聚丙烯酰胺凝胶柱分离制备低聚果糖单组分

利用聚丙烯酰胺凝胶(Bio-Gel P-2)柱分离高纯度低聚果糖制备单一组分,结果表明,在1.6 cm×100 cm的玻璃柱上最佳的层析条件是洗脱速度0.2 mL/min、上样量0.5 mL(样液质量浓度0.4 g/mL)、柱温40℃。以Megazlaae公司的标准品为对照,经HPLC和MS分析,证明层析分离所得组分峰4、峰3和峰2分别是蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖。而且经HPLC面积归一化法定量分析,证明分离产品蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖蔗和果六糖的含量分别为99.91%、99.94%、99.33%和97.89%,表明其纯度很高,可以作为低聚果糖定量分析的标准品使用。     

RP-HPLC定量检测蛹虫草培养基中活性成分

建立一种反向高效液相色谱法定量检测蛹虫草培养基中活性成分腺苷含量和虫草素含量的方法.色谱柱为Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:0.02 mol/L KH2PO4∶甲醇(体积比85∶15)溶液;流速:1.0 mL/min;检测波长:260 nm.腺苷的线性测量范围为0.5~100μg/mL(R=0.999 9),平均回收率为105.3%,标准品RSD=0.76%(n=5),样品RSD=1.87%(n=5);虫草素的线性测量范围为0.5~100μg/mL(R=0.999 9),平均回收率为104.0%,标准品RSD=0.95%,样品RSD=1.23%.本测定方法线性范围宽、分离度好、具有良好精密度,可定量、准确分析不同蛹虫草培养基中活性成分腺苷和虫草素含量.     

北虫草培养残基中虫草素的提取纯化及抗肿瘤活性

以北虫草固体培养残基为实验材料,比较闪式提取、超声波提取和超高压提取培养残基中虫草素的效果,用陶瓷膜过滤提取液,获得虫草素粗提液,利用高速逆流色谱分离制备虫草素,通过LC-MS/MS对产物结构进行鉴定,并验证了虫草素对小鼠S180肉瘤的抑制作用。结果显示,超高压提取培养基中虫草素较好,高速逆流色谱分离纯化条件是以V(乙酸乙酯)∶V(正丁醇)∶V(水)=2∶3∶5的两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,流速3.0mL/min,主机转速900r/min,分离温度28℃,以此分离条件经一步洗脱,高速逆流色谱收集馏分,其中峰Ⅲ产物经HPLC检测纯度达97.6%,结构经LC-MS/MS鉴定为虫草素。从100g北虫草培养残基中可制备得虫草素181.90mg,并对其活性验证发现剂量为100mg/kg时小鼠S180肉瘤瘤重抑制率为64.48%。     

坛紫菜多糖的分离纯化和结构分析(Ⅱ)

对广东产坛紫菜沸水提取多糖采用Sevag法脱蛋白 ,冻干后得粗多糖 ,得率为 8%.在粗多糖溶液中加入CTAB以沉淀除去酸性多糖PP1,超滤以纯化中性多糖PP2 ,PP2经DEAE 纤维素、葡聚糖凝胶G2 0 0进一步纯化 .经纸层析、凝胶过滤及紫外光谱分析鉴定为纯品 .通过红外光谱、气相色谱对PP2进行组成分析 ,再用化学方法测定其总糖 ,3,6 内醚 L 半乳糖及硫酸基的含量 ,分别为 86 .33%、5.4 2 5%和 12 .2 %.最后通过高碘酸氧化 ,Smith降解等方法测定PP2的化学结构 ,结果表明 ,PP2由半乳糖、3,6 内醚 L 半乳糖、甘露糖、葡萄糖、木糖和阿拉伯糖组成 ,具有α ,β型糖苷键 ,连接方式有 (1→ 3)、(1→ 4 )、(1→ 2 ) 3种 .PP1分子量通过凝胶过滤法初步测得为 16 .2万左右 .     

春砂仁多糖的提取及组分分析

报道春砂仁多糖的分离纯化及结构分析的研究.以凝胶过滤色谱法测定春砂仁多糖的数量及分子量,结果显示:春砂仁主要含两种多糖,其数均分子量分别为56 421及1 743;多糖经酸解成为单糖并衍生为乙酰化的糖肟,对照标样采用气相色谱法测定其单糖组分为阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖及半乳糖,4种单糖含量的相对比例:1.00∶0.68∶0.97∶0.86.     

