实验动物细菌鉴别用血清的制备及标化

目的制备并标化16种实验动物相关病原菌鉴别诊断血清。方法将16种标准菌株灭活,制成适宜浓度的免疫用细菌菌液,分别经耳缘静脉和背部皮下多点注射32只SPF家兔,获得相应抗血清,经吸收去除非特异性凝集,制成特异性诊断血清。结果以玻片法和定量凝集法进行敏感性及特异性试验,结果显示抗血清只与相应的免疫用细菌形成特异性的凝集颗粒,抗血清凝集效价≥1∶1 280。结论所制备的抗血清特异性强、效价高,为实验动物细菌学检测提供了有效的血清学鉴别诊断试剂。     

Beagle犬免疫血清Ⅰ型腺病毒抗体检测

目的为Beagle犬犬传染性肝炎(ICH)的预防制定合适的免疫程序提供依据。方法采用间接血凝抑制实验对24头Beagle犬(雌雄各半,20日龄～14周龄)注苗前后120份Beagle犬血清I型犬腺病毒血凝抑制抗体(HI)进行检测。结果注苗前20日龄仔犬血清母源性HI抗体效价为1:8～1∶32(平均1∶20),35日龄仔犬血清母源HI效价下降为1∶2～1∶8(平均1∶5);首免后2w(56日龄)血清HI效价上升为1∶8～1∶32(平均1∶14),二免后3w(77日龄)血清HI抗体效价上升为1∶32～1∶128(平均1∶45),三免后3w(98日龄)血清HI抗体效价继续上升为1∶64～1∶256(平均1∶79)。结论预防Beagle犬犬传染性肝炎(ICH)建议使用FiveStar犬五联弱毒疫苗,首免为35～40日龄,每间隔3w进行二免和三免加强。     

香石竹斑驳病毒的抗血清制备及应用

用自昆明地区香石竹（Ｄｉａｎｔｈｏｕｓｃａｒｙｐｈｙｌｕｓ）植株上分离、提纯的香石竹斑驳病毒（ＣａｒＭＶ）为毒源，进行了腿肌肉、耳静脉、皮下和多方式多部位注射法等免疫家兔制备抗血清的比较实验．结果表明：多方式多部位注射免疫法得到的抗血清效价明显高于其它三种免疫方法所得的抗血清；获得的抗血清试管沉淀效价为１∶４０９６，琼脂糖双扩散效价可达１∶１０２４．将该抗血清用于５万余株香石竹的种苗、扦头的ＣａｒＭＶ检测中，结果如下：８１４２呈阳性结果，其中有６３９８株尚无病毒侵染症状（隐症）．这些隐症种苗隔离种植１２０ｄ后，５９０３株先后表现出病毒侵染症状，即抗血清对隐症带毒株检测的准确率达９２２６％．     

日粮不同的钙磷含量和钙磷比对生长阶段比格犬血清生化指标的影响

目的　探讨生长阶段比格犬日粮钙磷含量和钙磷比对其血清生化指标的影响。方法　采用完全随机化设计方案 ,安排 2 8只 (雌雄各半 )生长阶段的比格犬到 7个处理组中 ,进行饲养试验。试验日粮钙磷比例的水平为 0 4∶1、1 2∶1和 3 6∶1。试验结束时 ,采试犬前腿静脉血测血清钙、磷、肌酐、总蛋白、白蛋白的浓度和碱性磷酸酶活性。结果　血清钙浓度在日粮钙磷比例高组较显著高于低组 ,随日粮钙磷比例升高有上升趋势 ;同一钙磷比例组中日粮钙磷绝对量不同 ,各组血清钙浓度之间差异不显著 ,在高比例组随绝对量的增加有上升的趋势。血清磷浓度的变化刚好相反。碱性磷酸酶活性在钙磷比例高组显著高于低组 ,同一比例组间无明显差异。在本试验中 ,各组血清肌酐的浓度无显著差异 ,在高钙磷比例组肌酐的浓度相对较高。血清的总蛋白 ,白蛋白浓度各组间无明显差异。     

重组戊型肝炎疫苗的免疫原性试验

目的　研究重组戊型肝炎疫苗的免疫原性。方法　通过对小鼠、新西兰兔的多点皮内注射及肌肉注射 ,然后测定其抗体效价 ,研究重组戊型肝炎疫苗的性能。结果　小鼠在免疫 7d后开始产生抗体 ,两周抗体阳性率为80 % ,四周抗体阳性率达 10 0 %。新西兰兔从第二周后开始产生抗体 ,第三周达到高峰 ,抗血清在 1∶6 4 0 0稀释度的阳性率达 4 0 %。结论　重组戊型肝炎疫苗免疫动物具有良好的免疫原性 ,为进一步研究开发戊肝疫苗对人体的免疫提供了基础     

