人血清淀粉样蛋白A的原核表达及抑菌研究

人血清淀粉样蛋白A1(Serum amyloid A1 protein,SAA1)是由肝脏分泌的一种急性时相反应蛋白,在炎症、创伤或感染后在血浆中迅速上升.利用实验室前期构建的SAA1蛋白表达载体p ET28a-SAA1-β,原核表达重组人血清淀粉样蛋白A1的β亚基,纯化获得高纯度的SAA1-β蛋白.同时,将表达的SAA1-β蛋白与白色念珠菌SC5314共培养,检测其对SC5314生长状态的影响.结果显示,在蛋白浓度为0、2、20、200 mg/L时,菌落平均个数分别为423、385、262和217个,抑菌率分别是0%、8.98%、38.06%和48.70%,表明SAA1-β蛋白浓度在200 mg/L范围内,对白色念珠菌SC5314有较好的抑制作用,且抑制作用与蛋白浓度呈正相关.     

一种高效纯化血清淀粉样物质A(SAA)的方法

通过密度梯度超速离心、脱脂从急性相胸水中分离得到含有血清淀粉样物质A（Serum AmyloidA,SAA）的高密度脂蛋白（HDL），再通过两次Sephacry1S-200层析纯化SAA蛋白。经SDS-PAGE电泳和Western Blotting检验证实得到的SAA蛋白纯度高，可作为抗原免疫动物制备抗体，方法可用于从胸水中大量制备SAA。     

肥胖抵抗现象及其机制研究

随着肥胖症在全球迅速蔓延,国内外学者对肥胖的研究也逐渐深入,食源性肥胖抵抗（diet-induced obesity resistance,DIO-R）表现为肥胖易感程度低,与肥胖机体相比能量代谢状况较好,是机体能量代谢研究中较新的研究方向。本研究探讨了现阶段国内外肥胖抵抗大鼠的主要筛选方法,就食源性肥胖抵抗与食源性肥胖（diet-induced obesity,DIO）机体代谢差异最新研究成果进行综述,从瘦素敏感性、胰岛素敏感性、脂联素水平、食物利用率等方面分析了肥胖抵抗现象的发生机制,并从运动生理生化的角度提出现阶段肥胖抵抗研究存在的问题,对肥胖抵抗大鼠代谢及机制差异的研究前景进行展望。     

Rheb在诱导和改善胰岛素抵抗中的作用

Rheb是Ras超家族中GTP结合蛋白,具有调节多种生理学功能的作用。为进一步弄清楚Rheb在胰岛素抵抗发生中的作用及在胰岛素抵抗改善过程中的作用,通过先建立胰岛素抵抗小鼠为模型,再通过有氧运动改善胰岛素抵抗状况的方法,研究并检测前后两阶段小鼠组织的Rheb、mTOR和PGC-1α表达情况。结果表明在小鼠诱导胰岛素抵抗发生阶段Rheb和mTOR的表达是同步升高的,PGC-1α表达是降低的;然后经有氧运动改善其胰岛素抵抗的阶段时Rheb与mTOR是同步降低的,而PGC-1α表达是升高的。可见Rheb是通过mTOR通路在高脂饮食诱导胰岛素抵抗中也发挥着重要作用,同时其表达下降后也可有效调控机体代谢状况,改善胰岛素抵抗。     

斑马鱼血清样淀粉A基因在病毒感染中的表达分析

利用生物信息学技术对模式生物斑马鱼(Danio rerio)血清样淀粉A(serum amyloid A,SAA)蛋白与其他物种进行序列比对发现:SAA蛋白序列具有极高的同源性,SAA的进化趋势和物种进化趋势基本一致.实时荧光定量PCR结果显示:斑马鱼SAA对虹彩病毒(ISKNV)、脂多糖(LPS)和聚肌胞苷酸Poly(I:C)均表现出典型的急性应答蛋白特性,表达量均呈现先急剧升高,后迅速下降恢复到正常水平的模式,暗示其在先天性免疫应答中具有重要作用.     

