Mcl-1反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨髓样细胞白血病-1(Mcl-1)反义寡核苷酸(ASODN)对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法:将Mcl-1 ASODN转染入体外培养的肝癌HepG2细胞。用WST-8法检测不同浓度的Mcl-1 ASODN对HepG2细胞增殖抑制率;用流式细胞仪检测Mcl-1 ASODN对HepG2细胞周期和凋亡的影响,用Hoechst33258染色在荧光显微镜下观察HepG2细胞凋亡的形态学改变。结果:Mcl-1 ASODN作用HepG2细胞48 h后,与空白对照组(blankcontrol)和随机寡核苷酸(RODN)对照组相比,Mcl-1 ASODN组能明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖和诱导其凋亡(P<0.05),Mcl-1 ASODN组细胞出现S期明显的阻滞;Hoechst33258染色可见大量的细胞核固缩,核碎裂。结论:Mcl-1 ASODN能抑制肝癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

Silibinin induces apoptosis in human hepatoma HepG2 cells and enhances its chemo-sensitivity

目的:探讨水飞蓟宾诱导人肝癌HepG2细胞凋亡并提高5-FU、顺铂的敏感性.方法:采用MTT法和克隆形成抑制实验观察不同浓度的水飞蓟宾对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258染色法检测水飞蓟宾作用于人肝癌HepG2细胞后其细胞核形态的改变;Western blotting检测凋亡相关蛋白(Caspase-3,Caspase-9)的表达;采用水飞蓟宾联合5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP),观察对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用.结果:MTT法检测显示,水飞蓟宾对肝癌HepG2细胞有明显的增殖抑制作用,并随着水飞蓟宾浓度的增大而增强,作用于肝癌HepG2细胞48h的IC50为195.38 μmol/L;克隆形成抑制实验表明随着水飞蓟宾药物浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与对照组相比有显著差异;其细胞核固缩、边聚、裂解等细胞凋亡形态学变化;存在Caspase-3和Caspase-9蛋白的活化和降解;150 μmol/L的水飞蓟宾与不同质量浓度的化疗药物(5-FU,DDP)联合作用于HepG2细胞48h,可提高HepG2细胞对这些化疗药物的敏感性,增敏倍数分别为39.63和21.54倍.结论:水飞蓟宾通过诱导人肝癌HepG2细胞凋亡抑制细胞增殖,并提高HepG2细胞对5-FU,DDP的敏感性.     

肝癌细胞对三氧化二砷诱导凋亡的敏感性与细胞内谷胱甘肽含量的关系

目的:比较肝癌BEL-7402和SMMC-7721细胞对三氧化二砷(As2O3)诱导凋亡的敏感性差异,探讨细胞内谷胱甘肽(GSH)含量与其作用的关系。方法:不同浓度As2O3作用BEL-7402和SMMC-7721细胞24~96 h,流式细胞仪检测细胞DNA含量,计算细胞凋亡百分率;GSH检测试剂盒检测细胞内GSH含量。结果:0.25μmol/L As2O3作用24 h,有效地诱导BEL-7402细胞凋亡;对SMMC-7721细胞来说,需要用1.0μmol/L As2O3作用24 h才能达到相同的抑制效果。1.0μmol/LAs2O3作用72 h时,BEL-7402细胞的凋亡率为(43.8±0.2)%,SMMC-7721细胞的凋亡率为(12.8±0.2)%,检测BEL-7402细胞内GSH为(18.7±1.4)nmol/mg;SMMC-7721细胞内GSH为(50.8±5.2)nmol/mg,两者比较均有显著差异。结论:肝癌BEL-7402和SMMC-7721细胞对As2O3诱导细胞凋亡的敏感性不同,可能与细胞内GSH含量有关。     

