大黄鱼Rab11基因的克隆与表达分析

克隆了大黄鱼小G蛋白家族中的Rab11基因,测序查明其cDNA序列全长1373 bp,其中5’非编码区为129 bp,3’非编码区为587 bp,开放阅读框为657 bp,编码218个氨基酸;其氨基酸序列与罗非鱼、斑马鱼等鱼类Rab11蛋白序列同源性在95％左右,与人类、大熊猫等物种的同源性也达到90%以上。Rab11基因在大黄鱼脾脏、鳃、肾脏、皮肤、肝脏、血液、肠、心脏和胃9个组织中均有表达,在血液、肝脏中表达量最高,在胃中表达量最低;溶藻弧菌刺激后大黄鱼肝脏、肾脏和脾脏组织中Rab11基因的表达量均明显上调,提示Rab11在大黄鱼的抗病免疫反应中有着重要的作用。     

应激引起不同年龄,性别和种类小鼠免疫器官退化的比较 …

以警告信号加足底电击的方式（简称信号电击）对不同年龄、性别和种类小鼠进行应激，每天２４ｍｉｎ，共７ｄ。结果发现，应激后免疫器官退化，重量减轻，而且这种变化与年龄和性别有关。胸腺退化，年龄大的鼠比年龄小的鼠更明显，而脾脏则相反，年龄小的鼠更敏感。另外，胸腺的退化雄性要高于雌性，而脾脏则没有性别上的差异。从种类上看，Ｓｗｉｓｓ鼠比Ｂａｌｂ／ｃ鼠更敏感。对淋巴结来说，这种退化没有表现出年龄、性别和种类的     

人Rab26基因的克隆和表达

以完整EST为参考序列设计引物,以人的胎脑cDNA为模板,用PCR方法筛选获得Rab26基因全长序列,并亚克隆到载体pGEM-T,真核表达载体pEGFP-N1和原核表达载体pET．32a（＋）中,RT-PCR显示该基因在不同组织的肿瘤细胞株中表达量有明显的差异．把Rab26基因转染入HeLa细胞中,通过与绿色荧光蛋白（GFP）基因融合表达,显示Rab26定位于胞内膜性细胞器上．在大肠杆菌表达系统获得Rab26基因的高表达．这些结果为进一步研究Rab26基因在细胞内吞和运输功能等方面打下了基础．     

无毛突变基因对无毛小鼠免疫器官结构及功能的影响

摘要: 目的探讨无毛突变基因的作用,对无毛小鼠、有毛小鼠的免疫器官结构及功能进行了对比研究。方法比 较无毛小鼠和有毛小鼠主要免疫器官组织学变化,以及血清白介素－ 2 受体、淋巴细胞亚群、淋巴细胞增殖等方面 的差别。结果发现无毛小鼠和有毛小鼠免疫器官结构及功能均有一定的差异。结论研究结果提示无毛突变 基因不仅影响被毛结构,对免疫器官及功能也有一定的影响。该基因在杂合状态时也有一定的作用,表明该突变 基因具有一定的共显性。     

Rab25基因siRNA表达载体的构建鉴定及在人卵巢癌细胞A2780中的表达

为研究Rab25基因的功能及卵巢癌的基因治疗,构建针对Rab25基因的siRNA表达载体。转染细胞A2780后观察其对Rab25基因表达的抑制作用,为探索卵巢癌基因治疗的新途径打好基础。根据基因库上的Rab25 mRNA序列,设计并合成两端含有酶切位点的64个碱基的寡核苷酸链。寡核苷酸链退火后用T4DNA连接酶连接到线性化的pSUPER质粒中,并对重组质粒（命名为pSUPER/Rab25siRNA）进行酶切及序列鉴定,后转染卵巢癌细胞A2780,RT-PCR检测转染前后Ra25的表达情况。双酶切证实RaB25sinRNA表达载体克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致。RT-PCR检测显示转染卵巢癌细胞A2780后有效抑制了Rab25基因的表达。成功构建Rab25siRNA表达载体,为卵巢癌基因治疗开辟新途径。     

免疫组化方法研究胸腺素α1在小鼠肉瘤S180细胞中的表达

探讨了胸腺素α1在小鼠S180肉瘤中的表达及其临床意义．以小鼠肉瘤S180组织和正常小鼠组织为材料，福马林固定和石蜡包埋．运用兔抗胸腺素α1多克隆抗体，按常规免疫组织化学方法检测接种在小鼠皮下的小鼠肉瘤组织以及正常小鼠皮下肌肉组织细胞中胸腺素α1的表达状况．研究结果发现胸腺素α1定位表达在小鼠肉瘤组织细胞的胞浆和细胞核中。免疫组化呈现强阳性．而正常组织细胞内基本无显色，呈阴性．试验结果表明：胸腺素α1在恶性肿瘤细胞小鼠肉瘤组织细胞中高表达．而正常小鼠组织则低表达或不表达．细胞内胸腺素α1蛋白的高表达与肿瘤具有明显相关性，该研究成果可能使胸腺素α1作为一个新的和有价值的肿瘤标记物在临床诊断中得到应用，也为进一步探索胸腺素α1与肿瘤之间相互关系的分子机理研究奠定基础，并通过抑制胸腺素α1这条途径达到控制肿瘤生长的效果．     

