昆明白小鼠精原干细胞的体外培养

建立了一种小鼠精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)的分离、纯化和培养体系,主要包括SSCs的差异贴壁分选(differential adherence selection)、无血清培养基和MEF(mouse embryonic fibro-blast)饲养层。无血清培养基以StemPro-34 SFM为基础培养液,补充多种添加剂和GDNF(glial cell line-derived neurotrophic factor)、可溶性GFRα1(soluble GDNF family receptorα-1)和bFGF(basic fibroblastgrowth factor)等因子。昆明白小鼠(KMmice)幼鼠的生精细胞在这一培养体系中能够培养和增殖1个月。RT-PCR检测还表明培养的细胞同时表达Oct4和Sox2,说明SSCs与ESCs两者的自我复制可能享有共同的维持机制。     

大鼠胚胎神经干细胞体外培养及诱导分化

神经干细胞在理论研究和临床应用上有着广泛的前景.本文主要在体外分离培养SD大鼠胚胎前脑的神经干细胞,并分别用去除生长因子或添加全反式维甲酸(ATRA)两种方法诱导分化.免疫荧光染色技术分别检测细胞巢蛋白(Nestin)的表达及分化后β微管蛋白Ⅲ(β-Ⅲtubulin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,计算分化率.结果显示:细胞生长状态良好,呈Nestin表达阳性.分化后可获得β-Ⅲtubulin及GFAP表达阳性的细胞,其中ATRA诱导方法获得β-Ⅲtubulin阳性细胞较多.     

胚胎干细胞体外定向诱导分化的研究进展与存在的问题

胚胎干细胞的体外定向诱导分化研究已成为发育生物学和临床细胞移植治疗的研究热点.本文介绍了胚胎干细胞向多种组织细胞分化的研究情况及未来研究前景,并分析了胚胎干细胞应用方面主要存在的问题.     

神经干细胞的诱导分化

目的：探讨神经干细胞（NSCs）的诱导分化机制。方法：本文就Nscs的来源、分布、诱导分化的调控机制和因素以及其应用前景作一综述。结果：神经干细胞可从鼠、人的胚胎和成年中枢神经系统（CNS）成功分离并培养，具有自我更新和多分化潜能，经体外诱导或植入体内后均能分化为成熟神经元和神经胶质细胞。结论：神经干细胞的发现和研究的深入为神经发育研究及中枢神经功能重建提供了新的思路。     

人和小鼠神经干细胞的体外培养的分化研究

首次克隆了小鼠神经元标志性微管蛋白βⅢ基因，从核苷酸序列推导出小鼠与人两者之间在其羧基端有相同的EAQGPK六肽，进一步证实用抗人微管蛋白βⅢ单抗可检测小鼠神经干细胞分化成的神经元细胞，免疫组化鉴定显示小鼠神经干细胞在体积分数为1％胎牛血清（FBS）诱导下，可分化成神经元，星形胶质细胞，少突胶质细胞，同时培养了13周龄胎儿脑来源的人类神经干细胞，用特异性的抗人nestin抗体鉴定，全部为阳性细胞，但它们经诱导分化产生较不同寻常的细胞分化细胞和分化程度，在生长因子减半和1％FBS诱导条件下可分化为神经元和星形胶质细胞，而无少突胶质细胞分化，NF单抗检测证实为早期分化的神经元。     

小鼠肺癌细胞诱导分化后的力学特性比较

通过鬼笔环肽染色技术观察比较了小鼠肺癌细胞经诱导分化后的微丝变化,利用免疫印迹技术测定了小鼠肺癌细胞经诱导分化后α-SMA蛋白含量的变化,利用CTFM法测定了小鼠肺癌细胞在诱导分化后的牵引力变化.结果发现,小鼠肺癌细胞在诱导分化后,细胞的形态及微丝骨架均发生了变化,同时,α-SMA蛋白含量明显增多并且变得集中;细胞投影面积显著增大,约增37%;细胞牵引力也显著增强,均方根值大约增加了一倍.这说明细胞骨架、细胞的形态、α-SMA蛋白和细胞牵引力均与细胞的癌变过程有密切关系.     