聚乙烯亚胺-整合素配体复合物介导bcl-2反义核酸对结肠癌细胞的作用

目的:观察聚乙烯亚胺(PEI) -整合素蛋白的配体(Arg -Gly -Asp ,RGD)介导的bcl - 2反义核酸(antisenseoligodeoxynucleotide ,ASODN)对结肠癌细胞caco - 2的作用效果。方法:将阳离子复合物jetPEI-RGD与bcl- 2反义核酸混合形成ASODN -PEI-RGD三聚体复合物,转染caco - 2细胞。用台盼蓝拒染法计数活细胞,观察ASODN -PEI-RGD对caco - 2细胞的生长抑制作用,用流式细胞仪检测细胞的亚二倍体百分率,Heochst332 5 8染色观察细胞凋亡。结果:与ASODN对照组和jetPEI-RGD对照组相比,ASODN -PEI -RGD能够明显抑制caco - 2细胞增殖和诱导细胞凋亡(P<0 0 5 ) ,呈剂量和时间-效应关系。ASODN -PEI-RGD作用4 8h ,荧光染色可见大量的caco - 2细胞核固缩、核碎裂。结论:jetPEI-RGD介导的bcl- 2反义核酸能抑制caco - 2细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

PEI介导PKC-α反义核酸对肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用

目的:研究聚乙烯亚胺(PEI)-PKC-α反义脱氧核寡酸(ASODN)对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用.方法:RT-PCR检测肝癌SMMC-7721细胞、HepG2细胞PKC-α mRNA表达的差异,细胞增殖抑制实验检测PEI和ASODN混合的最佳质量比,WST法和克隆形成抑制实验检测细胞增殖抑制作用,免疫荧光检测PKC-α的表达水平.结果:SSMC-7721细胞PKC-α mRNA表达相对较高,PEI和ASODN的质量比为0.75/1时是PEI转染反义核酸的合适比例,对SMMC-7721细胞具有明显的增殖克隆抑制作用,且呈剂量-效应关系;ASODN和PEI-ASODN对SMMC-7721的IC50分别为16.6 μmol/L和0.58 μmol/L;PEI-ASODN能够有效抑制PKC-α蛋白的生物合成.结论:PEI-ASODN能显著抑制SMMC-7721细胞增殖和克隆形成,下调PKC-α蛋白的表达.     

血管内皮生长因子反义核酸增强HL60和K562细胞对As_2O_3的敏感性

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义核酸能否提高HL60和K562细胞对三氧化二砷(As2O3)的敏感性。方法:采用经筛选所得的最优反义核酸(A7),20个碱基经过全硫代修饰;以脂质体介导转染细胞,反义核酸和As2O3联合作用72h以后,用MTT法检测细胞生长情况,求IC50值;用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白的浓度,用流式细胞仪检测细胞凋亡百分数。结果:VEGF反义核酸可显著降低HL60、K562细胞对As2O3的IC50值,下调VEGF蛋白的表达,增加As2O3诱导的HL60、K562细胞凋亡作用。结论:VEGF反义核酸具有增强HL60和K562细胞对As2O3的敏感性,增强As2O3诱导的HL60和K562细胞凋亡作用;提示内源性VEGF蛋白具有使细胞产生耐药性的作用。     

血管内皮生长因子反义核酸增强HL60和K562细胞对As2O3的敏感性细胞对As2O3的敏感性

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义核酸能否提高HL60和K562细胞对三氧化二砷(As2O3)的敏感性.方法:采用经筛选所得的最优反义核酸(A7),20个碱基经过全硫代修饰;以脂质体介导转染细胞,反义核酸和As2O3联合作用72 h以后,用MTT法检测细胞生长情况,求IC50值;用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白的浓度,用流式细胞仪检测细胞凋亡百分数.结果:VEGF反义核酸可显著降低HL60、K562细胞对As2O3的IC50值,下调VEGF蛋白的表达,增加As2O3诱导的HL60、K562细胞凋亡作用.结论:VEGF反义核酸具有增强HL60和K562细胞对As2O3的敏感性,增强As2O3诱导的HL60和K562细胞凋亡作用;提示内源性VEGF蛋白具有使细胞产生耐药性的作用.     

