非清髓异基因造血干细胞移植动物实验研究进展

本文介绍了应用不同的非清髓预处理方案 ,进行异基因造血干细胞移植 ,供体造血细胞稳定植入、诱导受体对供体特异耐受的动物实验研究进展 ,这对临床实践有指导意义。造血干细胞移植是恶性血液病、部分恶性肿瘤等疾病最有效的治愈手段。理想的造血干细胞移植应该是低毒性预处理、最低移植相关并发症、最大植入、最强移植物抗肿瘤作用[1] 。非清髓异基因造血干细胞移植 ,是在传统异基因造血干细胞移植基础上发展起来的新的移植技术 ,其特点是非致死性预处理、加强移植前后免疫治疗、供体造血细胞完全植入或混合植入、移植并发症轻、移植适应症…     

异基因外周造血干细胞移植中ABO血型不合的输注和护理

探讨了护理因素对异基因造血干细胞移植中ABO血型主要不合和次要不合的干细胞输注的影响。对20例HLA相合、ABO血型不合异基因外周血造血干细胞移植中,外周血干细胞输注进行临床观察及护理情况分析。在输注外周血前、中、后均采取周密的预防措施。20例血型不合移植患者均顺利输注外周血干细胞并获得造血重建。说明在血型不合异基因外周血造血干细胞移植的干细胞输注中,护士对病情观察及护理水平是输注及移植成功的关键。     

Th17细胞相关细胞因子与急性移植物抗宿主病关系的探讨

目的探讨异基因造血干细胞移植治疗血液系统疾病后,血清中Th17细胞相关的细胞因子与急性移植物抗宿主病的关系。方法 78例血液病患者进行异基因造血干细胞移植,对移植后发生急性移植物抗宿主病患者(n=12),未发生急性移植物抗宿主病患者(n=14),及健康对照组(n=10),以及发生急性移植抗宿主病患者(n=10)在有效治疗前后,采用酶联免疫吸附法检测血清中细胞因子IL-17、IL-23、IL-21、IFN-γ、TGF-β1、IL-22浓度。结果 1 aGVHD者(n=12)血清中Th17细胞相关因子浓度(pg/mL)较正常对照组(n=10)和无aGVHD组(n=14)显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);而TGF-β1(1 156.61±458.04)显著低于正常对照组(2 978.34±1 647.71)和无aGVHD组(2 541.62±1 805.16),差异有统计学意义(P<0.05)。IL-22:未发生aGVHD组高于健康对照组(22.14±2.49,19.18±1.24),差异有统计学意义(P<0.05);除IL-21、IL-22和IL-23浓度高于健康对照组外(P<0.05),其余的细胞因子健康对照组和无急性aGVHD组差异无统计学意义(P>0.05),aGVHD组血清IL-22浓度与无aGVHD和健康对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。210例有效治疗者,治疗后均有降低,治疗前后差异有统计学意义(P<0.05),而IL-22在有效治疗前后差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Th17细胞相关的细胞因子与(IL-17、IL-23、IL-21、IFN-γ、TGF-β1)与aGVHD的发生发展和疗效有关,而与IL-22无关。     

非血缘脐血移植是GVHD与GVL分离的最佳移植类型

脐血已成为异基因造血干细胞移植中一个重要的干细胞来源.随着临床移植例数的增多和基础研究的进展,资料显示接受非血缘脐血移植(UCBT)患者移植后的复发率较低且慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的发生率也很低,患者具有较高的无GVHD无复发生存率和较佳的生活质量.伴随着脐血移植技术的完善,UCBT的应用也逐渐扩大至非恶性血液病和一些老年患者的移植中,其将为这些患者提供一种新的治疗选择.本文对UCBT的现状作一综述.     

