槐果碱对人红白血病K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

研究了槐果碱对人红白血病细胞株K562的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用，应用流式细胞仪进一步观察槐果碱对K562细胞周期的影响。结果表明：槐果碱对K562细胞生长有明显的抑制作用，且这种抑制作用呈浓度依赖性、时间依赖性。细胞经0．8g／L、1．0g／L的槐果碱作用48h后，即呈现典型的细胞凋亡形态学变化，作用72h后DNA凝胶电泳出现片段的梯形条带。流式细胞仪分析显示，用1．0g／L槐果碱使K562细胞阻滞于G0／G1期，作用72h后G0／G1细胞比例由38．0％上升到56．2％。槐果碱对人红白血病细胞K562的增殖具有明显的抑制作用，并能诱导其发生凋亡。     

胚胎干细胞的体外扩增

探讨了胚胎干细胞在体外大量扩增的方法。将胚胎干细胞复苏后，选择合适的培养基(含高糖和谷氨酰胺的DMEM，加入ψ=20％胎牛血清，10^5U/L青链霉素双抗，0．1mmol／L L—谷氨酰胺，10^3IU／L白血病抑制因子，0．1mmol／L β-巯基乙醇)进行培养。此外，使用早代胚胎于细胞；培养时使用不涂明胶的一次性培养瓶；掌握好消化、复苏和冻存时机并及时换液；按照严格步骤进行培养、传代、冻仔。对扩增后的ES细胞进行染色体和全能性检测。结果表明，在较短时问内(5d)可将胚胎干细胞扩增16倍以上。扩增后的ES细胞较好地保持了胚胎干细胞的全能性和核型。可见使用合适的培养基，按照严格步骤操作，短期内完全可以大量扩增胚胎干细胞。     

大鼠外周血单个核细胞保存方法研究

通过观察大鼠外周血单个核细胞（PBMCs）的形态,了解不同保存方法和不同保存时期对PBMCs活性和细胞周期分布的影响,建立其短期保存方法．用密度梯度离心法获得大鼠外周血单个核细胞,分别在RPMI1640培养液中4℃保存和冷冻保护剂中－80℃保存,并分别在第1－4天和第7天,14天,21天,28天,35天用台盼蓝染色法测定细胞活力,用流式细胞仪检测细胞周期．结果分离获得的PBMCs成活率为97．69％±1．59％,基本处于G0／G1期．PBMCs置4℃保存4d后,存活率在60．84％±2．75％;置－80℃保存35d后,存活率在78．54％±2．97％,PBMCs基本处于G0／G1期．最后得出－80℃低温保存方法对PBMCs活性和细胞周期检测有一定影响,但其活性率接近80％,是一种简便易行短期保存PBMCs的方法的结论．     

人胎儿骨髓间充质干细胞的分离及生物学鉴定

通过原代细胞培养,从引产胎儿骨髓组织中分离干细胞,然后进行生物学鉴定,旨在体外建立培养胎儿骨髓干细胞的有效方法,为进一步研究干细胞奠定基础．本研究对四个月的引产胎儿骨髓组织进行原代细胞培养,采用贴壁筛选法,在含有15％胎牛血清的L-DMEM／IMDM(1:1)混和培养液中培养,7 d后细胞可长满瓶底．显微镜下观察,细胞形态均一,呈长梭形．传代后,在8代以内的细胞贴壁能力较强,生长速度较快．将其命名为BMMS-03．在第3代时,对培养的细胞进行了于细胞标志物的生物学鉴定,采用流式细胞仪对经免疫荧光染色的细胞进行检测．结果显示:97．2％的细胞呈CD105阳性反应,66．0％的细胞呈CD106阳性反应, 9．2％的细胞呈CD34阳性反应．阴性对照组阳性反应为0．5％．生物学鉴定的初步结果提示,从胎儿骨髓组织中分离培养成功的细胞为骨髓间充质干细胞,其细胞形态学特征、CD105 、CD106 和CD34-的检测结果均符合间充质干细胞的特征．本研究成功地建立了体外培养胎儿骨髓间充质干细胞的有效方法,所获得的间充质干细胞纯度较高,增殖较快,适用于干细胞生物学和组织工程学的研究．     