痤疮丙酸杆菌对小鼠抗胸膜肺炎放线杆菌血清7型9型的免疫保护

为明确痤疮丙酸杆菌(PA)对具有抗胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清7型和血清9型的异源免疫保护作用,对小鼠免疫PA分离株S14后,分别用APP血清7型(CCVC-265)和血清9型(CCVC-267)攻毒。结果表明,免疫保护率达60%和70%;而用猪抗PA血清免疫小鼠后以APP血清7型和血清9型攻毒,免疫保护率达100%。血清特异性抗体效价检测显示,PA免疫小鼠后,可诱导小鼠产生特异性的抗APP血清7型和9型的抗体,ELISA方法检测特异性抗体平均效价为1 800和2 800。PA对APP血清7型和9型的感染具有良好的保护作用。     

Western印迹法分析蓖麻毒素在正常小鼠血清和肝组织匀浆中的稳定性

以重组蓖麻毒素A链（rRTA）免疫家兔,制备的抗rRTA兔血清效价高,能达到1∶51200.以兔多抗血清为检测抗体,建立蓖麻毒素的Western印迹检测法,对蓖麻毒素检测灵敏度可达1 ng.含有蓖麻毒素的小鼠血清和肝组织匀浆（蓖麻毒素终浓度为0.67μg/mL）在37℃孵育0~4 h后,应用此法体外观察蓖麻毒素在正常小鼠组织样品中的稳定性,结果显示Western印迹可用于组织中蓖麻毒素的测定,蓖麻毒素可在小鼠血清和肝组织匀浆中稳定存在.     

不同钙采食水平下生长犬肠钙吸收研究

研究不同日粮钙含量 (0 5%～ 1 4% )时 ,实验比格犬肠钙的表观吸收和真吸收状况。结果表明 :当日粮钙含量从 0 8%提高到 1 4% ,肠钙吸收率呈明显下降趋势 ,但肠钙吸收量保持稳定 ;当日粮含钙量从 0 8%降至 0 5%时 ,肠钙吸收率基本稳定 ,但肠钙吸收量明显降低。此外钙磷比在 0 6～1 4∶1范围内 ,不影响肠钙的吸收。当日粮钙含量为 0 8%～ 1 4%时 ,各组实验犬体增重、血清钙和血清碱性磷酸酶水平没有显著差异。     

实验用比格犬戊巴比妥钠麻醉并发症的观察及处理

目的总结比格犬戊巴比妥钠麻醉并发症及其处理方法。方法选择64例使用戊巴比妥钠麻醉的比格犬,观察麻醉后各种并发症的发生情况并进行处理。结果64例戊巴比妥钠麻醉的比格犬出现并发症7例,其中治愈6例,死亡1例。结论比格犬戊巴比妥钠麻醉后并发症的及时正确处理,可降低比格犬戊巴比妥钠麻醉后并发症导致的死亡。     

LC-MS/MS法测定比格犬血浆中Epacadostat的浓度

本文旨在建立快速、灵敏、可靠的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)方法以测定IDO抑制剂Epacadostat在比格犬血浆中的浓度,研究其在比格犬体内的药代动力学特征.色谱柱为Waters symmetry C18 (150 mm×2. 1 mm,3. 5μm),流动相为乙腈-水(80∶20,含0. 02 mmol/L乙酸铵),流速为0. 2 m L/min,采用负离子选择性反应监测模式监测.在此实验条件下,方法的灵敏度高,专属性好,分析物在0. 025～5μmol/L范围内线性关系良好(r 0. 992 5),批内批间变异系数小于12. 5%,偏差在±5. 1%以内,该方法已成功应用于比格犬血浆中的Epacadostat药物浓度测定.动物实验结果表明,Epacadostat在比格犬血浆中的药时曲线下面积(AUC0-24)为19. 7±1. 65 h·μmol/L,末端消除半衰期为7. 05±2. 73 h.     