异基因造血干细胞移植后免疫重建的研究进展

异基因造血干细胞移植已广泛应用于临床,是治疗血液系统疾患、实体瘤、基因缺陷及自身免疫性疾病的重要手段。造血干细胞移植后受者的免疫功能受到严重损伤,其免疫功能的恢复依靠固有免疫以及适应性免疫两个方面。免疫重建的研究对于移植感染的防治以及免疫治疗有重要意义。     

血清脂蛋白Lp(a)的测定与型糖尿病大血管病变的关系

目的 :研究血清脂蛋白 (a)的浓度和糖尿病的大血管并发症的关系。方法 :用酶联免疫吸附法定量测定 5 0例 型糖尿病患者和 5 0例正常人的血清脂蛋白 (a)水平 ,同时对糖尿病合并有大血管病变患者与无血管病变的患者的脂蛋白 (a)进行对比分析。结果 :糖尿病患者脂蛋白 (a)水平明显高于正常对照组 ,糖尿病患者有大血管病变组脂蛋白 (a)水平较无大血管病变组升高尤其显著。结论 :脂蛋白 (a)与糖尿病 型大血管病变的发生有密切的关系     

Auto-HSCT联合大剂量化疗及IL-2治疗急性白血病的临床研究

对急性白血病(AL)患者自体造血干细胞移植(Auto＿HSCT)前进行大剂量化疗,移植后给白细胞介素 2(IL 2)免疫治疗以降低AL患者Auto＿HSCT后的复发率,延长患者的生存期.10例AL第一次缓解期(CR 1)的患者进入研究.移植前急性淋巴细胞白血病(ALL)患者3例均接受大剂量甲氨碟呤1疗程及大剂量阿糖胞苷(HD Ara C)加蒽环类抗肿瘤药1疗程.急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者7例接受HD Ara C加蒽环类抗肿瘤药2疗程.化疗结束后给患者行Auto＿HSCT治疗.预处理方案为:CY/TBI;MAC或EAC方案.移植的CD34+细胞5.5×106～12.2×106/kg.患者造血重建后给IL 21×106～2×106μ治疗每天1次,5d为1疗程.患者均接受3～5疗程的治疗.经以上序惯治疗后,1例ALL患者14月后复发,经化疗无效死亡.9/10(90.00%)例无病生存至今,平均生存期37.10月(37.1±24.98),明显延长.可见对AL患者Auto＿HSCT前大剂量化疗,最大限度降低患者体内白血病负荷;移植后免疫治疗清除微小残留病,可能是降低AL患者Auto＿HSCT后复发,延长患者生存期的有效途径.     

地中海贫血骨髓移植中造血干细胞状态及功能的研究

通过分析预处理前造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSCs)的状态(数量、在细胞周期的分布、活性氧的状态、凋亡情况、DNA损伤程度、DNA损伤相关酶活性)和功能(体外的集落检测、NOD/SCID小鼠体内造血重建功能),提出用地贫患者HSCs评价其骨髓移植危险因素和等级,以及根据预处理过程中HSCs根除情况调整预处理方案是未来地贫骨髓移植发展的两大趋势.     

小鼠非清髓性单倍体相合骨髓移植模型的建立

目的建立小鼠非清髓性单倍体相合骨髓移植模型,为研究移植前诱导免疫耐受或移植后输注供者细胞促进植入提供研究平台。方法以CB6F1雌性小鼠为受鼠,移植前1 d予450 cGy全身照射（TBI）后,随机分为2组,实验组移植0 d输注C57BL/6雄性小鼠骨髓有核细胞5×107/只,对照组不予移植。然后监测受鼠造血恢复、检测供鼠性别决定基因（SRY）判断植入情况,以及外周血供者细胞尤其CD3＋细胞嵌合状态,同时观察小鼠急性移植物抗宿主病（aGVHD）的发生情况。结果对照组小鼠均存活,仅表现轻度aGVHD,血象移植后30 d内基本恢复正常水平。实验组小鼠SRY基因在移植后＋14 d、＋30 d、＋60 d时检测PCR结果均阳性,供鼠外周血淋巴细胞、单核细胞、粒细胞嵌合率在移植后14 d分别为23.8%、36.9%%、19.4%;30 d分别为49.9%、53.2%、54.4%;60 d分别为67.6%、51.6%、56.9%,其中CD3＋细胞嵌合率分别为4.4%、21.2%、54.4%。结论 450 cGyTBI的非清髓性预处理方案,可以诱导受鼠免疫耐受、供者骨髓细胞植入,嵌合率处于中低水平混合嵌合状态。     