染色体标本制备在骨髓MSCs核型鉴定中的研究

选取对数生长期人骨髓间充质干细胞，用秋水仙素阻断细胞分裂中期，控制秋水仙素的终浓度和作用时间、低渗时间及胰酶消化显带时间，比较染色体标本制备效果。结果显示，秋水仙素的终浓度0．2μg／ml和作用时间6h，低渗时间35min及胰酶消化时间20s时可制备适合的染色体标本，经核型鉴定为正常二倍体细胞。从而探索出骨髓间充质干细胞染色体制备的适合条件，为骨髓间充质干细胞的进一步研究提供了理论依据和实验基础。     

菜心基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

用改良的CTAB法提取菜心基因组DNA,并利用紫外分光光度法测定其纯度和含量,用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA的降解状况和纯度．结果表明:此法提取的DNA具有典型的天然DNA分子的标准紫外吸收光谱特点, 且适于进行RAPD分析．RAPD分析的优化反应体系为:25μL的反应液中含有0．8 U的Taq酶,0．28 μmol／L primer,30 ng的DNA,2．0 mmol／L Mg2 ,0．20 mmol／L dNTPs．PCR扩增循环为94℃、5 min;94℃、1 min; 36℃、1 min;72℃、2 min,37个循环;72℃延伸10 min．     

血清饥饿法诱导人角质细胞HaCaT细胞周期同步化的研究

探讨血清饥饿法对人表皮细胞HacaT细胞周期的影响．采用无血清和低血清浓度的DMEM培养基饥饿HaCaT细胞,分别培养6h,12h,22h时,用倒置显微镜观察细胞形态,并且收集各组细胞,用流式细胞仪分析细胞周期各个时相细胞百分比．结果发现HaCaT细胞系在含0．2％FBS的DMEM培养基中培养12h,细胞仍然贴壁生长,并且可以使G0／G1期细胞百分率达到66．5％．因此,血清饥饿法可以应用于人表皮细胞HaCaT同步于G0／G1期,从而为后期药物筛选打下基础．     

实验用近交系小型猪WZSP表皮干细胞建系的初步研究

目的将五指山猪(Wuzhi Shan Pigs,WZSP)表皮干细胞传至15代以上,初步建立实验用近交系小型猪WZSP表皮干细胞系。方法采集WZSP耳组织,通过中性蛋白酶消化获得表皮细胞,再通过0.25%胰酶 0.02?TA消化制成单个表皮细胞悬液,接种在Ⅳ型胶原包被的培养瓶内,采用无血清条件培养基培养,0.25%胰酶消化传代。对所培养表皮干细胞进行AKP染色鉴定。结果表皮干细胞能够快速粘附在Ⅳ型胶原上,呈克隆状生长,已传至15代以上,传代间隔为7 d左右;取第5代细胞进行AKP染色呈阳性。结论在本实验条件下,建立ESCs细胞系是可能的,经鉴定,所培养细胞具有干细胞基本特性。     

水稻基因组DNA的RAPD扩增研究

通过对水稻RAPD反应条件比较研究，建立了对除草剂敏感致死水稻RAPD的最适反应体系和反应扩增程序，即在25止反应体系中，含10mmol／LTris-HCl(pH8．0)，10mmol／LKCI，8mmol／L(NH4)2804，0．05％NP-40，2．0mmol／LMgCl2，0．1mmol／L(each)dTNPs，20ng引物，20ng基因组DNA，1．5U的Taq酶。反应扩增程序为：94℃变性2min；扩增40个循环，每循环包括：94℃变性10s，40℃退火30s，72℃延伸1．5min；最终延伸5min。     

干用辣椒RAPD—PCR反应体系正交优化的研究

以干用辣椒幼苗为材料,研究了干用辣椒RAPD分析过程中的Taq酶、Mg^2＋,dNTPs、引物、模板DNA浓度、退火温度等影响因素,建立适合干用辣椒RAPD反应的PCR体系,即25μL反应体系中含有解体Taq酶1．5U、Mg^2＋2．5mmol／L,dNTPs0．6mmol／L、引物0．8μmol／L、模板DNA60ng．扩增程序为：94℃预变性4min;94℃变性1min,37℃退火1min,72％延伸1．5min,40个循环;最后72℃副延伸5min．     