砂海星酸性粘多糖的分离纯化

利用碱提法结合酶解法从砂海星中提取酸性粘多糖.粗品经三氯乙酸和二次酶解除蛋白后,用42%和80%的乙醇分级沉淀分别得到多糖Ⅰ和多糖Ⅱ,其总糖含量分别为71.6%、80.4%,蛋白质含量分别为1.52%和1.38%.多糖Ⅱ依次用离子交换层析(DEAE-52)和葡聚糖凝胶(G-50)进行分离、纯化,结果表明分子中带有比较均一的电荷,硫酸基离子鉴定反应为阳性,并且组分比较单一;用葡聚糖凝胶(G-100)对其分子量进行测定,其平均分子量约为12kD.     

黄蜀葵多糖的分子质量测定及单糖组成分析

采用凝胶渗透色谱法测定了4种黄蜀葵多糖的相对分子质量;选用糖分离柱(CarboPacPA200,3×250 mm),以10 mmol.L-1NaOH溶液为流动相、Au为工作电极、Ag/AgCl为参比电极的脉冲积分安培离子色谱法分离测定了4种多糖水解产生的单糖成分及相对含量.结果表明:凝胶渗透色谱法测定4种黄蜀葵多糖的重均分子量分别为4.23×103、6.11×105、4.47×103、6.01×105Da;离子色谱法检出4种多糖均含有半乳糖、葡萄糖、甘露糖以及极少量的阿拉伯糖,其中半乳糖、葡萄糖和甘露糖的物质量之比分别为0.29∶1.00∶0.41、0.56∶0.13∶1.00、0.10∶1.00∶0.11和0.55∶0.17∶1.00;检出限在1.63～2.80μg.L-1范围,相对标准偏差在2.55%～4.67%之间,样品加标回收率为95.8%～107.9%.     

高效液相色谱法分析龙眼多糖的单糖组成

以新鲜龙眼果肉为原料,采用热水浸提法提取多糖,其提取工艺条件为:料液比(W∕V)1∶3,提取温度90℃,提取时间2 h.2次重复实验的龙眼多糖得率为0.52%,总糖含量为20.23%,还原糖含量3.45%.多糖经硫酸水解后,通过PMP柱前衍生化处理后,以V(水)∶V(甲醇)=50∶50作流动相,1.0 m L/min的流速,检测波长254 nm的色谱条件,利用高效液相色谱法进行分析.结果表明,龙眼多糖中存在L-鼠李糖(L-Rha)、D-葡萄糖(D-Glc)、D-半乳糖(D-Gal)3种单糖.     

黄酒中降生物胺糖多孢菌的筛选及评价

为获得可降低黄酒中生物胺含量的菌株,研究对黄酒发酵过程中的糖多孢菌进行了分离鉴定,并对其生物胺降解能力进行了探究。研究从黄酒麦曲和发酵醪中共分离鉴定得37株糖多孢菌,以菌株产生物胺和降生物胺能力为评价指标,筛选获得2株低产生物胺且具有较强降生物胺能力的糖多孢菌(F1902和F2014)。经对菌株的分子生物学、生理生化指标进行鉴定,2株菌分别为披发糖多孢菌(Saccharopolyspora hirsuta)和玫瑰糖多孢菌(Saccharopolyspora rosea)。将分离得到的2株糖多孢菌在含有生物胺的培养基中于37℃发酵5 d,发现,两株糖多孢菌对总生物胺降解率分别高达76.41%±0.82%和74.62%±0.84%。进一步对2株菌在不同环境条件下的降生物胺能力进行研究,结果表明,温度、pH值和乙醇浓度均会影响糖多孢菌的生长及降生物胺能力。其中,S.hirsuta F1902和S.rosea F2014降解生物胺的较适温度为30℃,较适pH值为7,在添加体积分数7%乙醇的环境下仍能发挥一定的生物胺降解能力。希望研究为利用糖多孢菌控制黄酒酿造过程中的生物胺含量和以黄酒为生物资源的开发利用提供一定的理论参考。     