低温胁迫下烟草海藻糖与海藻糖酶的动态关系研究

研究了低温胁迫下烟草品种K326的海藻糖和海藻糖酶等指标的变化,结果表明:⑴低温锻炼、海藻糖和井冈霉素A处理均可引起烟草体内海藻糖含量增加,海藻糖酶活性降低,这种此消彼涨的关系反映了海藻糖可能是调节植物体抵抗逆境的一类应激物;⑵不同处理可使低温胁迫下烟草可溶性蛋白质代谢发生相应变化,SDS-PAGE结果证明三种处理均可能诱导低温胁迫相关蛋白的合成或表达增强.     

真核表达肝药酶UGT1A9可溶重组蛋白方法探索

UDP-葡萄糖醛酸基转移酶(UGTs)是人体重要的肝脏药物代谢酶,其底物选择性、催化机制等研究因难以获得可溶性全酶而受到限制.本研究以制备UGT1A9可溶重组蛋白为研究目标,通过筛选重组蛋白表达体系、融合标签种类及linker长度,优化重组蛋白表达纯化条件和方法,实现了重组UGT1A9的大量制备.HEK293F细胞分泌表达的His₈-MBP-NSAS-UGT1A9(氨基酸25-466)重组蛋白经Ni-TED亲和纯化介质从培养基上清液中分离,洗脱产物经SDS-PAGE、Western blot及MS检测鉴定为目的蛋白,通过Bradford法测得重组蛋白最终产量为2 mg/L,纯度达到95%以上.本研究建立了一种人源药物代谢酶UGT1A9的可溶重组蛋白表达纯化方法,为UGT1A9及UGTs同工酶的药物代谢、催化机制及结构解析研究奠定基础.     

双向电泳联用质谱技术研究水稻明恢63对细菌性条斑病侵染的应答

水稻细菌性条斑病是由细条病菌Xanthomonas oryzae pv. oryzicola (Xooc)引起的一种细菌性病害,是我国南方稻区的主要病害.为了探明水稻对细条病的应答机制,我们应用双向电泳联用质谱技术,研究了水稻品种明恢63在水稻细条病病菌侵染后不同时期的全蛋白变化,并对差异蛋白进行了鉴定以及分析归类.共鉴定出17种表达上调的蛋白和10种表达下调的蛋白,这些蛋白参与了水稻对细条病侵染的信号识别及防卫应答,其中包括信号转导类蛋白、防卫相关蛋白、代谢相关蛋白和参与蛋白质合成的蛋白等.     

中华按蚊AsBe3基因的克隆、生物信息学分析与分子对接

【目的】克隆中华按蚊(Anopheles sinensis)羧酸酯酶基因AsBe3,并对该基因进行生物信息学和分子对接分析。【方法】克隆AsBe3基因编码序列,并在AsBe3蛋白的理化性质、系统发生关系、二级结构、多重序列比对、系统发育关系等方面对进行了预测和分析;通过同源建模和分子对接,分析AsBe3蛋白与氟氯氰菊酯形成稳定复合物的关键氨基酸残基。【结果】通过克隆得到了编码AsBe3基因的序列,大小为1 302bp。在系统发育关系方面,AsBe3蛋白在8种不同物种中具有很高的保守性。AsBe3蛋白是疏水性蛋白,相对分子质量为48.45kDa,无信号肽和跨膜区。氟氯氰菊酯与AsBe3蛋白的结合自由能约为-42.3kJ·mol~(-1),理论上AsBe3蛋白能够代谢氟氯氰菊酯。【结论】研究结果为后续对AsBe3基因进行生物学功能研究奠定了基础,为下一步开展AsBe3蛋白代谢研究提供了基础数据,也为阐释羧酸酯酶代谢抗性的分子机制提供了理论依据。     

血脂类代谢研究中的转基因动物模型

转基因疾病动物模型 ,通过不表达或过量表达的基因来表现各种疾病。脂质代谢是人体中的一种极为复杂的生理过程 ,在与脂质代谢有关的基因中 ,既有促进动脉粥样硬化形成的因素 ,也有降低动脉粥样硬化发病的成份。本文介绍了涉及脂质代谢有关的载脂蛋白 (Apo)类基因 ,如ApoE、ApoA、ApoB、ApoC ;相应的受体基因 ,如A型人清道夫受体SR A、SR B1和SR CD ;与脂质代谢有关的酶和转运蛋白的基因 ,如胆固醇脂转运蛋白 (CETP)、脂蛋白脂酶 (LPL)等几十种转基因动物模型及其特点 ,这些与血脂有关的转基因动物模型在研究发病机理、药物筛选…     