小鼠孤雌生殖胚胎干细胞的分离及分化潜能研究

用免疫外科法从小鼠孤雌生殖胚胎分离胚胎干细胞,并研究了其在体内、体外的分化潜能．结果发现:从小鼠孤雌生殖的胚胎中可分离出胚胎干细胞(pES),可以传代培养25代,能表达很强的碱性磷酸酶,核型稳定呈40XX．培养至第18代的pES在体内可诱导肿瘤形成,并可分化为三个胚层的组织细胞．免疫组化结果显示:神经细胞特异性烯醇化酶（NSE）、肌肉特异性肌动蛋白?-actin均呈阳性,表明分离培养的pES在体内可至少分化为来自外胚层和中胚层的组织细胞．传至第20～24代的pES细胞,经体外定向诱导分化,可定向分化为节律性收缩的心肌细胞及神经细胞．免疫组化检测显示节律性收缩的心肌细胞表达?-actin,而神经细胞表达NSE．结果表明:利用免疫外科法可从孤雌生殖的小鼠胚胎建立pES,这些pES在体内、体外都具有分化为多种类型细胞的潜能．     

中药诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的研究进展

指出了胚胎干细胞(ES细胞)是一类可进行自我复制和更新并向骨骼、软骨、脂肪、神经、肌肉等多个胚层的组织分化的细胞.研究表明:ES细胞移植入缺血心脏后可以分化形成新生心肌细胞,血管内皮细胞等,还可以通过分泌多种生长因子,促进微循环的建立,提高梗死后心脏功能.综述了中药如黄芩苷、葛根素、淫羊藿苷、黄芪、丹参、皂苷、双龙方等诱导小鼠干细胞分化为心肌细胞的研究进展.     

人胚胎脑神经干细胞分离纯化及体外培养的研究

为了探讨人胚神经干细胞体外培养条件下的生物学特性,为其应用于临床治疗奠定基础.取胎龄16周的人流产胚胎,胰酶消化结合机械法分离成单细胞悬液,以2×106个细胞/mL接种到含hEGF和h-bFGF的DMEM/F12、N2培养基进行体外培养;观察细胞生长情况,用10% FBS诱导神经干细胞球分化,免疫细胞化学鉴定. 结果显示从人胚大脑分离出的细胞经悬浮培养可以形成细胞球,表达Nestin蛋白.经诱导分化后具有表达神经元,神经胶质细胞的特异性抗原. 说明人胚神经干细胞在体外可以稳定生长,并能分化成为神经原及胶质细胞.     

蒙古羊脂肪来源间充质干细胞的分离培养及体外分化诱导

建立蒙古羊脂肪间充质干细胞（Adipose-derived mesenchymal stem ceils,ADSCs）体外分离培养方法,并对其生物学特性和多向分化潜能进行鉴定。利用I型胶原酶将蒙古羊脂肪组织消化后,离心得到单核细胞,并进行传代培养,测定其倍增时间。采用甲苯胺蓝染色和PAS染色法以及RT-PCR法,分别从组织学水平和基因水平对第3代蒙古羊ADSCs向成神经和成心肌的诱导分化情况进行鉴定。结果显示,分离得到的脂肪间充质干细胞大小较为均匀,呈梭形或星形的成纤维细胞样;传代接种后第4天细胞进入指数生长期,第8天进入平台期,前10代ADSCs的倍增时间平均为34．1h;经成神经诱导后,细胞呈胶质细胞状,RT-PCR检测EN02和GFAP基因表达呈阳性;心肌诱导后,细胞体积增大,多呈长梭形,平行排列,诱导15d后部分细胞可见类肌管样结构,PAS染色可见明显的糖原沉积,RT-PCR检测NKX2．5和GATA-4基因表达呈阳性。表明获得的蒙古羊ADSCs具有多向分化潜能。     