血管内皮生长因子反义核酸增强HL60和K562细胞对As2O3的敏感性

目的：探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义核酸能否提高HL60和K562细胞对三氧化二砷(As2O3)的敏感性。方法：采用经筛选所得的最优反义核酸(A7)，20个碱基经过全硫代修饰；以脂质体介导转染细胞，反义核酸和AsO3联合作用72h以后，用MTT法检测细胞生长情况，求IC50值；用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白的浓度，用流式细胞仪检测细胞凋亡百分数。结果：VEGF反义核酸可显降低HL60、K562细胞对As2O3的IC50值，下调VEGF蛋白的表达，增加As2O3诱导的HL60、K562细胞凋亡作用。结论：VEGF反义核酸具有增强HL60和K562细胞对As2O3的敏感性，增强As2O3诱导的HL60和K562细胞凋亡作用；提示内源性VEGF蛋白具有使细胞产生耐药性的作用。     

一个新的靶点的反义bcl—2寡核苷酸诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：探讨针对bcl-2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸对HL-60细胞bcl-2蛋白表达和凋亡的作用。方法：应用台盼蓝拒染法和流式细胞仪检测HL-60细胞的活性和bcl-2蛋白表达和细胞凋亡的情况。结果：10μmol/L和20μmol/L的反义寡核苷酸能抑制HL-60细胞bcl-2蛋白表达和诱导细胞调亡,并且针对bcl-2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸比针对bcl-2mRNA翻译起始区的反义寡核苷酸作用更强。结论：针对bcl-2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸能抑制HL-60细胞bcl-2蛋白表达和诱导细胞调亡。     

聚乙烯亚胺介导的生存素反义核酸提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性

目的:探讨聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)介导的生存素(survivin)反义核酸(antisense-oligonucleotides,ASODN)联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)、三氧化二砷(arsenic trioxide)或羟基喜树碱(hydroxycamptothecine,HCPT)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用.方法:单独应用不同浓度的5-FU,As2O3,HCPT,或这些药物分别与survivin ASODN或PEI-ASODN联合应用,作用于SMMC-7721细胞,采用WST-8法检测SMMC-7721细胞的增殖抑制率,并计算药物作用的IC50.以金正均的概率和法进行协同作用分析.结果:不同浓度的5-FU,As2O3或HCPT联合PEI-ASODN(ASODN终浓度为0.125μmol/L)均明显降低这些化疗药物的IC50,提高SMMC-7721细胞对5-FU,As2O3或HCPT的敏感性,增敏倍数分别为36.1、4.16、18.8.金正均Q值法分析表明,5-FU,As2O3或HCPT与PEI-ASODN联合使用,均表现出协同作用.结论:PEI介导的低浓度的生存素反义核酸可提高人肝癌细胞SMMC-7721对5-FU,As2O3和HCPT的敏感性,PEI介导的生存素反义核酸与5-FU联合的作用效果最佳.     

青风藤正丁醇萃取物对肝癌细胞增殖影响的研究

为验证青风藤正丁醇萃取物(BESA)体外抗肝癌活性,研究了BESA对人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721形态变化、细胞周期、细胞凋亡和细胞增殖的影响。结果显示BESA对HepG2、SMMC-7721肝癌细胞均有抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)分别为18.23μg/m L,23.45μg/m L,且呈剂量效应关系;经BESA处理后,HepG2细胞形态变化很大,细胞出现核皱缩、贴壁性差、细胞裂解等现象,以20μg/m L的BESA处理HepG2细胞48 h后,流式细胞术检测到BESA对HepG2细胞周期的干预能力不强;但在诱发HepG2细胞发生凋亡方面效果明显,说明BESA能诱导HepG2细胞的凋亡达到抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

莱菔硫烷诱导人肝癌HepG -2细胞凋亡的JNK途径

探讨莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)诱导人肝癌HepG -2细胞凋亡过程中,JNK途径的作用.采用荧光显微镜观察凋亡细胞形态;采用Western Blot法检测人肝癌HepG -2细胞内JNK和p- JNK 蛋白的表达.结果表明,10、20、40 μmol/L的SFN作用人肝癌HepG -2细胞48 h后,...     

