从五十种药用植物筛选胰蛋白酶抑制剂

胰蛋白酶抑制剂的生理作用,除保护生物体的一些组织不被胰蛋白酶水解外,对生物的受精~(1)、胚胎的发育~(2)、血液的凝固及抗凝固~(3)都有密切的关系。近年来已发表了胰蛋白酶抑制剂对多种疾病的影响~(4)及其在动物实验和临床治疗研究方面的综合报导~(5)。胰蛋白酶抑制剂作为药物应用有着广阔的前景。目前,对来源于动物的胰蛋白酶抑制剂的研究比植物的多且详细,但其含量极微。植物来源的胰蛋白酶抑制剂的研究也多限于豆科植物的种子。中国医药学是一个伟大的宝库,中草药的种类繁多、来源丰富。本研究的目的是从中草药筛选和提取胰蛋白酶抑制剂,研究其理化性质及生理活性,从而说明其药理作用。本文报导了从五十种药用植物筛选出入种含有胰蛋白酶抑制剂的物质,为今后的进一步研究打下基础。     

补骨脂胰蛋白酶抑制剂的提取及其特征

前文~(1)我们报道了从五十种中草药中筛选出补骨脂、黑豇豆、天花粉等八种含有胰蛋白酶抑制剂的活性植物物质。本文报道补骨脂胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及其一些特性。材料和方法(一)实验材料及其预处理1.补骨脂购自省医药采购供应站。将补骨脂装入索氏提取器,用氯仿抽提六小时,风干后粉碎,经80目筛筛分备用。2.胰蛋白酶新疆伊犁地区肉联厂生化制药厂产品。3.羊胰蛋白酶结晶品。上海生化所东风试剂厂产品。(二)底物及试剂     

眉豆多糖的提取工艺及其稳定性

以水为提取剂,眉豆多糖提取率为指标,采用单因素试验和正交试验确定眉豆多糖提取的最佳工艺并对其稳定性进行研究.结果表明:提取眉豆多糖的最佳工艺为提取温度60℃,提取时间3 h,料液比(m(料)∶V(液))1∶50;眉豆多糖对光和热敏感,pH为5~7时稳定性好.     

大豆KUNITZ型胰蛋白酶抑制剂的稳定性及抗虫性研究

大豆kunitz型胰蛋白酶抑制剂（SBTi-A2)存在于种子中，2种kunitz型胰蛋白酶抑制剂Ti^a和T^1d得到纯化，并对它们的pH稳定性和温度稳定性进行了比较研究，而且通过人工饮料喂养鳞翅目昆虫棉铃虫来研究SBTi-A2的抗虫性，结果显示，棉铃虫的幼虫喂食含有Ti^a的人工饲料后，表现出生长延缓、体重减轻、羽化率降低、死亡率增加，由此显示了SBTi-A2作为生物农药及利用转基因方法使作用提高抗虫性的应用前景。     

中国野生大豆胰蛋白酶抑制剂的初步研究

采用分离提取，电泳回收，ＰＡＧＥ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，亲和电泳和抑制活性测定等方法，对我国一年生和多年生野生大豆种子蛋白中的胰蛋白酶抑制剂进行了初步研究。在４５°Ｎ来源一的上生野生大豆中得到纯化的胰蛋白酶抑制剂。通过电泳迁移率，分子质量，末端分析和抑制活性等测定，证明中ＳＢＴｉ－Ａ２的Ｔｉ＾ｂ型。     

由生产胰岛素后的猪胰残渣和废液中用亲和层析法制备胰蛋白酶抑制剂

1.介绍了两种新的固定化胰蛋白酶的制备方法。一种是以微球型硅胶为载体,以戊二醛为交联剂,将猪胰蛋白酶吸附和固定在载体上。另一种是以甘蔗渣纤维素为载体,以对-β-硫酸酯乙砜基苯胺为双功能试剂,将猪胰蛋白酶共价偶联在载体上。两者都已成功地用作亲和层析的吸附剂,从工业生产胰岛素后的胰渣和废液中回收胰蛋白酶抑制剂。 2.提出了应用固定化胰蛋白酶的亲和层析技术从胰渣和废液中回收胰蛋白酶的工艺流程。经过中间试验,证明采用所制订的工艺流程,可以得到相当数量、具有一定纯度的胰蛋白酶抑制剂。 3.根据对所得抑制剂的初步分析,推测它是一种小分子量的硷性多肽,类似Kazal抑制剂。     