Alzheimer病患者性激素水平测定与ApoE基因分型研究

检测散发性Alzheimer病(AD)患者与健康老年人血清雌二醇(E2)、睾酮(T)、促滤泡成熟素(FSH)、促黄体生成素(LH)水平,分析ApoE基因型和性激素水平与中国AD患者的相关性.采用放射免疫分析方法对81例Alzheimer病患者和98例正常老年人性激素水平测定,用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法分析ApoE基因型.结果为:AD组女性血清雌二醇37.25 pg·mL-1、男性睾酮2.22 ng·mL-1、促滤泡成熟素男性10.39 U·L-1、女性21.52 U·L-1、促黄体生成素男性7.54 U·L-1、女性9.42 U·L-1;正常组女性血清雌二醇39.09 pg·mL-1、男性睾酮4.07 ng·mL-1、促滤泡成熟素男性11.74 U·L-1、女性28.93 U·L-1、促黄体生成素男性1.62 U·L-1、女性6.28 U·L-1.AD组和正常对照组的ApoE基因频率存在差异,携带ApoE4的比例分别为16.1%、12.2%.ApoE4等位基因可能是中国散发性AD发生的危险因素.携带ApoE4基因型的AD患者血清雌二醇、睾酮水平明显低于对照组.提示雌二醇、睾酮水平下降可能与AD发病相关.     

自体角膜缘干细胞移植术在治疗眼表疾病中的应用

目的:探讨用自体角膜缘干细胞移植术治疗眼表疾病新方法。方法:应用自体角膜缘干细胞移植术治疗42例(48眼)眼表疾病患者,随访0.6～2a,回顾性评价疗效。结果:术眼移植片成活好,无新生血管长入,48眼均无复发,视力增进,无并发症发生。结论:自体角膜缘干细胞移植术,疗效可靠,无排斥反应,是目前治疗和预防眼表疾病复发的最佳方法之一。     

用干细胞定向培殖法修复或复制人体组织器官

近年，用血液干细胞移植的方法已攻克了血癌（白血病）。其做法是先找到ＨＬＡ（人类主要组织相容性抗原，白细胞抗原）点位与患者相同的骨髓提供者，再将其骨髓抽出来，注入经过预先摧毁原血液系统及其造血功能的患者体内，让供者骨髓内的血液干细胞在患者体内重建一套新的血液系统和造血功能。于是患者体内便流动着供髓者的血，使患者获得新生。本院已用此法治愈这类患者２０余例。 这种办法虽可治好患者的病，但别人的血毕竟基因不同，只是其ＨＬＡ在Ａ、Ｂ、ＤＲ等主要位点上相合，可接受而已，并未排除免疫反应可能，故仍存在着一定风…     

自体造血干细胞移植后的胸腺近期输出功能

目的:了解血液病患者接受自体造血干细胞移植(auto-HSCT)后外周血中的T细胞受体重排删除环(TRECs)水平,从而了解其胸腺近期输出功能和T细胞免疫重建情况。方法:采用实时定量PCR法检测9例血液病患者经auto-HSCT治疗后外周血单个核细胞(PBMNCs)中的TRECs水平;22例正常人外周血样本作为对照。结果:PBMNCs中的TRECs水平有着较大的个体差异,年龄与PBMNCs中的TRECs水平呈负相关;auto-HSCT组的每1 000个PBMNCs中的TRECs平均拷贝数(2.533±4.194)明显低于正常组(4.367±3.626)(P<0.05),但部分病例的TRECs水平已基本达到正常水平。结论:在一定时间内,auto-HSCT后的胸腺近期输出功能仍较低,不同个体T细胞免疫重建时间存在差异。     

