微量量热法研究抑制剂对酶的作用——抑制常数(K_i)的测定

腺三磷酶(ATP酶)是一种重要的酶,它与生物体内能量的贮存、释放以及转移等过程有着密切的关系。我们应用量热法,对ICH_2COONa、BrCH_2COONa、ICH_2CONH_2等数种卤素化合物与镁离子激活猪心线粒体可溶性腺三磷酶(F_1)活性抑制作用进行了研究。发现抑制     

氨基酰化酶在低浓度脲溶液中的失活并非解聚所致

氨基酰化酶(Aminoacylasc,EC3.5.1.14)是一个含金属锌离子的二聚体酶,亚基分子量约为43 000.Zn~(2 )位于每个亚基的活性部位上,且为酶的活性所必需,过去的研究结果表明锌离子对酶活性部位结构有一定的稳定作用,最近报道的氨基酸序列表明,该酶分子中有16个色氨酸残基和18个酪氨酸残基.我们已经知道16个色氨酸残基中部分位于分子     

Mg~(2+)对重建H~+-ATP酶的构象的影响——圆二色性光谱研究

我们前曾报道,当用胆酸盐透析法将猪心线粒体H~ -ATP酶在脂质体重建时,如果透析液中加入一定量的Mg~(2 ),能明显地提高重建酶的活力,且实验的重复率较好。并且提出,Mg~(2 )的作用可能是通过影响磷脂的流动性使重建酶具有合适的构象,从而呈现较高的酶活性。最近的研究表明,透析介质中一定量的Mg~(2 )的存在,对于嵌有H~ -ATP酶的脂质体     

模拟过氧化物酶催化荧光反应的研究——CV-H_2O_2-Mn~Ⅲ-T(4-TAP)P

随着仿生学和生物无机化学的发展,天然酶的模拟工作越来越受到重视,因为模拟酶不仅成本低,而且稳定性好。日本Yutaka Saito等人曾合成MnTPPS_4络合物,替代过氧化物酶作为催化剂用于酚和胺类化合物的氧化显色反应。对Guilbault等人提出的过氧化物酶催化H_2O_2氧化高香草酸的荧光反应,我们曾从底物角度进行研究。本文依据过氧化物酶的活性中心结构,合成了一种金属卟啉化合物,四(4-三甲铵基苯)卟啉和锰的络合物Mn~Ⅲ-T(4-TAP)P,用于模拟辣根过氧化物酶(HRP),催化H_2O_2氧化佳味醇的氧化偶联反应,     

X-射线衍射法研究DPPG/山莨菪体系的交插脂双层结构

山莨菪碱作为中药已广泛应用于国内的临床,关于它的作用机理,我们曾作过多次探讨,已经证明它能特异地与酸性磷脂结合,并能增加脂质体对Ca~(2+)的通透性,山莨菪碱能抑制肌质网Ca~(2+)-ATP酶和兔肾(Na~+-K~+)-ATP酶的活性,并能诱导心磷脂呈非双层结构。上述研究为揭示山莨菪碱的作用机理提供了十分有力的论据。最近,我们采用荧光偏振法和差示扫描量热法(DSC)首次报道山莨菪碱诱导酸性磷脂二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)呈交插     

促黄体生成素受体(LHR)在大鼠附睾中的表达

纤溶酶(plasmin)是一种具有广泛活性的丝氨酸蛋白水解酶,在细胞外蛋白水解中发挥重要作用。纤溶酶原激活因子(plasminogen activator,PA)特异激活纤溶酶原(plasminogen)可转化为有活性的纤溶酶。有研究表明附睾表达组织型PA(tPA)和尿激酶型PA(uPA),但其调节机制尚不清楚。我们研究了促性腺激素对大鼠附睾PA活性的调节。结果表明,人绒毛膜促性腺激素(hCG)对培养附睾tPA和uPA活性有明显刺激作用。为进一步探讨hCG在附睾内的作用途径,我们作了LH/hCG受体(LHR)mRNA的原位杂交定位,首次发现大鼠附睾表皮细胞表达LHR。这些结果表明,在体情况下LH可能通过LHR调节附睾PA活性表达,从而调节附睾内蛋白水解过程。     

