普洱茶渥堆发酵过程中嗜热细菌的分离和鉴定

对普洱茶发酵全过程的茶样进行了pH检测,发现在渥堆过程中pH在前期有所下降达到4.5,中期基本趋于稳定,后期又有所回升。根据渥堆过程中高温和偏酸性的特征,采用传统培养与分子生物学方法相结合,对全过程的茶样在高温条件下进行细菌的分离、纯化及鉴定。结果发 现有大量嗜热细菌的存在,包括凝结芽孢杆菌 Bacillus coagulans,枯草芽孢杆菌 Bacillus- subtilis,地衣芽孢杆菌 Bacillus licheniformis,热嗜淀粉芽孢杆菌 Bacillus thermoamylovorans,Bacillus shackletoni,喜热噬油芽胞杆菌 Geobacillus thermoleovorans,乳酸片球菌 Pediococcus acidilactici,植物乳杆菌 Lactobacillus plantarum,等。这些嗜热细菌和嗜热真菌一起在普洱茶的发酵中起到了关键作用。     

普洱茶不同发酵时期微生物群落宏转录组学研究

分离提取了普洱茶发酵前期和发酵中期茶叶样本中的微生物菌群全mRNA,并通过Illumina测序得到普洱茶发酵前期17376转录文本结果以及普洱茶发酵中期14456个转录文本结果。对测序结果的注释结果表明黑曲霉（Aspergillus niger）在两个阶段都占有绝对优势;对两个样本差异表达部分GO功能和KEGG PATHWAY的对比分析表明,适应渥堆发酵环境变化的微生物（如黑曲霉等）对普洱茶发酵过程起到了决定性的作用。     

普洱茶发酵过程中的主要微生物及影响发酵因素分析

普洱茶发酵过程中主要微生物的观察分析:湿气(水份)、空气(给氧量)对普洱茶发酵起决定的作用;微生物和不同茶头培养的茶曲参与发酵的茶堆有可以感觉到的微小的差异;容器发酵并改善给氧状况,能使茶堆发酵均匀、质量好。     

云南普洱茶人工接种发酵研究

通过用优势菌株进行培养、制备菌种液,对普洱茶进行人工接种发酵,并与未接种自然发酵的比较.结果显示:人工接种发酵比自然发酵时间大大缩短;(黑曲霉+酵母)组合及(青霉+酵母)组合为人工接种发酵的优势菌种组合;用这2种菌种组合进行发酵时,发酵茶的主要生化成分的含量及感观评价最接近陈化3年的特级普洱茶.     

反相离子对色谱法测定不同茶叶中茶氨酸

建立一种可适用于不同品种的茶及茶叶制品中茶氨酸含量的高效液相色谱法.特点是通过在传统流动相中添加离子对试剂(1-癸烷磺酸钠),以改进不同加工方式的茶叶中茶氨酸测定过程中极性强、保留差、抗干扰能力弱等问题.流动相:0.005 mol/L癸烷磺酸钠水溶液(含0.05％三氟乙酸)∶乙腈=75∶25(v/v),色谱柱:C18(5μm,250×4.6mm),流速:1.0 mL/min,检测波长:203 nm,柱温:35℃,进样体积:10 μL.茶氨酸在0.05 mg/mL到0.50 mg/mL范围内呈现良好的线性关系,检出限为1.996 ng,定量限为7.984 ng,回收率为102.2％,精密度为0.7％.本方法适用于多品种茶叶中茶氨酸含量的测定,操作简便,分离快速,结果准确.     

普洱茶中茶多酚和茶多糖的提取工艺研究

以普洱茶为材料、水为提取溶剂,通过正交设计考察了浸提温度、浸提时间、溶剂用量、浸提次数4个因素对其所含茶多酚和茶多糖提取得率的影响,优化茶多酚和茶多糖综合提取工艺.结果表明,最佳提取工艺条件为浸提温度80℃,浸提时间1 h,溶剂用量(固液比)1∶10,浸提次数1次.在优化的提取工艺条件下,提取物干物质得率为20.65%,其中茶多酚含量为30.47%,茶多糖含量为57.26%,且该提取物作用于高脂饮食小鼠降脂效果显著.     