纤维素酶液中β-葡萄糖苷酶的分离纯化

通过(NH4)2SO4分级沉淀、HiPrep 26/10 Desalting脱盐柱、Source15Q阴离子交换柱、Source 15 S阳离子交换柱、HiTrap 16/60 Sephacryl S 200 HR凝胶过滤等技术,分离纯化3种来源里氏木霉、黑曲霉、里氏木霉与黑曲霉混合纤维素酶液中的β-葡萄糖苷酶。结果表明,经SDS PAGE电泳鉴定均为电泳纯,测得黑氏木霉、黑曲霉单独培养β-葡萄糖苷酶相对分子质量分别为68、129 ku,而混合菌培养分离得到两种β-葡萄糖苷酶分子质量大小分别为66.2、134 ku。与单独培养的β-葡萄糖苷酶相似。3种来源的β-葡萄糖苷酶经多步分离纯化后的纯化倍数分别为37.25、40.21、30.12,酶活回收率分别为20.1 2%、23.21 %、28.56 %。     

浒苔多糖的提取、提纯和分析

通过水提醇沉法提取了浒苔多糖。总结了最优提取条件为:固液比1∶60,90℃,4 h。通过红外分析了特征峰。并测出浒苔粗多糖中总糖含量69.49%,硫酸根含量15.42%,糖醛酸含量为19.51%。最后用纤维素柱和凝胶色谱柱对多糖进行了提纯。     

高效液相色谱法测定伏格列波糖口腔速溶膜中伏格列波糖的含量和有关物质

建立测定伏格列波糖口腔速溶膜剂中伏格列波糖含量及其有关物质的高效液相色谱法.采用柱后衍生HPLC荧光检测法,利用亲水C18色谱柱,流动相为0.045%辛烷磺酸钠的磷酸盐缓冲液—甲醇(94∶6),荧光检测器激发波长为350nm,发射波长为430nm,柱温为25℃,流动相与荧光试剂流速相同,进样量为100μL.结果显示,伏格列波糖与各个杂质峰分离较好,在25.0~50.0μg/mL范围内,伏格列波糖浓度与峰面积的线性关系良好(R=0.9999),高、中、低3种浓度的加样回收率为98.81%~101.58%,RSD为0.99%~1.27%,检测限和定量限分别为2ng和10ng.实验表明,所建立的方法准确可靠、专属性强,可用于伏格列波糖口腔速溶膜剂的质量控制.     

藜中黄酮类化学成分及抑菌效果的研究

应用正、反相硅胶和葡聚糖凝胶柱色谱等技术对藜(Cheno podium album L.)的黄酮类化学成分进行了分离和纯化.从藜中分离得到2种黄酮类化合物,分别为异鼠李素3-O芸香糖苷(1)、槲皮素3-O-β-D-呋喃芹糖(1→2)-O-[α-L-鼠李糖(1→6)]-β-D)-葡萄糖苷(2).采用纸片扩散法进行了抑菌试...     

香菇多糖分离纯化及结构表征

采用水体醇沉法得香菇多糖粗品，再通过分级醇沉及Sephadex G-200葡聚糖凝胶进一步分离纯化得到香菇多糖；用硫酸苯酚法测定香菇多糖含量，采用分子排阻色谱法测定香菇多糖分子量，用糖腈乙酸酯柱前衍生化-气相色谱法测定单糖组成，红外光谱(IR)测定多糖结构，结果显示：香菇多糖初次提取纯化的两个组分由β糖苷键岩藻聚糖构成，相对分子量分别为9.5×10⁴和1.7×10⁴.二次提取纯化多糖组分1由岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成(3.6∶1.3∶1.2∶9.2∶63.3∶21.4),相对分子量4.2×10⁴,以α糖苷键链接；组分2由岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成(10.7∶1.5∶0.6∶14.2∶25.4∶47.5),相对分子量1.5×10⁴,以β糖苷键链接.香菇多糖结构复杂，其化学结构与生物活性密切相关，通过对香菇多糖的分离纯化和结构表征，可为获取高活性多糖、提升多糖在食品和药品中的应用价值提供科学依据.     

甘薯多糖SPP-Ⅰ的制备与结构初步研究

研究采用水提醇沉法提取甘薯粗多糖,进行单因素试验考察,用正交法优化工艺.再经DEAE-纤维素-52阴离子交换柱和Sephadex G200凝胶柱对所得粗多糖进行层析纯化,得到甘薯多糖组分SPP-Ⅰ.应用苯酚硫酸法测定多糖百分含量,HPLC法测定多糖分子质量,紫外光谱、红外光谱、甲基化衍生结合GC-MS分析多糖结构.结果表明甘薯多糖最优提取工艺为提取温度90℃,提取时间3 h,液料比40∶1,提取次数3次.甘薯多糖SPP-Ⅰ总糖百分含量分别为97. 61%,分子质量为245ku,紫外光谱扫描结果显示无核酸和蛋白质吸收峰,红外光谱扫描结果表明含有多糖类物质的特征吸收峰,结合甲基化和GC-MS分析初步确定甘薯多糖SPP-Ⅰ是具有1→3、1→3→6糖苷键结构的α-葡聚糖.     

