黑曲霉糖化酶的分离提纯及性质研究

采用硫铵分级、DEAE-纤维素离子交换层析、Sephadex G-150凝胶过滤等方法,从黑曲霉A.S.3.4309变异菌B-11的发酵液中,分离出三种电泳均一的糖化酶(G I.GⅡ和GⅢ)。收率分别为0.8％,50％和18.6％。性质研究表明,G I,GⅡ和GⅢ均由一条多肽链组成。     

果胶酶的分离提纯及某些性质研究

本文报导了一种制备高纯度果胶酶的方法,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测得其分子量为32000,用等电聚焦电泳法测得其等电点为pH8.0～8.2,用圆二色谱测得此酶呈无规则卷曲构象。     

中华猕猴桃蛋白酶羧基的化学修饰

有关中华猕猴桃蛋白酶(Actinidin,E C 3、4.22.14)催化功能基团的研究表明:CYSH—25、His—161为酶活性部位必需基团,而Lys和Trp残基为酶活力表现所必需。本文中报道应用水溶性碳二亚胺(EDC)修饰动力学方法,进一步探讨羧基     

中华猕猴桃蛋白酶催化功能基团的研究

从野生中华猕猴桃分离提纯得SDS电泳单一纯酶制剂,酶蛋白的总巯基数为7,其中游离巯基数为1.3×10~(-5)MpCMB使酶活力丧失100％,酶修饰失活呈一级反应,表明酶分子的唯一游离巯基为该酶催化活性的必需功能基团.酶在2×10~(-4)M PMSF,活力仍不受影响,提示Ser残基与酶的催化功能无关.以Na_2S_4O_6保护游离巯基,用NBS修饰Trp残基,并辅以紫外光谱和萤光光谱分析.结果表明Trp残基为酶催化功能所必需.初步的CDC化学修饰结果亦表明,羧基似与酶催化活性有关.     

中华猕猴桃蛋白酶热失活动力学

改进了酶的提纯方法获得聚焦电泳为单一区带酶制剂。酶热失活以 HbCO 为底物时为一级反应,动力学方法表明 HbCO 对酶的热失活有保护作用,68.90℃时k_(+0)/k′_(+3)比值24,“HbCO”络合物活化能 535kJ/mol,焓 531 kJ/mol,自由能 116kJ/mol,熵1 212kJ/mol,生成自由能和生成热分别为20和209kJ/mol,这些参数说明 HbCO对酶热失活保护作用以及对酶构象影响可能与二者的多键结合和HbCO 水化作用有关。本文中还得到CBZ-Lys-ONp 为底物的热力学参数,观察到 DTT 对酶热失活保护是很小的。     

中华猕猴桃蛋白酶赖氨酸残基的作用

有关中华猕猴桃蛋白酶(Actinidin,EC 3,4,22,14)催化功能基团的研究表明一个游离巯基,一个组氨酸残基为酶催化活性中心必需基团;色氨酸残基为酶活力表现所必需;羧基似与催化活性有关。迄今尚未见到有关赖氨酸残基作用的报道。本文应用TNBS(2,4,6-三硝基苯磺酸)修饰动力学方法和光谱分析,进一步探讨了赖氨酸残基与Actinidin催化活性之间的关系。有关酶的分离提纯鉴定及酶活力测定均参照文[4],其它实验条件见图注。     

中华猕猴桃蛋白酶在乙醇溶液中的分子折叠

研究了中华猕猴桃蛋白酶在不同浓度（Ｖ：Ｖ）乙醇存在下的内源荧光发射光谱、紫外差光谱、圆二色光谱（ＣＤ谱）及傅立叶变换红外光谱的变化，并测定了相应的活力变化，当乙醇浓度低于３０％时，酶的荧光强度无明显变化，而乙醇浓度大于３０％时，则酶荧光强度增大，且峰位略红移。在乙醇溶液中，酶的紫外差光谱在２２５～２３５ｎｍ内出现正峰，峰强度随乙醇浓度的增高基本表现为逐渐增大，峰位也逐渐蓝移。ＣＤ谱及红外光谱的测定结果表明低浓度乙醇中酶分子有序二级结构的减少及高浓度乙醇中β－折叠含量的增加．随乙醇浓度的增加．酶的活力表现为逐渐降低，且乙醇对酶的失活作用类似于竞争性抑制。     

南美白对虾丝氨酸蛋白酶的分离纯化及性质研究

通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose、Phenyl-Sepharose、Hydroxyapatite、Superdex 75等方法,从南美白对虾消化腺中分离得到一种丝氨酸蛋白酶.SDS-PAGE结果显示,其分子质量约为28 ku,最适pH值与最适温度分别为9.0和40℃,且pH值在7.0~10.0之间以及温度在40℃以下有较高的稳定性.底物特异性实验与抑制剂实验结果表明,该酶属于类胰蛋白酶的丝氨酸蛋白酶.动力学实验显示,以Boc-Phe-Ser-Arg-MCA为底物时,Km=0.69μmol/L,Kcat=0.33 S-1,Kcat/Km=4.78×105(mol/L)-1S-1.     