杀虾微杆菌血清同源性及血清学检验

以分离于日本对虾（Penaeus japonicus）虾苗的杀虾微杆菌（Microbacterium shrimpcida sp．nov．）代表菌株（HID10406-1）,分别制备全菌（OK）及热处理（121℃作用1h）的菌体（O）免疫原,强化免疫家兔制备相应抗血清,对供试6株杀虾微杆菌纯培养物进行了血清型检定。结果表明,均存在同种的O抗原（血清同源）,不存在不耐热表面（K）抗原。以相应OK抗血清为第一抗体,以标准的羊抗兔IgG荧光抗体为第二抗体,对该6株纯培养菌及用代表菌株人工感染病死虾体组织进行间接荧光抗体染色,结果显示了特异的荧光反应;同时,对从人工感染死亡虾分离的10株纯培养菌以凝集反应方法进行了检验,显示出特异凝集现象。     

复合中草药制剂提高实验比格犬繁殖率的研究

目的观察复合中草药制剂对雌性比格犬繁殖率的影响。方法选用l一2岁雌性比格犬24只,随机分为雌性实 验组和雌性空白对照组。雌性实验组比格犬饲喂基础日粮和复合中草药制剂,雌性空白对照组饲喂基础日粮。两组均采 用重复配种方式进行配种,统计各组雌性比格犬的发情率、受孕率、产仔率以及平均每窝产仔数。结果雌性实验组与空 白对照组相比较,雌性比格犬的发情率由66．67％提高到100％;受孕率由71．43％提高到91．67％;产仔率由80．00％提高 到90．91％;平均产仔数由6．80只提高到lo．18只。结论复合中草药制剂能显著地提高雌性比格犬的繁殖率。     

手术建立 Beagle 犬遥测动物模型的经验体会

摘要: 目的 探讨 Beagle 犬遥测动物模型建立及应用过程中遇到的问题,并提出相应的预防处理措施。方法 回顾了我单位 32 例 Beagle 犬遥测动物模型在建立及应用中出现的问题,分析了常见的切口感染、动物自主拆线、毛 囊炎等临床异常的产生原因,介绍了解决上述临床异常情况的预防和处理方法。结果 分析并解决了 Beagle 犬遥 测动物模型建立过程中出现的临床异常情况。结论 成功建立 Beagle 犬遥测动物模型,对国内遥测模型在安全药 理学评价方面的使用和维护起到一定的借鉴作用。     

人纤溶酶原K1—3区基因在大肠杆菌中的表达

将人纤溶酶原Krigle 1-3(K1-3)基因插入融合表达载体pET-17b,获得重组质粒pET-K13,转化E.coli BI21(DE3),在IPTG诱导下,人纤溶酶原K1－3基因在E.coli BI21(DE3,pET-K13)中获得高效融合表达,表达量占菌体总蛋白的24％,表达产物以包函体存在,Western blot证明重组 蛋白对人纤溶酶原抗血清有特异免疫原性。     

基于液相色谱-质谱联用法建立盐酸坦洛新缓释片比格犬体内含量检测方法

建立了一种基于液相色谱-质谱联用法的市售盐酸坦洛新缓释片的动物体内含量变化检测方法,以比格犬为实验动物绘制药物药动学曲线,并验证方法的可靠性。色谱柱为Zorbax Extend-C18柱 （150 mm×4.6 mm,5 μm）, 保护柱为C18柱（4.0 mm × 3.0 mm）,流动相为甲醇-水-甲酸（V（甲醇）:V（水）:V（甲酸）=85:14:1）,流速为0.6 mL/min,柱温为30 ℃,进样量为20 μL。采用ESI离子源正离子多反应监测（MRM）模式选择离子对409.3→228.2、256.3→167.1进行测定。结果表明,盐酸坦洛新在0.1～10.0 ng/mL浓度范围内呈良好线性相关性,精密度为7.1%,提取回收率为92%,盐酸坦洛新缓释片的体内含量变化被准确描述。该方法灵敏度高、专属性好、精密度高,可用于简单快捷地检测市售盐酸坦洛新缓释片的动物体内含量变化。     

舒泰、速眠新Ⅱ 和利多卡因复合麻醉在比格犬开颅手术中的应用

摘要:目的 本实验采用舒泰、速眠新Ⅱ 全身麻醉并配合利多卡因局部浸润麻醉方法,研究其在比格犬开颅手术中的麻醉效果。 方法 麻醉前 15 min 皮下注射阿托品(0. 1 mg / kg) ,麻醉采用静脉注射舒泰( 2 mg / kg) ,同时肌肉注射速眠新Ⅱ (0. 02 mL / kg) ,术部皮下注射 0. 5%利多卡因溶液( 0. 1 mL / kg) 。 检测指标包括麻醉镇痛评分,麻醉前后动物心率、呼吸和体温变化。 结果 1. 利多卡因可以显著增加麻醉镇痛效果;2. 阿托品使犬心率显著增加;3. 复合麻醉方法对犬呼吸和体温有一定影响,但在正常范围内。 结论 此复合麻醉方法安全性较高及麻醉镇痛效果好,可以满足犬开颅手术对于麻醉效果的要求,但对犬的心率影响较大,因此对心率要求较高的实验需谨慎选择。     