样品预处理方法对虫草头孢菌粉中腺苷含量测定的影响

为了建立一种利用RP-HPLC法精确测定虫草头孢菌粉中腺苷含量的方法,实验在现有色谱条件的基础上优化了流动相条件,通过研究提取溶剂、时间、温度对腺苷提取效果的影响,比较超声波提取和加热回流提取的效果,以此探索虫草菌粉中腺苷测定时样品预处理的方法.结果表明,色谱条件为DiamonsilTMC18色谱柱(250×4.6 mm,5μm)、流动相乙腈-水(9∶91)、紫外检测波长260 nm时,能够将虫草菌粉中的腺苷和其他成分分开;腺苷质量分数在0.097~0.582 mg.mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系;平均加样回收率为101.1%;RSD为2.20%.样品预处理方法以在室温下用体积分数50%的甲醇超声波提取60 min为最好,该方法所需时间短,操作简单.     

芦荟脱色凝胶总糖含量测定

通过对美国库拉索芦荟预处理后得其脱色凝胶 ,利用硫酸 -苯酚化学方法 ,对脱色凝胶进行总糖含量的测定 .实验表明 ,在 490nm处 ,测其吸光度为 0 .1 81 ,脱色凝胶的总糖含量为 2 .62 2mg·ml-1.     

坛紫莱多糖的分离纯化和结构分析（Ⅱ）

对广东产坛紫菜沸水提取多糖采用Sevag法脱蛋白,冻干后得粗多糖,得率为8%。在粗多糖溶中加入CTAB以沉淀除去酸性多糖PP1,超滤以纯化中性多糖PP2,PP2经DEAE-纤维素、葡聚糖凝胶G200进一步纯化。经纸层析、凝胶过滤及紫外光谱分析鉴定为纯品。通过红外光谱、气相色谱对PP2进行组成分析,再用化学方法测定其总糖,3,6-内醚-L-半乳糖及硫酸基的含量,分别为86.33%、5.425%和12.2%。最后通过高碘酸氧化,Smith降解等方法测定PP2的化学结构,结果表明,PP2由半乳糖、3,6-内醚-L-半乳糖、甘露糖、葡萄糖、木糖和阿拉伯糖组成,具有α,β型糖苷键,连接方式有（1→3）、（1→4）、（1→2）3种。PP1分子量通过凝胶过滤法初步测得为16.2万左右。     

PI/TiO2纳米复合膜的H2/CH4和H2/N2分离性能

以可溶性聚酰亚胺为基质 ,经乙酸修饰后的钛酸丁酯为TiO2 溶胶前体 ,NMP为共溶剂 ,采用溶胶凝胶法可制得PI/TiO2 纳米复合膜。采用XPS、TEM和气体透气性能测试等手段 ,对复合膜的结构和H2 分离性能进行了表征。结果表明 ,复合膜中钛酸丁酯已转化为TiO2 ,PI与TiO2 两相结合完好。TiO2 以颗粒状均匀分布在PI基质中 ,其颗粒粒径约为 1 0nm。复合膜的H2 ,N2 和CH4 透气系数随着TiO2 含量的增加而明显增加。当TiO2 含量为2 2 3 %时 ,对H2 的透气系数为 1 4 .1Barrer,对H2 /N2 和H2 /CH4 的分离系数分别为 1 87.5和 1 4 3 .2 ,因此 ,该复合膜是一种较为理想的H2 分离和回收膜材料     

生孢粘菌多糖的研究(Ⅰ)——生孢粘菌多糖的分离、纯化、组成及其某些性质

生孢粘菌以短小纤维为碳源,发酵产生的胞外多糖,乙醇沉淀得粗制品。粗多糖经80℃热处理,甲醇分级沉淀,DEAE—纤维素32柱分离,得到精制多糖Ⅵ,含有2.67%蛋白,经琼脂糖4 B柱、聚丙烯酰胺凝胶电泳、醋酸纤维膜电泳证明分子大小比较均一。精制多糖Ⅵ用不同浓度的盐酸水介,经纸层析、气相色谱分析证明是由鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成的,克分子比为1.07∶1.46∶1.84∶1.57∶2.07∶2.66∶1。用乳酸脱氢酶法测定,丙酮酸含量为1.82%。