卵巢高反应患者行卵泡期长方案治疗的 预后影响因素分析

目的:分析在使用卵泡期长方案进行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)控制性促排卵(COH)过程中,新鲜胚胎移植后妊娠与因预防卵巢过度刺激综合征(OHSS)取消新鲜胚胎移植人群的临床助孕情况及影响因素.方法:分析223个IVF-ET取卵周期,均采用卵泡期长方案,比较因预防OHSS风险而取消新鲜胚胎移植的38例患者(A组)与进行新鲜胚胎移植后妊娠未出现OHSS风险的79例患者(B组)之间基本临床资料、降调节后激素水平、临床用药、卵泡及胚胎资料的不同.结果:A组患者的基础窦卵泡数(AFC)、启动日卵泡数、hCG扳机日E_2浓度、获卵数、MⅡ卵数、受精数及可利用胚胎数均显著高于B组(P0.05).结论:对于基础AFC多、基础FSH值低的卵巢高反应患者,使用卵泡期长方案时应综合考虑启动日的卵泡数,若基础AFC及启动日卵泡数均较多,而基础FSH值较低,则不推荐使用卵泡期长方案.     

2型糖尿病患者血清脂蛋白(a)水平变化对肾功能的影响

目的:探讨2型糖尿病血清脂蛋白(a)水平变化对肾功能的影响以及降低脂蛋白(a)水平在防治早期糖尿病肾病(DN)进展中的意义.方法:(1)根据尿白蛋白排泄率(UAER)测定结果将132例糖尿病患者分为单纯DM组(56例)和早期DN组76例,比较上述两组和正常对照组(56例)的脂蛋白(a)水平;(2)将76例早期DN患者随机分为两组,对照组(30例)子常规治疗,治疗组(46例)在常规治疗基础上每晚服用阿托伐他汀20mg.分别于治疗前和治疗后6周末检测脂蛋白(a)、FBG、UAER和血肌酐,分析脂蛋白(a)水平变化与早期DN进展之间的关系.结果:(1)单纯DM组脂蛋白(a)水平与正常对照组比较无显著性差异(P＞0.05),早期DN组血清脂蛋白(a)水平明显高于正常对照组和单纯DM组(P＜0.01),脂蛋白(a)水平与UAER呈直线正相关(P＜0.01).(2)治疗组血清脂蛋白(a)水平显著降低(P＜0.01),且随着脂蛋白(a)水平的下降,UAER和血肌酐亦同步下降.结论:血清脂蛋白(a)水平升高与DN进展有关,降低血清脂蛋白(a)水平能有效减少早期DN患者的尿蛋白排泄,延缓肾功能减退.     

MALT1-A20-NF-κB信号分子在MM中的表达特点

目的:了解多发性骨髓瘤（MM）患者外周血中黏膜相关组织淋巴瘤异位基因1（MALT1）、A20与核转录因子κB（NF-κB）基因的表达特点。方法:采用SYBR GreenⅠ荧光实时定量PCR和相对定量分析法检测20例MM患者（Ⅰ期7例,Ⅱ期3例,Ⅲ期10例）及21例健康人外周血单个核细胞（PBMC）中MALT1、A20和NF-κB基因的表达情况。以β2微球蛋白基因（β2m）作为内参;采用相对定量公式:α^-△Ct×100%,分别计算MALT1、A20和NF-κB基因的表达水平。结果:MM患者PBMC中的MALT1和A20基因的表达水平较健康人都有明显的降低（P=0.000）,而MM中NF-κB基因的表达水平较正常人有所升高,但无统计学差异（P>0.05）。在健康人组,MALT1和NF-κB的表达水平呈现正相关（P=0.001,r=0.666）,而在MM组,MALT1、A20与NF-κB 3种基因均不存在明显相关性。同时,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期MM患者MALT1基因的表达量较健康人明显降低（P<0.05）,A20基因的表达量较健康人明显降低（P<0.01）,而Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期MM患者MALT1、A20和NF-κB之间的表达情况均无统计学差异。结论:当MALT1-A20介导的细胞免疫和炎症的信号通路发生异常改变时,可能与MM的发生发展有着密切关系。     