成年比格犬蛋白质需要量研究

利用氮平衡试验研究成年比格犬对多种蛋白原料配合日粮中蛋白质和可消化蛋白质需要量。结果为食入氮对保留氮的回归关系为Y1 =4.2 9+1.35X1 ;可消化氮对保留氮的回归关系为Y2 =2 .12 +0 .89X2 。当X1 =0时 ,Y1 =4.2 9,即成年犬每天总氮需要量为 4 2 9g ,蛋白质需要量为 2 6 81g d。当X2 =0时 ,Y2 =2 .12 ,即成年犬每天可消化氮需要量为 2 12g d ,可消化蛋白质需要量为 13 2 5g d。     

带有分数阶导数边值条件的分数阶微分方程正解的存在性

讨论了一类带有分数阶导数边值条件的分数阶微分方程■其中,D■是Rimann-Liouvile分数阶导数,η■_i(0,1),0<η₁<η₂<…<η_m-2<1,β■_i[0,∞)。文中给出其格林函数及相关性质,运用凸泛函上的不动点指数定理来计算不动点指数,从而得到了上述边值问题至少存在一个正解的结论。最后通过一个例子说明定理的具体应用。     

Determination of the genus-specific antigens in outer membrane proteins from the strains of Leptospira interrogans and Leptospira biflexa with different virulence

Objective:To determine the existence of genus-specific antigens in outer membrane proteins (OMPs) of leptospira with different virulence. Methods: Microscope agglutination test (MAT) was applied to detect the agglutination between commercial rabbit antiserum against leptospiral genus-specific TR/Patoc I antigen and 17 strains of Leptospira interrongans belonging to 15 serogroups and 2 strains of Leptospira biflexa belonging to 2 serogroups.The outer envelopes (OEs) of L.interrogans serogroup Icterohaemorrhagiae serovar lai strain lai (56601) with strong virulence and serogroup Pomona serovar pomona strain Luo (56608) with low virulence,and L.biflexa serogroup Semaranga serovar patoc strain Patoc I without virulence were prepared by using the method reported in Auran et al.(1972).OMPs in the OEs were obtained by treatment with sodium deoxycholate. SDS-PAGE and western blot were used for analyzing the features of the OMPs on electrophoretic pattern and the immunoreactivity to the antiserum against TR/Patoc I antigen, respectively. Results:All the tested strains belonging to different leptospiral serogroups agglutinated to the antiserum against leptospiral genus-specific TR/Patoc I antigen with agglutination titers ranging from 1:256-1:512. A similar SDS-PAGE pattern of the OMPs from the three strains of leptospira with different virulence was shown and the molecular weight of a major protein fragment in the OMPs was found to be approximately 60 KDa.A positive protein fragment with approximately 32 KDa confirmed by Western blot,was able to react with the antiserum against leptospiral genus-specific TR/Patoc I antigen, and was found in each the OMPs of the three stains of leptospira.Conclusion: There are genus-specific antigens on the surface of L.interrogans and L.biflexa. The OMP with molecular weight of 32 KDa may be one of the genus-specific protein antigens of leptospira.     

浅述IRM-2近交系小鼠生物学特性与应用前景

目的　对IRM_2近交系小鼠的生物学特性、血液生理指标、G_显带核型及自发畸变率、γ射线半数致死剂量(LD50 )、造血功能三项指标的测定和肿瘤易感性进行了研究。方法　采用自动光电血球计数仪计数、小鼠骨髓制备和G显带法 ,对1 37Csγ射线的LD50 测定及小鼠经 4 0Gy1 37Csγ射线照射后不同时期骨髓的有核细胞总数、脾指数、脾结节的变化 ;采用肿瘤的瘤块及悬液接种。结果　IRM_2小鼠血液生理指标稳定 ,个体间差异较小 ;G显带核型结构畸变分析 ,断裂占 0 33% ;无着丝粒畸变和不平衡易位均为 0 0 8% ,自发畸变率低。LD50 雄性为 7 17Gy,雌性为7 5Gy ,与ICR和 6 15小鼠比较 ,有非常显著的差异 ,对电离辐射具有更强的耐受性。造血功能三项指标均显著高于ICR和 6 15小鼠 ,CFU_S数比ICR和 6 15小鼠分别高出一倍和三倍。接种恶性淋巴瘤连续传 15 2代、移植乳腺癌瘤株75代、肺腺癌瘤株 5代 ,成瘤率均为 10 0 %。自发性恶性淋巴瘤具有较强的特异性