依地福新抑制Jurkat细胞生长机制的研究

目的观察依地福新对体外培养的Jurkat细胞的生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V—FITC染色法检测细胞凋亡率。结果不同浓度依地福新处理Jurkat细胞24～96h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈现浓度及时间依赖性;1．0μmol／L、5．0ymol／L、10．0μmol／L依地福新处理72h后,Jurkat细胞G0／G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低（P〈0．01）;各浓度组细胞凋亡率均显著增加（P〈0．01）。结论依地福新对Jurkat细胞具有生长抑制作用,其机制与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。     

毛囊特异表达载体pCDsR-UI的构建以及绒山羊胎儿成纤维细胞的体外转染和筛选

构建IGF1基因的毛囊特异表达载体,可为今后通过体细胞核移植技术建立转基因克隆绒山羊准备核供体细胞.将绵羊IGF1 cDNA序列,连接到含有UHS启动子序列的克隆载体p19TU的SalI、SphI位点,获得过渡质粒载体p19TUI;pCDsRed2和过渡质粒载体分别经酶切和连接构成表达载体pCDsR-UI.以组织块贴附法分离和培养绒山羊胎儿成纤维细胞,外源性表达载体以脂质体方法转染所培养的第2代成纤维细胞,DMEM/F12+ 10％ FBS、37℃5％CO2中培养,经添加G418筛选,获得了稳定表达红色荧光蛋白的细胞克隆,经特异性PCR鉴定证实外源基因已经整合在细胞基因组中.转基因前后分析细胞生长曲线和染色体核型证明转基因细胞的生长状态良好、各项参数正常.     

低剂量碳离子束辐射增强AdCMV-p53转染对人非小细胞肺癌细胞的治疗效果

探讨低剂量碳离子束预辐照对AdCMV-p53转染非小细胞肺癌细胞的影响,观察了20和40MOIAdCMV-p53转染经^12C^6＋束流或γ射线预辐照的H1299细胞后,外源性p53的表达、细胞周期、细胞凋亡和细胞存活等．结果显示,经碳离子束预辐照后AdCMV-p53转染细胞p53阳性细胞所占比例高达90％多,明显高于γ射线预辐射后AdCMV-p53转染细胞p53阳性率．低剂量碳离子预辐照明显阻止AdCMV-p53转染细胞G0／G1阻滞的发生,促进G2／M阻滞和细胞凋亡的发生．碳离子束辐射诱导AdCMV-p53转染组相对生物学效应（RBE）比单纯碳离子束辐照组增加30％～60％,比单纯AdCMV-p53转染组增加20％～130％,比单纯γ辐射诱导AdCMV-p53转染组增加30％～70％．结论：低剂量碳离子束预照射明显增强外源性p53的表达和AdCMV-p53转染对非小细胞肺癌细胞的抑制．     

丹参酮ⅡA对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖的抑制作用

应用细胞培养、台盼蓝拒染计数、光学显微镜观察、流式细胞仪检测及免疫细胞化学等技术研究中药有效成分丹参酮ⅡA对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制作用．实验结果显示，丹参酮ⅡA处理MG-63细胞后，细胞增殖活动受到抑制，抑制率为52．10％，细胞倍增时间由对照组的48h延长至65h；细胞发生G0／G1期阻滞，G0／G1期细胞比例由对照组的47．5％上升到59，5％，S期细胞比例则由对照组的20．0％下降至9．0％；并出现细胞形态规则、大小趋于一致、细胞体积增大、核质比例减小等变化；MG-63细胞增殖分化调控相关的癌基因c-fos和c-myc表达活性降低．结果表明，丹参酮ⅡA对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖有显著抑制作用，其作用可能与干预c-fos和c-myc等癌基因表达从而调控细胞周期有关．     

