼性厌氧菌逐渐下降,１周后形成以乳杆菌、双歧杆菌为优势菌群的微生态区系．８种细菌的数量随饲草采食量增加呈下降趋势．断奶后１个月完成定植,此时直肠的优势菌是双歧杆菌、真杆菌,为７～８ｌｏｇＣＦＵ／ｇ,然后依次为乳杆菌、梭菌７ｌｏｇＣＦＵ／ｇ,类杆菌、大肠杆菌、消化球菌６ｌｏｇＣＦＵ／ｇ,肠球菌５ｌｏｇＣＦＵ／ｇ．     

板栗抗性淀粉消化前后的益生作用及结构变化

制备与纯化得到了板栗抗性淀粉及消化抗性淀粉,研究了它们的益生作用与结构变化.结果表明：板栗抗性淀粉及消化抗性淀粉对双歧杆菌和乳酸杆菌都有显著的增殖作用,对大肠杆菌和产气荚膜梭菌有强抑制作用,对粪肠球菌、梭状杆菌、兼性细菌无明显影响;它们的发酵液总酸度增大,说明它们能被肠道益生菌发酵利用;板栗抗性淀粉经消化处理后比表面积增加,经发酵后比表面积更大.板栗抗性淀粉的平均聚合度较之原淀粉显著变小,发酵后板栗抗性淀粉或消化抗性淀粉的平均聚合度降低;板粟抗性淀粉的晶型为V型,经消化后转变为B型,板栗抗性淀粉及消化抗性淀粉经发酵后,晶型都转变为A型,微晶度、亚微晶度及总结晶度较之发酵前都明显降低.     

屎肠球菌JT1701对人体肠系细菌的调控作用

用屎肠球菌JT1701与人体肠系有害菌（大肠杆菌、产气荚膜梭菌、脆弱拟杆菌）和人体肠系益生菌（婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌）分别及共同培养发现,肠球球菌对这些菌均有抑制作用。它能抑制这些菌氨的产生,降低培养基的pH。其原因是,屎肠球菌与氨产生相关的尿酶、氨基酸脱氨酶的种类少,酶活性亦低,而与NH4^ 同化相关的谷氨酸脱氢酶、谷氨酸合酶、谷酰氨合成酶的活性要高得多。表明屎肠球菌对人体肠系菌群具有调控作用。     

肠道菌群对艰难梭菌拮抗作用的动物模型研究

正常成年仓鼠肠道菌群可拮抗艰难梭菌在该动物肠道中定居.将该菌群移植到无菌小鼠并经过抗生素和热(70℃,10 min)简化处理后,仍有拮抗艰难梭菌的能力,并能拮抗产气荚膜梭菌在肠道中定居,由此建立了一研究拮抗艰难梭菌在肠道中定居的实验动物模型。     

产气荚膜梭菌α毒素研究进展

对产气荚膜梭菌α毒素的组成、结构、理化性质、作用机理、检测及分子遗传等方面的研究进展作了简要综述。     

B型产气荚膜梭菌β毒素的表达与纯化

将构建好的表达产气荚膜梭菌β毒素的重组质粒pET-32a-β转化大肠杆菌BL21(DE3),将得到的重组菌株BL21(DE3)(pET-32a-β)用IPTG进行诱导表达,探究其最佳诱导时间.对所表达的β毒素包涵体进行变性、纯化和复性,获得了纯度较高的可溶性蛋白,动物免疫实验取得了良好的结果,为下一步抗产气荚膜梭菌β毒素的单克隆抗体和单链抗体的研究奠定基础.     

胶质芽孢杆菌荚膜染色方法的比较与改进

荚膜是细菌的重要附属物,细菌有无荚膜以及荚膜物质厚度和化学组成是其重要特征之一.染色和观察荚膜形态是微生物研究中的基本技能,但荚膜的低折光性与亲和染料能力差等特性,使其不易着色,制作一张好的荚膜染色玻片需要正确的染色方法和一定的熟练程度.胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)以其肥厚荚膜为显著特征,该菌的许多有益特性都与其产生肥厚荚膜有密切关系.本文以该菌为试验对象,尝试采用7种负染方法对荚膜进行染色.结果表明:7种染色方法中,墨汁染色法和刚果红盐酸染色法简便快速且效果较好;对刚果红盐酸染色法进行了改进,使染色效果更为理想,该方法值得推广.     