利用磁镊研究促旋酶与DNA的结合

促旋酶(gyrase)在原核生物的生命活动中扮演着重要的角色,它是已知拓扑异构酶中,唯一能够向DNA引入负超螺旋的酶.本文中,我们利用磁镊(magnetic tweezers)对促旋酶和DNA的相互作用进行了单分子实时观测.实验发现,在不加入ATP时,促旋酶能够同时与两段DNA(G片段和T片段)结合,但这种结合较弱,施加0.7pN的外力就能逐渐破坏两者的结合;但加入高浓度的诺氟沙星后,促旋酶与DNA的结合明显增强,甚至能够抗衡5.9pN的外力.促旋酶还会影响超螺旋的几何尺度:不加入促旋酶时,DNA超螺旋的几何尺度由DNA所受拉力决定,而加入促旋酶后,超螺旋DNA几何尺度变小,并且主要由DNA与促旋酶的相互作用而不再是所受拉力所决定.而且促旋酶与正负超螺旋的结合能力不同,它更容易与正超螺旋结合.同时,发现促旋酶从DNA上解离的时间符合双指数分布.我们提出的模型能够很好地解释这个分布,并与他人提出的模型的结果进行了比较.     

菠菜甜菜碱醛脱氢酶的抑制因子

在以前的报道中,部分纯化了菠菜叶片的甜菜碱醛脱氢酶(betaine aldehyde dehydrogenase,BADH)。在测定用60％硫酸铵盐析的酶样活性时,观察到酶活性与酶蛋白的加入量不成正比关系,而是随着酶蛋白量增加,以毫克酶蛋白为基础,酶活性明显下降。这暗示,在酶制剂中可能存在抑制因子。本文报道我们的实验结果。     

Mg~(2+)对形成嵌有线粒体H~+-ATP酶脂质体的流动性的影响

前曾报道将猪心线粒体H~ -ATP酶组装于大豆磷脂脂质体的过程中,Mg~(2 )的存在能大大地提高重组系统的酶活性(~(32)Pi-ATP交换活力、酶的水解活力和对抑制剂寡霉素、DCCD~(**)的敏感性以及依赖ATP的ANs荧光强度),其中Mg~(2 )对重组酶的~(32)Pi-ATP交换活力可提高7倍左右,这说明Mg~(2 )的存在可能有利于形成重组ATP酶的较合适构象,从而使它呈现出较高活性,但这是由于Mg~(2 )能促进酶蛋白与磷脂分子的相互作用呢?还是它影响了磷脂的     

荚膜红假单孢菌两个膜结合态氢酶的分离和特性研究

自1974年Chen和Mortenson从巴氏梭菌(C.pasteurianum)首次分离获得氢酶以来,由于氢酶在生物固氮、光合放氢和氢代谢中的特异功能,对它的结构和功能的研究引起了人们的极大兴趣,成为当前很活跃的研究领域。到目前为止,已经从10多个不同细菌中获得均一状态氢酶,但对氢酶可能存在的不同类型,却很少有报道。我们在分离纯化荚膜红假单孢菌Rhodopseudomonas capsulata膜结合态氢酶中,观察到它存在有两个不同类型,进而对它们的有关性质进行了研究。     

DDT对美洲蠊L-酪氨酸脱羧酶的诱导作用(Ⅰ)

在前一篇报告中,我们证实了DDT中毒的(虫非)蠊血淋巴中产生的神经毒素乃是酪胺。这种毒素的大量形成显然是由DDT诱导产生的。酪胺是酪氨酸在酪氨酸脱羧酶作用下形成的,因此我们研究了DDT对酪氨酸脱羧酶的诱导作用。我们采用了放射性同位素标记及薄层层析分析技术,比较了DDT处理与不处理(虫非)蠊血淋巴液及神经素(匀浆)中L-酪氨酸脱羧酶的活力。为确定DDT诱导该酶的机制,分别观察了加入放线菌素D     

肝氨甲酰磷酸合成酶I基因转录起始位点的测定

氨甲酰磷酸合成酶I(CPSI)是尿素循环的第一个酶,主要存在于肝细胞线粒体中,是肝组织特异酶,与肝细胞的分化有关.我们曾观察到在大鼠肝癌诱发过程中,CPSI酶活性降低,实验证明癌变过程中CPSI基因表达的异常与基因转录调控可能有关.真核基因的转录的调控是通过反式作用因子(trsns-acting factor)与顺式作用元件(cis-acting element)的相互作用而实现的.顺式作用元件多存在于转录起始位点的5′端上游,对基因转录有调控作     

生物活性N-对甲基丙烯酰胺基苯甲酸酯的研究

在前一文中,我们曾报道了丙烯酸活性酯的合成、聚合及其与血清蛋白或胰蛋白酶的固定化。我们发现在主链与蛋白质间有一个疏水性及刚性的苯环作为间隔基团时,会对提高固定化酶的生物活性有利;如聚(N-对甲基丙烯酰氧苯甲酰氧-5-降冰片烯-2,3-双甲酰亚胺)-胰蛋白酶[P(MBONB)-trypsin]的生物活性是聚(N-甲基丙烯酰氧-5-降冰片烯-2,3-双甲酰亚胺)-胰蛋白酶[P(MONB)-trypsin]的三倍左右。     

