石蒜碱对内毒素致炎症小鼠体内体外COX-2的影响

研究石蒜碱对内毒素导致的炎症小鼠体内体外COX-2的影响.通过内毒素诱导的小鼠建立急性肺损伤(ALI)模型,采用内毒素诱导的RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,利用Western blot技术检测小鼠肺组织以及RAW264.7巨噬细胞中COX-2蛋白的表达量.结果显示,石蒜碱能够在体内、体外显著抑制内毒素诱导的COX-2的蛋白表达,并加快COX-2蛋白的降解速度.石蒜碱能够有效降低内毒素导致的炎症小鼠体内、体外COX-2的蛋白水平.     

苦丁茶甲醇初次提取物对CT26和HepG.2细胞中COX-2表达的影响

为了研究苦丁茶甲醇初次提取物对CT26和HepG.2细胞中COX-2蛋白质和mRNA表达的影响,探讨苦丁茶更广的利用方法,以便寻找COX-2新的抑制剂和治疗肿瘤的天然药物,本研究设定苦丁茶提取物的处理浓度为0、20、40、80、120、160μg/mL,对CT26和HepG.2细胞处理24小时,同时用MTT法检测了提取物对两种细胞株的毒性.在药物作用12小时后,提取蛋白,并用蛋白印迹法检测COX-2蛋白的表达.此外,从药物处理6小时的细胞中提取细胞RNA,采用实时荧光定量PCR检测COX-2基因的表达.结果表明,160μg/mL治疗组COX-2蛋白的表达明显低于对照组COX-2蛋白的表达;在120μg/mL和160μg/mL处理组,COX-2的mRNA表达量明显降低,这表明苦丁茶甲醇初次提取物能抑制COX-2的表达,本研究为寻找COX-2的新抑制剂和筛选治疗肿瘤的天然药物奠定了一定的基础.     

COX-2靶向的近红外分子影像探针用于炎症和肿瘤的监测

环氧化酶-2（Cyclooxygenase-2,COX-2）是一种在炎症和肿瘤部位高表达的蛋白酶,因此能够用作分子影像学炎症和肿瘤监测的靶标.本文基于COX-2的小分子抑制剂（塞来昔布,Celecoxib）和水溶性近红外染料染料（ICG-Der-02,MPA）的COX-2靶向近红外探针（CMP）,通过分子对接、动力学模拟和蛋白抑制实验验证了其对COX-2蛋白的结合能力.在细胞水平,CMP选择性积累在COX-2阳性细胞的细胞质中.动物炎症和肿瘤模型的荧光成像证实,CMP可以结合局部内源性COX-2并且表现出强烈的荧光.在此基础上,通过用塞来昔布预注射阻断COX-2活性位点可显着降低荧光,进一步证明了CMP的靶向特异性.因此,探针CMP具备优异的近红外光学成像能力和深层组织穿透,能够特异性地靶向COX-2高表达的炎症和肝癌移植瘤部位,具备炎症与肿瘤活体监测的应用前景.     

绿原酸对体外培养成骨细胞活性的影响

为研究接骨草成分之一绿原酸(CGA)对成骨细胞MC3T3-E1活性的影响,采用MTT法检测11.02,22.05,44.09,88.19μmol/L CGA对成骨细胞增殖率,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测成骨细胞ALP活性,实时定量PCR检测成骨细胞骨相关基因的表达.结果表明:11.02～88.19μmol/L CGA对成骨细胞增殖具有明显的促进作用.培养2d,44.09μmol/L CGA能促进ALP表达上调;22.05,44.09μmol/L CGA能促进ALP、Runx2、Osterix、c-jun和c-fos基因的表达;培养6 d,44.09μmol/L CGA能促进c-fos基因的表达;在整个培养过程中,I型胶原(Col-I)基因的表达具有浓度和时间依赖性.故CGA具有一定的成骨活性,是接骨草的成骨活性成分之一.     

COX-2—膀胱癌治疗的新靶点

环氧化酶(Cyclooxygenase，COX)又称前列腺素(Prostaglandins PC)内过氧化合成酶，是人体内催化花生四烯酸转变为前列腺素的限速酶，它存在两种同工酶即环氧化酶-1(COX-1)和环氧化酶-2(COZ-2)。这两种酶的生理意义不同，COX-1是结构酶，在大多数正常人体组织中表达，其基本作用是维持机体的生理过程，保持内环境的稳定。COX-2为诱导酶，生理状态下多数细胞中不存在这种酶，只有在细胞受到炎症刺激、组织损伤或细胞恶性转化时表达增强。近年研究表明，COX-2与肿瘤的浸润、转移、细胞凋亡等特性有关，COX-2在许多肿瘤组织中高表达，如大肠癌、胃癌、肺癌等。有人研究表明，COX-2在泌尿系肿瘤组织中也有表达，如前列腺癌、膀胱癌。COX-2在肿瘤中高表达的意义和肿瘤发生、发展、预后的关系是目前人们关注的热点，这种关系的阐明将成为肿瘤治疗的新靶点。     