油藏环境异化铁还原菌的生物多样性

为了给低渗透油藏和水敏性油藏高效开发提供新思路,从青海油田(低渗透)、胜利油田(低渗透)和中海油天津(水敏)采集样品;以无定形氢氧化铁作为固相电子受体、混合碳源作为电子供体,富集培养异化铁还原菌(DIRB);并通过高通量测序表征生物多样性。结果发现富集样品α多样性显著减少;β多样性揭示原始样品和富集样品在群落结构上相关性强。微生物组成和系统发育分析表明,青海油田中的DIRB主要有梭菌、脱硫弧菌、希万氏菌、假单胞菌和热孢菌;胜利油田为梭菌、嗜热厌杆菌、热孢菌、脱铁杆菌;中海油天津为梭菌、芽孢杆菌和弧菌。在各油藏分布的异化铁还原菌,既有相同,也有差异。研究结果可为异化铁还原菌提高原油采收率提供基础。     

多菌种微生物混合培养的条件及生长关系研究

对3种具有水质净化功能的地衣芽孢杆菌、假丝酵母菌和荚膜红假单胞菌进行混合培养,探讨3种菌混合培养的培养基、培养条件及其生长关系.实验结果表明,3种菌均可良好生长的培养基为每升水含葡萄糖10g,酵母膏10 g,蛋白胨6 g,NaCl220 g,MgSO40.2 g,KH2PO40.5 g,K2HPO40.3 g,pH6.5;3种菌混合培养的接种顺序与培养条件为在培养液中先分别接种3%荚膜红假单胞菌与假丝酵母菌,于35℃、200 r/min摇床下培养48 h,后接种4%地衣芽孢杆菌继续混合培养至60 h;3种菌混合培养时的生长关系为假丝酵母菌与荚膜红假单胞菌存在互惠互利关系,而地衣芽孢杆菌与其它两株功能菌为无关共栖关系.     

菊芋低聚果糖促进双歧杆菌生长的研究

研究一种自制菊芋低聚果糖（FOS）在体内外对双歧杆菌的促生长效果,体外试验表明,所实验的5种218株双歧杆菌菌株均利用FOS,在FOS浓度为0．5％时,青春双歧杆菌和婴儿双歧杆菌的生长量分别比对照增加6．5倍和5．4倍,培养液中流加0．2％的FOS也能显著促进双歧杆菌的生长;竞争实验显示双歧杆菌的增殖对大肠杆菌和艰难梭菌的生长有一定的抑制作用,体内试验表明,FOS能显著提高受试动物粪合便中的双歧杆菌菌数。     

术前肠内营养对胃癌患者围手术期作用的研究

目的 研究胃癌患者术前肠内营养支持对机体免疫功能的影响.方法 选择择期手术的胃癌患者50例,随机分为两组,术前术后肠内营养组(观察组);术后肠内营养组(对照组).两组患者均从术后24 h起自营养管给予等热量、等氮量的肠内营养剂.观察组于术前7 d起口服能全力(纽迪西亚公司)500 mL/d至术前1 d.术前、术后第1,8天抽取静脉血,检测白蛋白、转铁蛋白、前白蛋白指标;外周血;T淋巴细胞.结果 两组患者术后均有免疫功能的降低,但观察组比对照组术后第1,8天的CIM/CD8比值Igc水平显著增加;术后第8天的前蛋白浓度显著增加.结论 胃癌患者围手术期(术前术后)使用肠内营养剂,可以有效改善患者的免疫功能.     

临床厌氧菌的分离和鉴定

本实验从60份临床标本中行厌氧菌的分离和鉴定，40份标本分离到厌氧菌，阳性率为67％，其中，牙周病的临床标本厌氧菌的检出率高达100％，阑尾脓肿和腹膜炎标本为935，胆道标本为585，一般都是与兼菌混合感染。在腹部外科临床标本中，与致病有关的主要厌氧菌弱拟杆菌（285）、消化链球菌属（205）和梭菌属（19％）。与口腔牙周炎致病有关的厌氧菌 具核梭杆菌（23％）、产黑色素拟杆菌（175）和二氧化碳噬纤维菌（20％）。从60份临床标本中分离到219株厌氧菌，其中拟杆菌属占42％，消化链球菌属占165，梭菌属占16％，梭杆菌属占11％。厌氧菌鉴定中使用了敏感且简便的微量生化分析法。对厌摒力的代谢产物使用 子色谱和气液相色谱分析。并对两者进行了比较，离子色谱法（）IC）操作`简单基线稳定，能直接注射水培养物，可以推荐到临床检验中去，用以厌氧菌感染症的快速推测性诊断。     

微生物电解乙酸合成高值有机物

以微生物电解池为平台, 考察了阴极电势, pH以及初始乙酸盐浓度对乙酸还原及其丁酸、乙醇等产物积累的影响.结果显示, 恒定阴极电势-900mV(vs.Ag/AgCl)、 pH60时, 初始乙酸钠浓度为10g/L时, 丁酸产量最高, 可达到80(±5)mg/L, 乙醇积累26(±5)mg/L.在-900mV阴极电势下, 总碳回收率达到632%, 产物电子回收率为1306%; 在-800mV阴极电势下, 总碳回收率达到428%, 产物电子回收率为544%.控制阴极电势-850mV, 初始乙酸钠浓度由1g/L增加到5g/L, 丁酸的产量由488mg/L增加到762mg/L, 提高了56%.扫描电镜显示, 阴极碳毡上菌体主要为杆菌.对阴极附着微生物进行变性梯度凝胶电泳(PCR DGGE)分析发现, 假单胞菌属(Pseudomonas)和梭菌属(Clostridium)为主要的功能菌群, 假单胞菌可能与阴极电子传递有关, 而梭菌可能与高值有机物的合成有关.