大豆胰蛋白酶抑制剂的制备与性质测定

用DEAE-纤维素柱层析分级洗脱,从大豆中分离出三种胰蛋白酶抑制剂。以BAEE作底物,测得三种组份对胰蛋白酶的抑制程度为16.6％、25.0％和100％。三种抑制剂的分子量分别为20000、21000和12000,等电点是pH3.4、pH2.7和pH4.5。     

萨尔瓦多型银合欢种子胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与性质研究

本研究从萨尔瓦多型银合欢(Leucaena leucocephala cv.Salvador)种子中分离纯化出一种新的胰蛋白酶抑制剂,即萨尔瓦多型银合欢种子胰蛋白抑制剂(Trypsin Inhibitor from Leucaena leucocephala cv.Salvador seeds,LlsTI).成熟的种子经粉碎,生理盐水浸提之后,经CM-Sepharose阳离子交换层析得到LlsTI纯品.该胰蛋白抑制剂为19.8kDa的单体蛋白.其N末端测序结果为KGSYLRDVRG,而其内部则含有一段KTAPLVVGFLK的序列,与已知的蛋白酶抑制剂序列都不同,表明LlsTI为一种新的胰蛋白酶抑制剂,同时也含有一部分与已知Kunitz型抑制剂相保守的碱基.LlsTI对胰蛋白酶的摩尔抑制比近似为1∶1.其对于胰蛋白酶属竞争性抑制剂,其Ki值为2.77×10-10 M.LlsTI对胰蛋白酶的抑制活力表现出对高温和pH变化较高的耐受性.但其活性受100mM DTT影响.本研究对LlsTI对其它丝氨酸类蛋白酶的抑制作用也做了测定,其中只有胰蛋白酶的活性受到了抑制.根据圆二色谱的分析结果,LlsTI是一种αβ蛋白,其二级结构在室温下的水和缓冲液Tris-HCl(pH7.5)中组成相似.     

菜豆抗营养因子器官分布特异性分析

以13份国内外菜豆品种为植物材料,测定了其叶片和豆荚中植物凝集素、皂苷、胰蛋白酶抑制剂和植酸4种抗营养因子的含量或活性,并进行了相关性分析及聚类分析.结果表明,菜豆品种抗营养因子分布存在器官特异性,植物凝集素、胰蛋白酶抑制剂、皂苷主要分布在菜豆的豆荚中,植酸在叶片中分布较多.相关性分析得知菜豆的叶片和豆荚的4种抗营养因...     

大豆完全脱腥蛋白粉

该发明首次实现了大豆完全脱腥,即对大豆胰蛋白酶抑制剂、血球凝集素、脂肪氧化酶等的钝化率大于95%.     

苦荞胰蛋白酶抑制剂提取方法的研究

分别用磷酸缓冲液、０．２ｍｏｌ／Ｌ硫酸、０．４ｍｏｌ／Ｌ三氯乙酸以及水提法从苦荞种子中提取胰蛋白酶抑制剂,对四种提取方法所得产物的抑制活性及柱层析纯化结果比较表明：以磷酸缓冲溶液为提取介质,经热变性、盐析及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析分离后苦荞胰蛋白酶抑制剂的活性和得率较高,是较为理想的提取方法。     

赤小豆胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及其性质研究

用酸抽提、2.5％TCA热处理、硫酸铵盐析、凝胶层析和DEAE纤维素离子交换层析等方法,从中药赤小豆中分离得到一种胰蛋白酶抑制剂。聚丙烯酰胺凝胶电泳呈单一谱带。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定,其分子量为7400。N-末端分析和氨基酸组成测定结果表明,赤小豆胰蛋白酶抑制剂不含半胱氨酸和胱氨酸,是以酪氨酸为N-末端,由54个氨基酸残基组成的单一多肽链。它仅对胰蛋白酶有较强的抑制作用,对胰凝乳蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶和木瓜蛋白酶均无明显的抑制活力,对热及酸碱亦较稳定。     

苦荞类胰蛋白酶水解酶的纯化及部分性质研究

采用缓冲液提取、盐析、凝胶过滤及离子交换层析等方法，从苦荞种子中分离纯化出1种类胰蛋白酶水解酶，经十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)测得其分于量为67kD，等电聚焦(IEF)测得等电点为6．3．该酶可以水解胰蛋白酶的底物BApNA，而且其活性不受苦荞胰蛋白酶抑制剂的影响．通过比较，苦荞中的胰蛋白酶水解酶在性质上与报道的甜荞BAPAase极为相似，可能属于同一类蛋白酶．     