高活力天冬氨酸酶的分离提纯及性质

采用基因工程技术构建具有较高活性的突变菌株 Ｔ３３， 以它为产酶菌株分离提取天冬氨酸酶， 并研究它的酶学特性． 结果表明， 分子量为 １９０ ０００． 最适反应 ｐ Ｈ＝ ８０， 最适反应温度为 ３７ ℃． 在ｐ Ｈ＝ ６０ 时， 该酶呈负协同效应； 在ｐ Ｈ＝ ８０ 时， 该酶呈正协同效应． 该酶α螺旋度为３６３％     

桄榔蛋白酶的分离、纯化及性质的研究

在桄榔属的Arenga pinnata的果实中,发现了丰富的蛋白水解酶。我们称之为桄榔酶(Arengain)。用硫酸铵将果肉汁分级盐析获得粗酶制品,用DE52层析分出三个蛋白水解活性峰,其中层析成分5为主要活性组分,等电聚焦电泳证实该组分均一,等电点在pH3.99左右,用SDS-PAGE电泳法测算得分子量为44000。 10~(-3)mol/L的Hg~(2+)、PCMB、1AA、DTNB可计量地使酶失活.Hg~(2+)、PCMB抑制了的酶可为EDTA恢复活性。一定时间内巯基乙醇能令酶活性增加。二异丙基氯磷酸虽可抑制酶活性,但先加半胱氨酸,后加二异丙基氟磷酸,可使这种抑制不能实现,证明桄榔酶是巯基酶。酪蛋白做底物,桄榔酶反应的最适温度为60℃,最适pH为pH11。该酶的pH稳定性很好,pH6～12都表现了很高活性.酶液于pH6～12中24小时活性基本不变;该酶还表现了极高的乙醇耐受力,在50％～70％的乙醇中都显示出高活性。它还耐受3mol/L盐酸胍,50％曲拉通,0.1mol/L的二巯苏糖醇。     

中华猕猴桃蛋白酶在甲醇溶液中的构象与活力变化研究

研究中华猕猴桃蛋白酶在不同浓度（Ｖ：Ｖ）甲醇存在下的内源荧光发射光谱、紫外差光谱及ＣＤ光谱的变化，并测定相应的活力变化；酶的内源荧光强度随甲醇浓度的增加而增高，且发射峰略有红移．在甲醇存在下，酶的紫外差光谱在２２５～２３５ｎｍ范围内出现正峰，随甲醇浓度增高，峰强度增大，且峰位蓝移．ＣＤ谱变化表明，在不同浓度甲醇存在下，酶的ａ──螺旋度有不同程度的减少．在１０％～５０％甲醇存在下，酶有不同程度的激活现象，当甲醇浓度为３０％和４０％时，激活程度最大，约为天然酶活力的１５０％．     

鲨鱼肠道蛋白酶的分离纯化及性质的初步研究

以鲨鱼肠为材料，经柠檬酸缓冲液抽提，硫酸铵分级分离，ＣＭ－纤维素离子交换柱层析纯化，获得蛋白酶（Ⅰ）和蛋白酶（Ⅱ），研究了蛋白酶Ⅱ性质，酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一蛋白纯，酶的紫外吸收特征峰在２７５ｎｍ处，测得酶的分子量为１８ｋｄ，在ＰＨ８．０、３７℃下酶催化酪蛋白水解的Ｋｍ值为６．９×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ。酶水解酪蛋白的最活温度为５２℃，活化能为７６．５３ｋＪ／ｍｏｌ。几种金属离子对酶活力的     

猪血浆巯基蛋白酶抑制剂的分离纯化及性质研究

用(NH_4)_2SO_4分段盐析,DEAE-纤维素离子交换和Papain—Sepharose亲和层析,从猪血浆纯化了一种巯基蛋白酶抑制剂(SUlfhydryl proteinase inhibitor;简称SPI);纯化倍数为54.36倍.经高pH、低PH不连续电泳呈一条区带.含糖量为7.77％;PI为4.80.氨基酸组成分析表明,猪血SPI富含酸性氨基酸、芳香族氨基酸和含硫氨基酸.用SDS-PAGE和SephadexG-100层析,测得分子量为130000d和131000d,由两个分子量略有差别的亚基组成.对木瓜蛋白酶有强烈抑制作用,对胰蛋白酶无作用。α-螺旋结构含量高。     

海洋弧菌碱性蛋白酶的分离纯化及部分性质研究

采用硫酸铵沉淀、Sephadex-75,Sephadex-100凝胶过滤层析等方法纯化海洋弧菌（Vibrio pacini)X4B-7菌株产生的碱性蛋白酶，得到电泳纯酶制品，并对纯化酶的性质进行了研究。结果显示：纯酶的分子量为27KD，等电点pI=8.7,最适反应pH9.0-10.5，最适反应温度50－60℃。EDTA对酶活力没有影响，高酶浓度可以降低SDS对酶的抑制作用，该酶可用于解聚组蛋白。DNA琼脂糖凝胶电泳证明：酶对DNA酶有降解作用，而对DNA没有降解作用，该酶有希望应用于核酸的提取。     