增殖细胞核抗原反义核酸联合5-FU抑制肝癌细胞生长

目的:探讨增殖细胞核抗原(PCNA)基因反义寡核苷酸(ASODN)联合5-FU对离体肝癌细胞及小鼠肝癌生长的抑制作用。方法:用5-FU、5-FU联合PCNA ASODN、5-FU联合聚乙烯亚胺(PEI)介导的PCNA ASODN(PEI-ASODN)分别转染人肝癌SMMC-7721细胞,改良MTT法(WST法)分析细胞生长增殖抑制效果;建立小鼠肝癌腋下移植瘤和腹水瘤模型,腋下移植瘤模型小鼠,隔日给药共5次,第13天杀小鼠,观察小鼠瘤重、瘤体积改变;腹水瘤模型小鼠,连续腹腔注射给药7次,记录小鼠平均存活天数,绘制小鼠存活曲线。结果:5-FU联合PEI-ASODN时,5-FU对肝癌细胞的IC50降低为0.165μg/mL,肝癌细胞对5-FU敏感性提高了49.7倍;肝癌腋下移植瘤小鼠各治疗组的瘤重、瘤体积均得到不同程度的抑制,其中以5-FU联合PCNA反义核酸组最高;对于腹水瘤小鼠,以5-FU和PCNA反义核酸联合治疗组平均生存时间最长。结论:5-FU联合PEI-ASODN能有效抑制肝癌细胞增殖,抑制小鼠肝癌的生长,延长小鼠存活时间。     

龙葵碱对HepG2细胞内[Ca2+]i的影响

探讨龙葵碱对HepG2细胞形态及细胞内[Ca~(2 )]i的影响,揭示龙葵碱诱导细胞凋亡的机制.以人肝癌细胞HepG2为研究对象,采用AO/EB双染HepG2细胞,激光共聚焦扫描显微镜观察细胞形态学改变,Fluo-3/AM单染HepG2细胞,激光共聚焦扫描显微镜观察细胞内[Ca~(2 )]i的改变.结果发现龙葵碱作用于HepG2 48h后,细胞形态出现典型的细胞凋亡形态;细胞内[Ca~(2 )]i浓度明显升高.表明龙葵碱升高细胞内Ca~(2 )浓度启动细胞凋亡机制.     

枸杞叶中总黄酮对人肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响

研究枸杞叶中总黄酮对体外培养的人肝癌细胞HepG2增殖抑制及其细胞凋亡的影响.用不同质量浓度的枸杞叶总黄酮作用于体外培养的人肝癌细胞HepG2,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测HepG2细胞存活率,通过Hoechst33258染色法、AV/PI双染流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况,利用免疫细胞化学法、Western blot方法分析枸杞叶中总黄酮对HepG2细胞凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3表达的影响.结果表明,枸杞叶中总黄酮分别作用于人肝癌细胞HepG2 48,72h均可明显抑制其增殖,并呈现显著的时间、剂量依赖性.高质量浓度枸杞叶总黄酮作用人肝癌细胞HepG2 48h后,HepG2细胞呈现出典型的细胞凋亡特征,凋亡率达67.3%.枸杞叶总黄酮作用于HepG2细胞一定时间后,可引起促凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达上调.枸杞叶中总黄酮可明显抑制人肝癌细胞HepG2增殖和诱导细胞凋亡,其作用机制可能是通过有效上调促凋亡蛋白Bax,破坏细胞内稳态环境,继而激活凋亡蛋白Caspase-3,最终引发人肝癌细胞HepG2凋亡.     

白凤菜总黄酮对肝癌HepG2细胞生长、增殖和凋亡的影响

研究了白凤菜(Gynura formosana Kitam.)总黄酮(TFG)对肝癌HepG2细胞的生长、增殖和凋亡的影响.噻唑兰(MTT)实验结果表明TFG对HepG2细胞体外增殖的抑制作用有浓度和时间依赖效应:处理24h后130和260μg/mL TFG实验组的HepG2细胞凋亡率均显著升高,分别达到(47.00±1.31)%和(76.39±1.39)%(p0.05);24h的半抑制质量浓度(IC50)为190.80μg/mL.实验组HepG2细胞周期阻滞在S期,细胞迁移率随TFG质量浓度的升高而下降,细胞内活性氧(ROS)水平最终显著下降至对照组的6.9%(p0.05),细胞中Bax表达量略微上调而Bcl-2表达量明显下调.综上,TFG抑制肝癌HepG2细胞增殖和诱导HepG2细胞凋亡的机制可能与下调细胞ROS水平、重构细胞内还原体系、上调促凋亡蛋白Bax以及下调凋亡抑制蛋白Bcl-2表达相关.     