用siRNA抑制胃癌细胞AGS中COX-2表达及对AKT磷酸化的抑制

构建了可在真核细胞中表达针对COX-2基因的siRNA表达载体,并用胃腺癌细胞系AGS建立了COX-2 siRNA的稳定转染细胞系。用Western-Blot检测稳定转染细胞系中COX-2的表达以及AKT的磷酸化水平。结果表明稳定转染C0X-2 siRNA的细胞中COX-2的表达较转染空载体的细胞明显降低,且发现COX-2表达的降低可抑制AKT—Ser^473和Thr-^308的磷酸化水平。为进-步探索抑制COX-2对胃癌细胞生物学特性的影响,及其在肿瘤治疗中的作用奠定了基础。     

蝙蝠葛酚性碱对胃癌细胞SGC-7901 COX-2表达的影响

为探讨蝙蝠葛酚性碱(PAMD)抗胃癌的作用机理,通过实时定量PCR观察PAMD对胃癌细胞株SGC-7901 COX-2 mRNA表达的影响.结果表明,PAMD各剂量组均能下调COX-2 mRNA的表达,其中PAMD(20)剂量组下调COX-2的作用有统计学差异,且优于阳性对照组.PAMD抗胃癌的作用机理可能与其抑制COX-2基因表达有关.     

银杏叶提取物对实验性肝纤维化大鼠COX-2、TNF-α等表达的影响

研究银杏叶提取物(EGb)对CCl_4诱导的大鼠肝纤维化肝组织COX-2、TNF-α及TLR4mRNA表达的影响。采用皮下注射40%CCl_4植物油溶液制备大鼠肝纤维化模型。造模第4周后,开始给药。以高低两个剂量的EGb进行干预,同时设计正常组、秋水仙碱组。每天给药1次,给药期间大鼠仍皮下注射40%CCl_4植物油溶液。给药6周后处死大鼠,通过RT-PCR技术观察大鼠肝组织中COX-2、TNF-α及TLR4 mRNA的表达。RT-PCR结果显示,与正常组相比,模型组大鼠肝组织的COX-2、TNF-α及TLR4mRNA表达明显增加(P0.01);银杏叶提取物(EGb)干预组(100,50 mg/kg)较模型组大鼠肝组织的COX-2、TNF-α及TLR4 mRNA表达明显下降(P0.05)。结论银杏叶提取物(EGb)能够抑制大鼠肝纤维化肝组织COX-2、TNF-α及TLR4的表达。     

COX-2/DHODH双重抑制剂存在可行性的初步对接虚拟筛选研究

首次开展了探索环氧合酶-2(COX-2)和二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)双重抑制剂存在的可行性研究工作。通过自建COX-2抑制剂数据库,采用虚拟筛选方法,以DHODH的晶体结构为靶标,对建的COX-2抑制剂数据库进行对接虚拟筛选,筛选出多个对DHODH可能有抑制作用并且具有COX-抑制活性的分子。研究表明,现有数据库中的25000系列、7000系列、26000系列以及33000系列的抑制剂最有可能成为DHODH和COX-2的双抑制剂,特别是其中的2500、7004和7006这三个抑制剂,具有进一步实验研究的价值。     

宫颈鳞癌组织中COX-2、P53蛋白的表达和意义

探讨宫颈癌、原位癌及正常宫颈组织中COX-2和P53蛋白的表达及意义。采用免疫组化Envision法检测宫颈癌组织46例、原位癌24例、正常宫颈组织15例中COX-2和P53的表达水平。宫颈癌组织中的COX-2和P53表达明显高于原位癌和正常宫颈组织,差异有统计学意义（x2=15．782,P〈0．01;x2=9．051,P〈0．05）,COX-2和P53在宫颈鳞癌Ⅰ～Ⅱ期和宫颈鳞癌Ⅲ期中和宫颈癌高分化和中低分化间差异没有统计学意义（P〉0．05）,COX-2和P53表达在有、无淋巴结转移间差异有统计学意义（P〈0．05）。COX-2和P53的表达与宫颈癌的发生、发展以及预后密切相关。     

苹果中绿原酸含量的HPLC法测定

建立了高效液相色谱法对苹果中绿原酸含量的测定方法,采用AichromBond-1AQ C18色谱柱(150×4.6mm,5μm),流动相:0.1%甲酸水溶液-乙腈(92:8,V/V),流速0.8mL/min,检测波长:323nm。结果显示:绿原酸在浓度为0.268-67μg/mL范围内,线性关系良好(Y=38286X-4391.2,r=0.9991),检测限为0.804ng,定量限为2.68ng;精密度(RSD)为1.67%,平均回收率为101.7%～103.6%;经测定几种苹果果皮和果肉中绿原酸的含量分别在20.32～45.98μg/g和63.47～114.32μg/g。因此,本法简便,结果准确,可作为苹果中绿原酸含量研究的良好方法。     