接种地衣芽孢杆菌发酵的普洱茶品质与微生物群落分析

为通过接菌发酵提高普洱茶的品质,将从普洱茶中分离鉴定到的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)L1接种于灭菌和未灭菌的晒青茶中,分别进行纯菌发酵与强化发酵。结果表明:纯菌发酵后茶叶中茶多酚质量分数和5种儿茶素[儿茶素(C)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、儿茶素没食子酸酯(CG)、没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)]质量比较自然发酵显著降低(P<0.05),茶褐素质量分数显著增加(P<0.05)。与自然发酵相比,强化发酵中茶褐素[(6.75±0.13)%]、茶红素[(1.04±0.09)%]和可溶性糖[(5.76±0.10)%]质量分数显著升高 (P<0.05);而CG[(0.39±0.03)mg/g]、表儿茶素[(0.86±0.05)mg/g]、GCG[(0.20±0.03)mg/g]、 C[(2.28±0.14)mg/g]、表没食子儿茶素[(1.69±0.11)mg/g]、EGCG[(0.33±0.02)mg/g]6种儿茶素质量比显著降低(P<0.05)。强化发酵茶汤甜味(3.33±0.78)和厚重感(6.11±0.71)感官评分增加,苦味(1.33±0.50)、涩味(0.67±0.50)和酸味(0.33±0.44)分数降低。色差仪检测发现,强化发酵茶汤的a*值(25.70±0.68)、b*值(77.06±1.07)增加,L*值(71.58±0.83)降低。细菌16S rRNA和真菌ITS序列的扩增子测序发现,地衣芽孢杆菌L1在整个过程中并未一直是优势细菌(发酵中后期仅为0.2%~0.5%),但改变了微生物群落结构,表现在短杆菌(Brevibacterium)、食腺嘌呤芽生葡萄孢酵母(Blastobotrys adeninivorans)和Rogersella griseliniae的相对丰度显著升高(P<0.05);而无色杆菌(Achromobacter)、伯克氏菌(Burkholderia)、柠檬酸杆菌(Citrobacter)、欧文氏菌足杆菌(Erwinia)、埃希氏菌(Escherichia)、克雷白氏菌(Klebsiella)和微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)7种微生物的相对丰度显著降低(P<0.05)。因此,接种地衣芽孢杆菌L1发酵普洱茶,可能通过与其他微生物的协同作用改变茶叶中的特征成分,从而提高普洱茶的感官品质。  收稿日期:2021-08-09 基金项目:国家自然科学基金资助项目(31760225;32160728);云南省高层次人才培养计划青年拔尖人才专项(YNWR-QNBJ-2018-366);云南省科技厅科技计划项目(202104BI090008)。 第一作者:刘琨毅,男,副教授,博士,主要从事传统发酵食品方面的研究。 *通信作者:赵 明,男,教授,博士,主要从事茶叶生物化学方面的研究。     

反相高效液相色谱法快速测定谷氨酰胺发酵过程中主要游离氨基酸

谷氨酸胺发酵过程代谢的主要游离氨基酸是谷氨酸胺和谷氨酸．用反相高效液相色谱技术,采用柱前衍生、荧光检测的方法可快速测定其含量．本法衍生步骤简单、灵敏度高、选择性强．利用该技术对正常谷氨酸胺发酵过程代谢的两种主要氨基酸含量变化进行了分析,为谷氨酸胺发酵过程分析提供了可靠的依据．     

云南普洱茶产地土壤理化性状分析

选择云南省普洱茶产地普洱市、临沧市和西双版纳州为研究区,对不同的土壤类型和土壤各层的理化性质进行分析,并结合茶园的生长情况,研究了土壤理化性质的适宜性.结果表明:1)普洱茶主产区各种土壤类型中,赤红壤的N、P、K的质量分数(w)均偏低,对茶树生长的限制因素较多.黄壤的全P、全K含量丰富,适合茶树生长的有利条件较多.其他土壤类型中,K和P是茶树生长的主要限制因子;2)表、心、底土层的质地一般为粉砂质壤土,是pH范围为4~5的微酸性土壤,存在土壤表层酸化的趋势;3)土壤有机质层深厚,w(全N)达到1%~2%;w(速效P)较低,且从表、心、底土层逐渐减少.w(K)较高,w(全K)平均值在0.6%~1.0%,w(有效K)在土壤表层的积累较明显;微量元素中,Fe、Mn元素w较高;4)有效P、有效K及微量元素Fe和Mn对普洱茶茶叶的生长有重要的作用.     

不同产地连翘中主要活性成分含量的比较

通过测定不同地区连翘中主要活性成分含量,分析不同产地连翘的质量差异.采用高效液相色谱(HPLC)法,测定了13批连翘中芦丁、连翘酯苷A、连翘苷、齐墩果酸和熊果酸这5种主要活性成分的含量,并对测定结果进行主成分分析和聚类分析.研究结果表明:不同产地和同一产地青翘老翘中5种主要活性成分的含量存在一定的差异.河南信阳青翘和安...     

快速溶剂萃取-高效液相法测定茶叶中的多酚

茶多酚是茶叶中一类主要的化学成分.利用快速溶剂萃取的方法,提高样品的萃取效率、大大减少溶剂用量;同时应用高效液相色谱法测定茶多酚的含量,方法快速、准确,为进一步开发荼多酚的用途,提供了可靠的理论和实验依据.     