文冠果种仁总皂苷诱导肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

用文冠果种仁总皂苷(the total saponins from Xanthoceras sorbifolia bunge kernel,XSTS)处理人肝癌HepG2细胞,探讨其诱导HepG2细胞凋亡的分子机制。利用JC-1荧光探针检测HepG2细胞线粒体膜电势的变化,运用流式细胞仪和比色法检测细胞内活性氧和一氧化氮水平,用Western blot法检测XSTS对细胞凋亡特征蛋白的影响。结果发现:质量浓度为8～12 mg/L的XSTS可诱导HepG2细胞发生线粒体介导的内源性凋亡,该途径受到PI3K/Akt通路调控;且XSTS可通过激发氧化应激而非硝化应激来诱导细胞凋亡。     

鱼藤素对大鼠H9C2心肌细胞的生存活力和凋亡的影响

为探讨不同浓度的鱼藤素(Deguelin)对大鼠H9C2心肌细胞活力及凋亡的影响。通过将不同浓度(0、10、50、100、500、1 000 nmol / L)的鱼藤素作用于H9C2细胞24 h、48 h、72 h,应用CCK-8 法测定鱼藤素对H9C2细胞存活率的影响;划痕实验检测(0、10、50、100、500、1 000 nmol / L)浓度的鱼藤素作用于H9C2细胞24 h、48 h后,对细胞迁移能力的影响。应用Hoechst 33342 / PI 双染试剂盒检测不同浓度鱼藤素(0、10、50 nmol / L)作用于H9C2细24 h后对细胞凋亡的影响。结果表明：10、50、100、500、1 000 nmol / L的鱼藤素作用H9C2细胞24 h、48 h、72 h后,能明显抑制其存活率,10、50、100、500、1 000 nmol / L的鱼藤素作用H9C2细胞24 h、48 h后,能明显抑制其迁移能力,且呈浓度和时间依赖性;荧光倒置显微镜观察发现鱼藤素在低浓度时便可以诱导H9C2细胞凋亡。可见鱼藤素能够呈时间和浓度依赖性来抑制H9C2细胞的生存活力并诱导其凋亡。     

龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的观察

观察龙葵碱对3种消化系统肿瘤细胞株人肝癌细胞HepG2、人胃癌细胞SGC-7901、人大肠癌细胞Ls-174的细胞毒作用.并从细胞凋亡角度揭示龙葵碱对敏感细胞株的作用机制.采用MTT法观察龙葵碱对3种肿瘤细胞株的细胞毒作用;采用AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微术(confocal)观察龙葵碱对HepG2肿瘤细胞形态的影响;PI单染,流式细胞仪测定龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的凋亡率及对细胞周期的影响.龙葵碱作用于HepG2、SGC-7901、LS-174的IC50分别为14.47μg/mL、(50μg/mL、(50μg/mL;在形态学观察实验中,阴性对照组细胞形态正常,0.003 2μg/mL、0.016μg/mL龙葵碱使细胞外周呈微弱皱缩状改变,0.08、0.4、2μg/mL龙葵碱使HepG2细胞出现大量碎片及凋亡小体等典型的细胞凋亡形态.凋亡率测定结果表明5个剂量龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡率分别为6.0%、14.4%、17.3%、18.9%、32.2%,0.08μg/mL喜树碱诱导HepG2细胞的凋亡率为21.9%.细胞周期观察发现龙葵碱各组G2/M期均消失,S期明显升高.龙葵碱对HepG2人肝癌细胞株比较敏感,能够诱导HepG2细胞凋亡,并将HepG2细胞阻止在S期,影响肿瘤细胞DNA合成.     

线粒体ROS改变参与石蒜碱诱导的HepG2细胞凋亡

探究石蒜碱诱导HepG2细胞凋亡的分子机理. CCK-8实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测加或不加SS31情况下,石蒜碱对HepG2细胞凋亡比例的影响;用核酸染料Hoechst 33342评估凋亡细胞细胞核的形态变化;用Western blot分析技术检测PARP片段的表达情况.成功构建靶向线粒体的Mito-Grx1-roGFP2转基因稳定株肝癌细胞系HepG2. SS31作为线粒体ROS的定向清除剂,能够改善石蒜碱引起的HepG2细胞形态学损伤及细胞核内PARP切割,抑制石蒜碱诱导的细胞凋亡,降低反映线粒体ROS含量的405 nm/488 nm荧光比值.研究结果提示,线粒体内ROS水平的改变是石蒜碱诱导HepG2细胞凋亡的机制之一.石蒜碱有望成为治疗肝癌的潜力药物,值得更深入的研究.