熔融结晶分离提纯对间硝基氯苯的研究

研究了对位硝基氯苯和间位硝基氯苯在不同组成下的结晶情况，考察并分析了各种操作条件如降温速率、结晶终温和发汗终温等对熔融结晶过程中不同因素的影响．结果表明：对位组成为89．31％的最佳操作分离条件是降温速率0．05—0．055℃／min，结晶时间460～500min，结晶终温58—62℃，发汗终温82—83℃；间位组成为76．03％的最佳分离条件是加入晶核温度32．5～33℃，降温速率0．015～0．016℃／min，结晶终温26．5～28℃，发汗终温34～36℃．用最小二乘法建立了与实验结果拟舍良好的数学方程，获得了有益的操作参数并进行了模拟计算．     

蛏子软罐头加工工艺的研究

探讨了蛏子软罐头的工艺流程及工艺条件，研究了关键工艺的条件参数，结果表明，蛏子经100－105℃蒸汽蒸煮4－6min；取壳取肉后，用2．0％盐水和0．15％柠檬酸混合液浸泡，真空包装：PET／PA／CPP高温蒸煮袋，0．09MPa 真空度；蒸汽、空气混合气体杀菌和反压水冷却，杀菌公式：10－30－15min/118℃,0.15MPa空气压，产品保质期达6个月以上。     

小鼠囊胚的不同遗传背景对形成ES细胞集落的影响

使用正常囊胚经过内细胞团增殖后的离散程序，比较了小鼠C57BL／6品系、129品系和C57BL／6与129杂交的囊胚在形成胚胎干细胞（ES细胞）集落上的差异。C57BL／6品系的正常囊胚经培养后只有17．4％的胚胎出现ES集落，细胞生长迅速但极易分化。129品系为41．0％，细胞生长比较缓慢。而杂交鼠胚易于出现ES细胞集落，高达75．0％，有利于ES细胞系的建立。文中讨论了在嵌合体工作中使用这种杂交鼠胚ES细胞的可能性。     

三种脱硫剂的脱硫反应的热力学分析及机理研究

运用化学热力学理论对钙基脱硫剂（CaO、Ca（OH）2）和CuO／γ-Al2O3的脱硫反应的吉布斯函数（△G），反应平衡常数，平衡时SO2的分压进行计算，从而得出脱硫反应△G-T的关系式，计算不同温度下的△G，进而分析反应发生的可能性。在实验室条件下，CaO有效反应温度800℃下进行干法脱硫，Ca（OH）2反应温度60℃湿法脱硫，CuO／γ-Al2O3，400℃干法脱硫，分别在M／S（Ca／S或Cu／S摩尔比）为1．0、1．5、2．0进行实验。结果表明：三种脱硫剂脱硫活性顺序为：Ca（OH）2：〉CuO／γ-Al2O3〉CaO。这与热力学计算结果相一致。最后从反应机理出发，分析了脱硫活性差异的原因。     

奥曲肽对鼻咽癌细胞株CNE2生长和细胞周期的影响

观察了一定剂量的奥曲肽对鼻咽癌细胞株CNE2的细胞生长与细胞周期的影响,探讨药物对的抗肿瘤作用,从而为临床治疗鼻咽癌提供一种新的思路,并在理论上奠定一定基础。用MTT法检测细胞生长抑制作用,流式细胞仪（FCM）检测细胞周期,t检验进行统计学分析。结果表明：1．0nmoL／L-1．0μmol／L的奥曲肽均能抑制鼻咽癌细胞株CNE2的生长,且在此范围内明显呈药物量——效关系,1．0μmol／L的奥曲肽可以使鼻咽癌细胞株CNE2阻滞在G0／G1期。一定剂量的奥曲肽能够抑制鼻咽癌细胞株CNE2的生长,奥曲肽有望在药物治疗鼻咽癌方面发挥一定的作用,值得进一步研究。     

搅拌转速对Bacillus subtilis分批发酵碱性果胶裂解酶的影响

在5L小型发酵罐上，考察了不同搅拌转速对细胞生长和碱性果胶裂解酶生产的影响。根据细胞生物量、酶活水平、比细胞生长速率和比产物合成速率的变化情况，提出了两阶段搅拌转速控制策略：0～5h搅拌转速500r／min;5h后搅拌转速600r／min。PGL和PIVIGL酶活分别提高5．3％和15．1％；FGL和PMGL最大平均比生成速率分别提高15．9％和23．1％。