大鼠胎脑神经干细胞的分离和培养

胚龄14．5～16．5d(E14．5～16．5)的大鼠胎脑组织获得大鼠胎脑神经干细胞(rat fetal neural stem cells，rFNSCs)，培养于含有碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)和表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)的无血清培养液DMEM／F12中，用^3[H]胸苷掺入试验检测EGF和bFGF对大鼠胚胎神经干细胞分裂和增殖的影响．BrdU结合反应和nestin免疫组化检测显示培养细胞在早期时代约90％以上具有分裂增殖能力并显示nestln阳性，而且这些细胞在培养过程中可以分化神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞，证明分离培养的是神经干细胞，可用于移植、定向分化和基因转移的研究．     

神经干细胞的体外克隆

为建立神经干细胞体外稳定克隆的培养方法并对克隆进行鉴定,从胚胎大鼠脑组织中分离神经干细胞,采用无血清培养技术,在生长因子的作用下使其稳定增殖克隆。同时利用免疫荧光染色对神经干细胞进行鉴定。结果培养的神经干细胞增殖成神经干细胞球并传代,鉴定为nestin染色阳性细胞。说明利用无血清技术和特定生长因子,可使神经干细胞在体外稳定增殖克隆。     

小鼠精原干细胞的分离、分选、移植和培养

精原干细胞具有自我增殖和分化为精子的能力。精原干细胞的培养、移植和体外诱导分化等研究将使我们最终阐明精原干细胞的自我更新机制和精子发生机理。经过一年多的研究,我们不仅建立了用含血清培养基对分离的乳鼠睾丸细胞进行差异贴壁分选来富集生殖细胞的简单方法,而且成功地对分选出的精原干细胞进行了近一个月的无血清培养。流式分析结果表明,差异贴壁分选能将精原干细胞富集11倍以上。移植分析表明,分选出的精原干细胞具有在受体鼠的曲精小管中产生克隆的能力和正常生精作用。免疫细胞化学和RT-PCR检测表明,培养的细胞表达精原干细胞标志基因。该研究为体外长期培养小鼠或其它哺乳动物的精原干细胞提供了一个范例,也为利用基因修饰的精原干细胞通过移植产生转基因动物奠定了基础。     

<Emphasis Type="Italic">In vitro</Emphasis> induction of mouse meningeal-derived ips cells into neural-like cells

Previous research has shown that mouse embryonic stem (ES) cells can be induced to form neural cells in adherent monocultures. In this study, pluripotent stem (iPS) C5 cells derived from meningeal membranes were converted successfully into neural-like cells using the same protocol generally used for ES cells. Meningeal-iPS C5 cells were induced to express neural markers Sox1, Sox3, Pax6, Nestin and Tuj1 and to reduce the expression of ES markers Oct4 and Nanog during neural differentiation, and can be differentiated into Pax6 and Nestin positive neural progenitors, and further into neuronal, astrocytic, and oligodendrocytic cells. In vitro differentiation of iPS cells into patient-specific neural cells could serve as a model to study mechanisms of genetic diseases and develop promising candidates for therapeutic applications in dysfunctional or aging neural tissues. Meningeal cells express a high level of the embryonic master regulator Sox2, allowing them to be reprogrammed into iPS cells more easily than other somatic cells.     

全反式维甲酸对小鼠胚胎不同阶段神经干细胞诱导作用研究

目的:探讨全反式维甲酸对小鼠胚胎不同阶段神经干细胞(NSCs)的诱导分化情况.方法:分离孕12.5d及15.5d的胚胎小鼠脑皮质.取第3代NSCs,用含1μmol·L-1的全反式维甲酸在体外诱导小鼠胚胎不同阶段的NSCs.诱导5d后,通过神经元微管相关蛋白2(MAP2)免疫荧光染色和Westernblots检测NSCs分化为神经元的比例.结果:与对照组相比,全反式维甲酸可明显提高神经元分化的比例.E12.5干细胞和E15.5胚胎干细胞分化为神经元的比例分别为30%±1.47%和16.21%±1.36%.结论全反式维甲酸具有显著的促神经干细胞分化成神经元的效应,并对胚胎不同阶段神经干细胞的诱导作用有所不同.