中华猕猴桃蛋白酶在半极性介质中的构象变化和动力学研究

三种有机溶剂,二氧六环、二甲基甲酰胺和乙二醇,都不同程度地抑制中华猕猴桃蛋白酶催化水解赖氨酸对硝基本酯(CBZ-LYS-pNP)能力,其动力学行为符合Michaelis-Menten方程式,二氧六环的抑制作用类似于竞争性抑制类型,二甲基甲酰胺和乙二醇为非竞争性抑制,其抑制常数,分别为k_1=5.6×10~(-2)、0.58和1.60mol/L,光谱分析表明,酶在有机溶剂中,空间构象也发生了变化,随着二氧六环和二甲基甲酰胺浓度的增大,酶分子的α-螺旋度下降,无规卷曲度上升,荧光发射强度比天然酶略有增高或降低,变化的规律性不够,紫外差光谱显示,酶在6％二甲基甲酰胺中有一个243nm的负峰,此负峰随浓度的增大而增大,并略向红移,在24％二甲基甲酰胺中,负峰红移至248nm处。     

驴精子顶体蛋白酶的提纯及其一些性质的研究

顶体蛋白酶acrosin(EC3、4、21、10)是存在于哺乳动物精子顶体中的一种丝氨酸蛋白酶,生化性质上属于水溶性碱性糖蛋白,专一水解精氨酰键,最适pH为8.0—8.5。首先在兔精子中提取了顶体蛋白酶,发现此酶能分解兔卵透明带,并且被胰蛋白酶抑制剂所抑     

绞股蓝皂甙的提纯及性质研究

采用甲醇、水和乙醇等三种试剂提纯绞股蓝皂甙；其粗品经氧化镁吸附得绞股蓝皂甙精制品。用人参皂甙作标准品，测定３种试剂提取的绞股蓝皂甙的纯度，并用硅胶薄层层析法和红外光谱法测定其化学组成，通过测定结果比较，发现以乙醇为绞股蓝皂甙的提纯试剂的方法最好     

蓝圆鲹分离蛋白水溶性蛋白酶的鉴定及性质

以蓝圆鲹(Decapterus maruadsi)为研究对象,采用酸/碱溶解-等电点沉淀法制备蓝圆鲹肌肉分离蛋白(acid/alkaline aided protein isolate,API/KPI),分析比较不同分离蛋白与肌肉全蛋白(total protein,TP)的自身降解规律,并对其水溶性蛋白酶的酶学性质展开研究。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)结果显示,TP与KPI均会发生强烈的自身降解现象,API则无明显的自身降解。酶谱与酶活力测定结果表明,KPI保留了TP超过80%的酶活性,而API则仅剩10%的水解活性。酶学性质结果表明,TP的内源酶具有两个最适p H值,分别为3. 0与9. 0,而KPI的最适p H值为9. 0; TP与KPI内源酶的最适温度均为60℃。荧光底物结果表明,TP与KPI的最适荧光底物为Boc-Gln-Arg-Arg-MCA,且对羧基端为Arg的底物均具有较高的水解活性。抑制剂结果显示,TP和KPI水溶性蛋白酶都能被丝氨酸蛋白酶抑制剂强烈抑制,暗示水溶性丝氨酸蛋白酶在碱法等电点制备的分离蛋白凝胶劣化中起关键作用。     

中华猕猴桃的解剖学研究

中华猕猴桃为我国特有植物。首先,这篇文章报导了中华猕猴桃的根、茎、叶、花、果实、种子的系统解剖,描述了中华猕猴桃的上述结构的解剖特征。其次和猕猴桃科、猕猴桃属其他种,狗枣猕猴桃[Actinidia kolmikta(Rupr.et Maxim.)Maxim.]硬齿猕猴桃[Actinidia callosa Lindl.]作了比较和分析,找出了不同点。并对中华猕猴桃的栽培提供了解剖学方面的依据。     

文昌鱼酸性磷酸酶的分离提纯及其性质的初步研究

从厦门文昌鱼Branchiostoma belcheri(Gray)体内部分提纯一种酸性磷酸酶制剂。酶液比活力6.467μmole/mg prot/30min,提纯47倍,以等电聚焦法测其等电点为pH4.05。该酶在醋酸盐缓冲系统(37℃)中,以苯磷酸二钠为底物,测得最适pH4.5,K_m值为1.25×10~(-3)M(以对硝基苯磷酸二纳为底物测得最适pH4.5,K_m值为2.08×10~(-4)M)。pH影响K_m值而不影响V_(max),表现为竞争性类型。在不同温度条件下,测其活化能为9.15千卡/克分子。F~-,Hg~(2+),Mo~(6+)表现不同的抑制,PCMB终浓度为5×10~4M时酶活力下降70％。