血小板输注疗效影响因素探究及其与预后的关系

目的:研究影响急性白血病患者血小板输注疗效的相关因素,探究输注疗效对患者预后的影响.方法:对中山大学附属第一医院血液内科113例急性白血病(AL)患者预防性输注的1 921次血小板的影响因素进行分类分析,并依据血小板增加指数值(CCI),将患者分为血小板输注有效组和无效组,对无效组及有效组患者进行预后分析.结果:血小板输注疗效与患者起病时的血象、脾脏大小有关,而与患者的年龄、性别、血型、疾病类型等并无统计学差异.无效组患者死亡率(45.2%)高于有效组患者(25.8%),且有统计学差异(P0.05).急性淋巴细胞白血病(ALL)患者无效组中位生存期(10.4月)远低于有效组(17.2月),具有统计学差异(P0.05),急性髓系白血病(AML)患者无效组及有效组中位生存期均未到达,两组无统计学差异(P0.05).结论:起病时伴有贫血(血红蛋白质量浓度60 g/L)、血小板降低(血小板计数20×10~9/L)、白细胞升高(白细胞计数50×10~9/L)等血象异常的急性白血病患者更易发生血小板输注无效,血小板输注无效的患者的疾病预后差于输注有效的患者.     

豫南地区汉族人群类风湿关节炎患者IL-18基因启动子-607C/A多态性检测

采用序列特异性引物的聚合酶链反应技术(PCR-SSP)分析110例类风湿关节炎(RA)患者和100例健康体检者的IL-18基因启动子在-607位点的单个核苷酸多态性,检测豫南地区汉族人群白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)基因启动子单个核苷酸多态性与类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发生是否存在关联.结果表明,RA患者组与健康对照组在IL-18基因-607位点的等位基因频率的分布及基因型频率的分布比较差异均有统计学意义(χ2=8.668、4.225,P<0.05),抗CCP抗体阳性组和阴性组在IL-18基因-607位点的基因型频率分布差异没有统计意义(χ2=0.941,P>0.05),说明IL-18基因启动子-607位点的多态性与RA患者类风湿因子存在关联.     

氨磷汀对急性放射性肠炎小鼠NF-κB 通路和VCAM-1、ICAM-1基因表达的影响

目的:研究氨磷汀对急性放射性肠炎小鼠小肠组织中核转录因子kappaB(NF-κB)通路和血管间粘附分子-1(VCAM-1)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)基因表达的影响和意义.方法:将小鼠分成对照组、实验组、氨磷汀腹腔注射干预组,采用6Gy 60Coγ-射线全身辐射,于第1、7、14天分批处死小鼠观察病理改变.实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测不同时间点对照组、实验组和氨磷汀干预组NF-κB、VCAM-1、ICAM-1基因mRNA表达水平的变化.结果:辐射后实验组、干预组均可见明显黏膜下层微血管损伤,干预组损伤较实验组轻.辐射后第1天实验组、干预组小鼠小肠组织中NF-κB、VCAM-1、ICAM-1基因mRNA表达水平均显著升高(P0.05),干预组升高水平显著低于实验组(P0.05);第7天实验组各基因mRNA水平均呈下降趋势但仍高于对照组(P0.05),干预组达到或接近对照组水平;第14天实验组、干预组各基因mRNA表达水平与对照组比较无统计学差异(P0.05).结论:急性放射性肠炎早期即发生NF-κB、VCAM-1、ICAM-1基因mRNA的表达上调,可能在辐射后微血管损伤中发挥作用,氨磷汀可能通过下调上述基因表达对微血管起到保护作用.     

Elf-1基因在急性髓细胞性白血病中的表达情况

目的:建立实时定量PCR检测Elf-1基因表达水平的方法,了解急性髓细胞性白血病(AML)患者外周血Elf-1基因表达水平.方法:采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和相对定量分析法检测33例AML患者:M2型17例、M3型6例、M5型10例和20例健康人外周血的单核细胞的Elf-1表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,采用公式2~(-△Ct)×100%计算Elf-1基因表达水平.结果:AML组Elf-1表达水平(13.518±19.197)%明显高于健康对照组(2.044±1.321)%(P<0.01),不同AML亚型之间Elf-1的表达水平没有显著性差异(P=0.52),但各亚型AML的Elf-1的表达水平均与健康对照组比较均有显著性差异(P<0.01).结论:建立SYBR Green Ⅰ荧光实时定量PCR分析外周血Elf-1表达水平的方法,检测急性髓细胞性白血病Elf-1基因高表达情况.