高效液相色谱法测定烟草中的淀粉含量

研究了用高效液相色谱法测定烟草中的淀粉含量，方法检测限为3．0mg／L，相对标准偏差为1．6-2．1％，标准回收率在95～105％之间。新方法用于几种烟草样品中淀粉含量测定，结果令人满意。     

HPLC法测定水产品中欧索林酸残留量

研究了鱼类养殖中残留在鱼体内的欧索林酸的高效液相色谱（HPLC）检测方法．样品中欧索林酸在酸性条件下用乙腈提取，采用液液分配方法净化除去共存提取干扰物质后，用带有荧光检测器的高效液相色谱仪检测．方法的检测限为1.0μg／kg，线性范围2．5—50．0μg／L，相关系数r=0．9995，添加1．0，6．0和10．0μg／kg浓度水平，平均回收率分别为94.0％、83.7％和82．6％，相对标准偏差分别为5．1％、5．8％和2．5％．该方法具有高灵敏度、简单、快速和低成本等特点，适用于检验机构检测和食品加工企业产品控制．     

高效液相色谱法测复方痢菌净制剂中组分含量

采用高效液相色谱法测定复方痢菌净制剂中痢菌净和喹乙醇含量，该方法色谱条件为：ＨＹＰＥＲＳＩＬＯＤＳ色谱柱，甲醇（Ｖ）／水（Ｖ）（５０：５０）作流动相，注速０．８０ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长为２６０ｎｍ，平均回收率痢菌净为９７．３２％，喹乙醇为９８．２９％，变异系数分别为１．３２％和０．９２％。     

固相萃取-高效液相色谱法测定水中氢氯噻嗪

为准确测定水体中的痕量氢氯噻嗪含量,建立了固相萃取（SPE）-高效液相色谱法（HPLC）联用的测定方法。首先,将采集的水样（1 000 mL）进行过滤并调节pH值后,通过活化后的HLB固相萃取柱进行净化;然后,用10 mL纯甲醇进行洗脱提取,氮吹至近干,用1 mL甲醇定容;最后,采用HPLC检测所得溶液。检测条件：色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C₁₈（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相为甲醇∶水（二者体积比为70∶30）,流速为1 mL/min,等度洗脱,检测波长为270 nm,采用外标法定量。结果表明:氢氯噻嗪质量浓度为0.1~50.0 μg/L时,待测物的质量浓度和色谱峰面积成正比例线性关系,线性方程为A=221.49c+3 915,R²=0.999 7[WT];供试品在24 h内放置稳定,平均回收率为99.90%（RSD值为1.8%,n=5）,精密度为1.1%。所建立的方法操作简便,具有较高的精密度,检出浓度低,采用的流动相配制简单,对环境污染小,可用于水环境中痕量氢氯噻嗪的检测、分析及风险评估。     

高效液相色谱法检测蔗渣半纤维素水解物中的单糖

用高效液相色谱法测定甘蔗渣半纤维素水解物中的单糖含量。以Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＮＨ２柱为色谱分析柱，用示差折光检测器检测，流动相是乙腈：水（８０：２０）。在此色谱条件下，甘蔗渣半纤维素水解物分离成：木糖、阿拉伯糖、果糖和葡萄糖。各单糖呈良好的线性。加样回收率的平均值为９７．３％～９８．７％，此方法简便、快速、准确。     

锁阳中儿茶素、根皮苷的提取及含量测定

建立了高效液相色谱-二极管阵列检测器联用测定中药锁阳中黄酮类化合物儿茶素、根皮苷的方法．用C18反相色谱柱梯度洗脱法成功分离了二者;以儿茶素和根皮苷含量总和为指标。以物料比、提取时间和提取次数为正交试验考察因素,优化了锁阳中黄酮的提取方法,得到的最佳提取条件为：28kHz、50℃条件下,以药材量7．5倍的甲醇超声提取3次,每次30min．该方法提取效果好。精密度、准确度和稳定性较好。用于11个不同产地锁阳样品的提取和含量测定。可作为锁阳及其制品中儿茶素和根皮苷等黄酮类化合物提取、分析及质量控制的方法．     

高效液相色谱测定乳液和化妆水中芍药苷和葛根素的含量

建立了高效液相色谱（HPLC）检测乳液和化妆水中芍药苷和葛根素的方法.样品经过甲醇超声提取,以质量分数为0.1%磷酸水溶液-乙腈洗脱,经C₁₈反相色谱柱分离,二极管阵列检测器（DAD）检测,计算出2种草药成分含量.在最优化条件下,该方法对芍药苷和葛根素的相应线性范围在0.2~10.0μg·mL^-1,在232 nm和250 nm处紫外吸收强度具有良好的线性关系,相关系数（R²）大于0.999.该方法的回收率在90.4%~103.9%之间,相对标准偏差（RSD）在1.53%~2.37%之间,芍药苷和葛根素在乳液和化妆水中的方法检出限分别是2 mg·kg^-1和8 mg·kg^-1.该方法适合快速、高效、准确测定乳液和化妆水中芍药苷和葛根素的含量.     

HPLC法测定阿司匹林经皮给药贴剂中阿司匹林的含量

建立阿司匹林贴剂含量的测定方法。乙腈为阿司匹林贴剂的萃取溶剂,用Waters公司Symmetry Shield^TM RP₁₈柱(3.9mm×150mm, 5μm),流动相：乙腈-0.01mol·L^-1的磷酸氢二钠（磷酸调pH值至2.50）;体积比为25∶75;检测波长234nm;流速10mL·min^-1。阿司匹林在3～96μg·mL^-1范围内呈现良好的线性关系,r=0.9993。阿司匹林回收率为100.3%,RSD为0.42%。本方法简单、灵敏、准确,可作为该制剂内在质量的控制方法。