补骨脂胰蛋白酶抑制剂的亲和层析分离纯化和部分性质

本文介绍牛胰蛋白酶—对氨基苯砜乙基(ABSE)—Sepharose—4B的制备,及用此亲和吸附剂分离提纯补骨脂胰蛋白酶抑制剂的过程。用该方法对补骨脂胰蛋白酶抑制剂粗提物进行分离,可获得电泳单点纯样品。经SDS—PAGE电泳测定,该抑制剂的分子量为55000。等电聚焦电泳测定其等电点为pⅠ6.6,Chiff试剂染色为阴性。氨基酸组成分析結果表明含12种氨基酸,其中Gly、Glu含量最高。     

重组Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂的性质及抑制机理

利用大肠杆菌表达系统,成功表达并纯化获得了重组Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂(rBBTI).对比研究了天然Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂(BBTI)和rBBTI的酶学性质和稳定性,以及分别抑制胰蛋白酶和糜蛋白酶的抑制动力学.结果表明:rBBTI和BBTI都有较好的热稳定性,pH对rBBTI的活性影响...     

具有抑制糖苷酶和胰蛋白酶双重活性的亚麻多肽的大肠杆菌重组表达及其活性分析

亚麻胰蛋白酶抑制剂(Linum usitatissimum L.LUTI)是亚麻中一种兼具胰蛋白酶抑制剂和α-葡萄糖苷酶抑制剂双重活性的多肽。文章将LUTI基因连接在pGEX-6p-1载体上获得重组载体pGEX-6p-1-LUTI,转化至大肠杆菌菌株E.coliBL21(DE3)表达,经GST-Sepharose4B、Prescission Protease酶切GST标签、Sephacryl S-200凝胶层析,获得分子量大小为8kDa电泳纯的重组LUTI(rLUTI)。经抑制活性测定,相比天然的LUTI,rLUTI对胰蛋白酶和α-葡萄糖苷酶抑制活性明显提升。二硫键存在与否对两种酶的抑制活力均有影响。利用定点突变技术获得rLUTI的C4/A,C49/A,C4、49/A突变体,进一步双酶抑制活性及CD结构分析显示,rLUTI的C4/A、C49/A及C4、49/A突变体对胰蛋白酶抑制活性影响尤为明显,α-葡萄糖苷酶的抑制活性略微下降;其中rLUTI的C49/A及C4、49/A突变体完全丧失了对胰蛋白酶的抑制活性。C4/A的突变对rLUTI的二级结构影响最为明显,导致α螺旋结构含量的降低。以上结果表明rLUTI第4位氨基酸Cys是影响其二级结构的关键位点,第49位氨基酸Cys则在维持其双酶抑制活性上发挥着重要作用,特别在胰蛋白抑制活性方面尤为突出。     

马铃薯蛋白酶抑制因子特性的研究

本文研究了马铃薯蛋白酶抑制因子的稳定性及其对胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的抑制能力,结果表明：该抑制因子对胰蛋白酶活性的抑制作用较弱,最大抑制程度为６５％;对胰凝乳蛋白酶活性的抑制作用较强,抑制程度最高可达９５％以上,并且,它对ｐＨ及温度的变化均具有较强的稳定性．     

单宁酸与固定化胰蛋白酶相互作用的研究

研究了单宁酸(TA)对硅胶固定化胰蛋白酶活性的影响,通过酶活抑制测定方法和紫外分光光度法测定了TA与固定化胰蛋白酶作用的最适浓度与最适反应时间,研究了在pH 8.0 Tris-HCl、pH 2.4的甘氨酸-HCl以及含有1 mol/mL NaCl的Tris-HCl三种缓冲液中TA与固定化酶作用的平衡常数KA和结合位点数n.结果表明:TA对固定化胰蛋白酶有不同程度的抑制作用,当反应体系中TA的浓度为7.5×10-6mol/L时,固定化酶活力为91.1 U,抑制率大约为50%,TA与固定化胰蛋白酶最适反应时间为30 s,在pH 2.4的甘氨酸-HCl及含1 mol/mL NaCl的Tris-HCl中,TA与固定化酶的平衡常数KA减小了100倍,结合位点数n也有不同程度的降低.     

豆奶

豆浆是人们爱吃的饮料。但大豆加工成豆浆,往往加热时间短,其所含的“胰蛋白酶抑制素”没有全部破坏掉。人喝了这种豆浆后,胰蛋白酶抑制素便与人体内的胰蛋白酶相结合,降低胰酶对食物的消化能力和吸收作用,造成营养不良,影响儿童的生长     

大豆胰蛋白酶抑制剂及其临床应用

胰蛋白酶抑制剂是具有抑制胰蛋白酶作用的一类物质,能够参与调节体内许多重要的生命活动过程。本文介绍了大豆胰蛋白酶抑制剂结构、生理功能及其临床应用方面的研究进展。