大豆磷脂脂质体及H~+-ATP酶脂酶体的~(31)P-NMR研究

二价金属离子对猪心线粒体H~+-ATP酶与大豆磷脂脂质体重建体系酶活性影响的研究指出,Mg~(2+)、Ca~(2+)、Mn~(2+)等二价金属离子可以提高重组酶的活性。本文主要是运用~(31)PNMR(核磁共振)技术研究在大豆磷脂脂质体中,以及在H~+-ATP酶复合体与大豆磷脂脂质体重建的脂酶体中膜脂的结构,同时观察金属离子Co~(2+)对膜脂结构的影响。     

抗癌酶制剂——L_天门冬酰胺酶

1953年Kidd发现豚鼠血清有抗肿瘤作用,1961—1963年Broome证实豚鼠血清的抗肿瘤因子是血清中的L-天门冬酰胺酶,后来陆续发现L-天门冬酰胺酶在生物界分布甚广。某些微生物所产生的L-天门冬酰胺酶也有抗肿瘤作用。1.L-天门冬酰胺酶高产菌株的筛选我们从87株细菌中筛选获得L-天门冬酰胺酶的高产菌株大肠杆菌(Escherichia coli)AS 1.357。采用7.5—10％玉米浆培养基     

用有限元法计算酶-底物反应体系中的结合反应速率

对于酶-底物反应体系中的结合反应速率的计算,我们将介绍一种方法——有限元法。本文将给出算得反应速率的误差估计(见定理2)。 在文献[1]中曾考虑过边界近似,但都假定解的导数有界,也未给出有第三类边界条件时解的误差估计。这里,在内边界上(即酶分子表面)给定的是第二、三类边界条件,还有奇点存     

多核苷酸合成的研究——酵母丙氨酸转移核糖核酸3′端C_pG_pG_pA_(32p)C_pU_pC_pG_pU_pC_pC_pA十二核糖核苷十一磷酸及A_pU_pU_pC_(32p)C_pG_pG_pA_(32p)C_pU_pC_pG_pU_pC_pC_pA十六核糖核苷十五磷酸的合成

为了合成具有特定序列的核糖核酸片段,我们最近用核糖核酸联接酶(RNA ligase,以下简称联接酶),把一些特定序列的寡核苷酸片段,成功地联接成酵母丙氨酸转移核糖核酸3′端的十二核糖核苷十一磷酸(Ⅰ)和十六核糖核苷十五磷酸(Ⅱ)。本联接法的特点是使用比较低的受体过量倍数;产物的产率较高;3′端未经保护的供体分子自身环化率比较低。这些特点在Ⅰ的合成中更为显著。以化学方法合成的C_pG_pG_pA为受体,以化学和酶促结合的方法     

淋巴细胞对自由基的潜在调节作用

机体内的自由基不断地产生,同时也不断地清除,以达到自由基代谢平衡。机体内存在一套天然防御系统,如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等.这些物质在体内呈相对稳定量,属固有调节,那么机体淋巴细胞系统是否参人自由基的调节?目前尚无报道.我们体外实验研究发现,淋巴细胞由IL-2激活后,对活性氧自由基具有明显的清除作用,且对氧化溶血有明显的抑制作用.这一现象的发现对生物体内的自由基代谢及其病理损伤调节研究提供了新的依据.     

Mg~(2+)影响磷脂流动性的激光拉曼光谱研究

前曾报道Mg~(2 )对猪心线粒体H~ -ATP酶及细胞色素氧化酶在脂质体重组中的影响,提出Mg~(2 )很可能是通过影响膜脂流动性来影响酶的构象,从而呈现较高的酶活性。本文利用拉曼光谱进一步研究了Mg~(2 )对磷脂流动性的影响,比较了它对两种磷脂:双棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC),和双棕榈酰磷脂酸(DPPA)分散体的物理状态的影响,两者所含的脂肪     

RNA也是一种催化剂

生命的化学反应是由称作酶的蛋白质分子催化的,这是生物化学的基本原理,或者说它至少一直是基本原理。过去几年积累起来的证据表明,另一类很著名的生物分子核糖核酸(RNA)也能作为一种催化剂。这个发现当然不是对酶作为催化剂在自然界所占统治地位的挑战;但它对导致生命起源的分子事变的研究会产生新的影响,另外对我们了解细胞怎样工作也会有重要的作用。