苎麻叶中绿原酸的提取

研究了从苎麻叶中提取绿原酸的最佳工艺.在单因素实验的基础上,通过正交实验设计考察了提取溶剂的选择以及提取温度、料液比、提取时间和pH值等对绿原酸提取率的影响.得到的最佳工艺条件为:以pH=4.0,体积分数为70%的乙醇溶液浸提苎麻叶3次,料液比为1:10,提取温度为70 ℃,提取时间为2 h;采用该工艺,可使绿原酸呈分子形式被有效地浸出,绿原酸的提取率达83%.     

金银花中绿原酸提取方法的比较和优化研究

总结了近年来对绿原酸提取工艺的常用方法，探讨了用稀醇提取法提取绿原酸的最佳方法，用正交设计选取最佳工艺，结果表明，制备金银花提取物以稀醇法B较好，最佳提取工艺为12倍量，40％乙醇调pH值至6，80℃水浴浸泡，回流2．5h，绿原酸含量较高。     

RP-HPLC法测定桑姜感冒胶囊中绿原酸的含量

目的:测定桑姜感冒胶囊中绿原酸的含量。方法:采用Agela XBP-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.4%磷酸(9∶91)为流动相,检测波长327 nm,流速1.0 mL/min。结果:绿原酸进样量在0.02~0.25μg范围内有良好的线性关系,r=0.9998,平均加样回收率为99.5%,RSD为0.67%(n=6)。结论:本方法操作简便、结果准确、灵敏度高、重复性好,可作为桑姜感冒胶囊中绿原酸的含量测定方法。     

反相高效液相色谱法测定小儿金翘颗粒中绿原酸的含量

目的:建立小儿金翘颗粒中绿原酸的含量测定方法。方法:采用Agilent XBP-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.4%磷酸(12∶88)为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长327 nm,柱温25℃。结果:绿原酸在0.05~5.00μg/mL之间有良好的线性关系(r=1.0),平均加样回收率100.44%,RSD为1.50%。结论:该法操作简便,准确,可靠,重现性好,可用于小儿金翘颗粒的质量控制。     

葵花粕中绿原酸的提取及其抗氧化研究

采用乙醇回流提取法提取葵花粕中的绿原酸,探讨乙醇溶液体积分数、料液比、提取温度、提取时间、pH值对绿原酸提取量的影响,采用正交试验对绿原酸的提取工艺进行优化,并对葵花粕绿原酸的抗氧化活性进行了研究。结果表明:绿原酸的最佳提取工艺条件为乙醇溶液体积分数55%、提取温度60℃、提取时间1.5h、料液比1∶12(g.mL-1)、pH值6、提取1次。     

甘薯叶绿原酸的抑菌作用及其复配型防腐剂对发酵香肠的影响

首先对甘薯叶绿原酸的抗菌活性进行研究,在此基础上将甘薯叶绿原酸、红曲色素、亚硝酸钠加入到发酵香肠中,采用正交实验L9(34)对储藏30 d的发酵香肠的挥发性盐基氮进行测定和感官分析,结果表明:甘薯叶绿原酸对植物乳杆菌、葡萄球菌、汉逊酵母、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有抑制作用,发酵剂生长产生的绿原酸浓度达到250μg/mL,复配型防腐剂的最佳添加量为:红曲色素1200 mg/kg,亚硝酸钠50 mg/kg,绿原酸200μg/g。     

桑叶绿原酸的超声提取工艺研究

用超声法提取桑叶中的绿原酸.通过正交试验法,考察了溶剂种类、提取次数和粒度对提取率的影响,得到最佳提取条件为60%乙醇、>80目的粒度,超声提取4次.     

金银花中绿原酸的体外抑菌和抗氧化性的研究

用紫外光谱法(UV)和高效液相色谱法(HPLC)对金银花中提取的绿原酸进行定性定量分析,测定了绿原酸对食品中常见的致病菌的抑菌能力,清除DPPH·自由基的能力和对Fe3+的还原能力。结果表明:金银花中绿原酸具有较强的抑菌效果,对自由基有较强的清除能力,对Fe3+有较强的还原能力。     

金银花中绿原酸提取工艺的对比

分别用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、水、酸乙醇、酸水、三氯甲烷作溶剂,采用回流法、微波法、超声波法、渗漉法、煎煮法、浸提法等6种提取方法,对湖南省特有栽培品种金银花-湘宁1号绿原酸提取工艺进行了对比.结果表明,最佳提取工艺是丙酮超声,最佳提取条件是超声提取,绿原酸的得率和提取率均最高,分别为8.46％,86.5％.优选得到的提取工艺简单,时间短.