糖脂代谢参与糖尿病脑损伤的研究进展

糖尿病脑损伤是糖尿病(diabetes mellitus,DM)的主要并发症之一,表现为海马区神经细胞损伤、β-淀粉样蛋白沉积、Tau蛋白异常磷酸化与神经纤维缠结的形成、突触可塑性下降、脑萎缩和痴呆等类似于阿尔茨海默病(alzheimer's disease,AD)样改变。糖脂代谢异常与DM脑损伤发生有密切关系。胰岛素抵抗、线粒体功能障碍、氧化应激等在糖脂代谢异常中起重要作用。通过研究糖脂代谢在DM脑损伤的作用机制,以期从代谢的角度,寻找延缓DM脑损伤、防治AD的新方法。     

槲皮素对2型糖尿病患者机体铁代谢的影响

2型糖尿病(T2DM)主要是由于胰岛素抵抗或机体代谢紊乱所导致的一种慢性疾病.铁是人体中不可或缺的一种微量元素,对维持机体的正常生理功能非常重要.研究表明,铁过载是T2DM的诱因之一.槲皮素是一种天然的黄酮化合物,能够螯合机体内的铁,而且具有抗氧化、抗炎症、增强胰岛素敏感性等作用.系统阐述了T2DM与铁代谢、槲皮素的关系,为T2DM的防治提供理论依据.     

基于单片机的红外遥控器解码器设计

SAA3010T是一种通用型红外遥控信号发送用的集成电路,适用于电视机、组合音响、VCD、DVD、风扇、电玩等设备的遥控操作。本文给出基于单片机STC80C51,红外发送芯片为SAA3010T,红外接收为SFH506的解码器设计,作为单片机应用产品的输入设备用于参数设置,在实际应用中收到了良好效果。     

母体高脂暴露编程子代胰岛素抵抗研究现状

胰岛素抵抗易感人群大多存在营养代谢模式异常,而这种营养代谢异常可能在胎儿期便已形成．生命早期营养的远期效应是营养学的重要研究内容．从成人疾病的胎儿起源出发对近年来关于母体高脂暴露编程子代胰岛素抵抗研究报道进行了综述．     

双向电泳联用质谱技术研究水稻明恢63对细菌性条斑病侵染的应答

水稻细菌性条斑病是由细条病菌物Xanthomonas oryzae pv.oryzicola（Xooc）引起的一种细菌性病害，是我国南方稻区的主要病害．为了探明水稻对细条病的应答机制，我们应用双向电泳联用质谱技术，研究了水稻品种明恢63在水稻细条病病菌侵染后不同时期的全蛋白变化，并对差异蛋白进行了鉴定以及分析归类．共鉴定出17种表达上调的蛋白和10种表达下调的蛋白，这些蛋白参与了水稻对细条病侵染的信号识别及防卫应答，其中包括信号转导类蛋白、防卫相关蛋白、代谢相关蛋白和参与蛋白质合成的蛋白等．     

家蚕血液肽聚糖识别蛋白的鉴定和生物信息学分析

采用双向电泳和质谱技术分析、鉴定了家蚕血液中存在的肽聚糖识别蛋白(PGRP).为了进一步研究该蛋白的结构和功能,采用了生物信息学方法对其理化性质、疏水性/亲水性、信号肽、二级结构、三级结构、亚细胞定位和GO功能注释等进行了分析.结果发现,肽聚糖识别蛋白是一种分泌类蛋白,可能具有信号肽.其主要分子功能为肽聚糖受体,在生物学进程中发挥的主要作用为肽聚糖代谢和先天性免疫应答.     

利用SpyTag/SpyCatcher体系提高毕赤酵母重组蛋白生产能力

毕赤酵母是一种甲基营养型酵母,可以利用甲醇作为唯一的碳源和能源,是应用最为广泛的真核外源蛋白表达系统之一.毕赤酵母的甲醇利用率和同化效率较低,高浓度甲醇对细胞有毒性,其中间代谢产物甲醛、甲酸等毒性物质的积累会严重抑制细胞生长,限制目的蛋白的产量.本研究拟在毕赤酵母过氧化物酶体中,利用多酶组装技术在甲醇代谢关键酶之间构建...     

SIRT1在运动防治糖尿病患者骨骼肌胰岛素抵抗中的作用

沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)是NAD+依赖的组蛋白去乙酰化酶,参与葡萄糖/脂质代谢、线粒体生物合成、炎症、自噬和生理节律等.最近研究表明,SIRT1在糖尿病发病中发挥重要作用,糖尿病发病率升高与饮食结构的改变和久坐的生活方式密切相关,运动可以通过SIRT1介导的调控通路改善糖尿病患者骨骼肌的胰岛素敏感性,降低胰岛素抵抗.概括了近几年腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK),SIRT1,过氧化物酶体增殖物激活受体γ协同刺激因子1α(PGC-1α)在运动防治糖尿病中的研究现状及发展趋势,为通过运动改善骨骼肌代谢功能防治糖尿病提供新的思路.     

Era蛋白(E.coli ras-like protein)——一个可能参与真、原核细胞信号调控的新分子开关

充足的证据表明:G蛋白作为真核细胞的重要分子开关参与细胞的增殖调控以及部分代谢调控过程。而近年来在大肠杆菌中新发现的Era蛋白(E.coli ras-like protein)则是与已知的三聚体G蛋白和小分子G蛋白不同的一种新的GTP结合蛋白。进一步的研究发现该类GTP结合蛋白不仅存在于原核的大肠杆菌中,而且在高等植物、人类细胞中均含有该蛋白的同源蛋白。大肠杆菌的Era蛋白主要位于细胞膜的内侧,在细胞质中也有一定的分布;真核细胞ERA(ERG)蛋白来源于原核细胞,定位于线粒体或叶绿体上。ERA或ERG蛋白有可能担负着与其它两类G蛋白同样重要的分子开关功能。已有的研究表明,Era蛋白参与调节原核生物的细胞分裂、细胞周期以及部分细胞代谢过程;在哺乳动物细胞中,ERA的同源蛋白可能与细胞周期的G1期调控以及细胞凋亡有关;真核植物中相关研究报道尚少,推测该蛋白可能与种子的正常发育有关。     

小麦烷基间苯二酚对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗改善作用及机制

低度慢性炎症状态是肥胖导致机体胰岛素抵抗的重要原因之一。小麦烷基间苯二酚(alkylresorcinols, ARs)是全麦食品膳食的生物标记物和重要的活性功能成分。利用体外炎症因子诱导,建立3T3-L1成熟脂肪细胞胰岛素抵抗模型,通过检测脂肪细胞脂质分解和葡萄糖吸收与利用情况,探讨小麦ARs在炎症状态下对脂肪细胞胰岛素抵抗的保护机制。研究结果表明:不同浓度小麦ARs(5~20μmol/L)干预能够剂量依赖性地改善炎症因子诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗,脂肪细胞对葡萄糖利用率分别提升了4.3%、10.2% 和24.0%;小麦ARs可以显著缓解炎症因子导致的脂肪细胞脂质分解。进一步机制解析发现:炎症因子显著降低了脂肪细胞糖代谢两个关键蛋白Akt的磷酸化(p-Akt)及其下游GLUT4蛋白表达,导致其葡萄糖利用障碍,而ARs干预显著提升了这两个蛋白的表达;采用PI3K抑制剂(LY294002)预处理脂肪细胞后,ARs 对于脂肪细胞p-Akt及GLUT4表达的增加被抑制,相应的对于葡萄糖吸收的改善作用也被显著降低,脂肪细胞脂质分解增加,表明ARs通过特异性激活p-Akt/GLUT4信号通路改善了3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗。最后,研究了小麦ARs的5种主要单体成分分别对于脂肪细胞胰岛素抵抗的改善作用,结果表明,十七烷基间苯二酚是小麦ARs发挥生理功能的主要活性物质。