HSP70在肺癌组织中表达水平的研究

采用免疫组织化学ＳＡＢＣ法检测３９例肺部组织中ＨＳＰ７０的表达。结果显示：ＨＳＰ７０在高度分化的肺鳞癌和肺腺癌细胞中的阳性表达率与癌旁正常肺组织之间具有高度显著性差异（Ｐ〈０．０１）,ＨＳＰ７０的表达在高分化的肺鳞癌与肺腺癌之间则无显著性差异（Ｐ〉０．０５）,在低分化的肺鳞癌和肺腺癌组织中,ＨＳＰ７０呈阴性反应,ＨＳＰ７０在肺癌组织中表达水平的高低与肺癌细胞的分化程度密切相关,而与肺癌的组织学类型     

己烯雌酚对小鼠子宫内膜层粘连蛋白表达的影响

研究己烯雌酚 (DES)影响下小鼠子宫内膜层粘连蛋白 (LN)的表达变化 .2 6只雌性昆明小鼠随机分为三组 :未孕对照组 ,小剂量 (0 .2 8μgDES /g体重 )注射组 ,大剂量 (1.1μgDES /g体重 )注射组 .用免疫组化SP法和图像分析技术进行LN定位、定量测定 .正常小鼠子宫内膜LN在上皮基膜、血管内皮基膜均有表达 .注射己烯雌酚后 ,LN表达部位基本不变 ,表达量有明显增加 (P <0 .0 5 ) ,并随己烯雌酚剂量增加而增强 (P <0 .0 5 ) .通过影响LN的表达 ,可能是雌激素调控胚泡着床的机理之一 .     

Rab39A多克隆抗体的制备与鉴定

制备抗人Rab39A多克隆抗体并进行纯化检测,以用于Rab39A功能的研究.选取免疫原性强且特异性高的羧基端42个氨基酸(176～217aa)作为目的片段.PCR法扩增并构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Rab39C42.异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化GST-Rab39C42融合蛋白,免疫新西兰兔,制备多克隆抗体.然后以亲和层析法纯化抗体,利用Western blot和免疫荧光检测抗体的特异性.结果表明,构建的原核表达载体经IPTG诱导后高效表达GST-Rab39C42蛋白,纯化后抗体质量浓度为1μg/μL;Western blot实验显示,抗体可以识别外源Rab39A蛋白和多个细胞系的内源Rab39A蛋白;抗体中和实验和RNA干扰实验证明了该抗体具有特异性.本研究成功构建了pGEX-4T-1-Rab39C42原核表达载体,并制备了特异性的抗人Rab39A兔多克隆抗体,为进一步研究Rab39A的功能提供了有力的支持.     

小鼠胸腺的结构、功能与日龄的关系

目的　探讨小鼠胸腺的结构、功能变化与日龄的关系。方法　以不同日龄的小鼠为研究对象,采用免疫组织化学方法观察胸腺细胞的凋亡情况和胸腺中T淋巴细胞的数目变化。结果　不同日龄小鼠均可见胸腺细胞凋亡,新生小鼠、第1 4、2 8d小鼠组间无明显区别(P >0 0 5 ) ,日龄4 2、5 6d小鼠相比于幼龄小鼠胸腺细胞凋亡显著增多(P <0 0 5 ;P <0 0 1 ) ,且T细胞数目明显减少(P <0 0 5 )。结论　幼龄小鼠胸腺功能已成熟,并不随小鼠的发育而增强。至日龄4 2d后,胸腺细胞凋亡明显加快,胸腺萎缩,成熟T细胞减少,功能降低。     

小鼠睾丸发育过程中Si1基因表达的研究

 以1天龄、未成熟(3周龄)、成熟期(10周龄以上)的昆明正常小鼠睾丸组织为实验材料,利用地高辛标记的Si1基因探针在其组织切片上进行DNA-mRNA分子原位杂交,探讨Si1基因在小鼠睾丸发育过程中的表达变化.同时,分别在生后15,20 d及25 d的昆明小鼠睾丸组织切片上进行凋亡细胞原位检测,验证小鼠睾丸上述发育时期的细胞凋亡情况.结果发现:①Si1基因在1天龄小鼠的睾丸组织生精上皮内无杂交信号;在未成熟小鼠的睾丸组织部分生精上皮内有极强的杂交信号;在成熟小鼠的睾丸组织生精上皮内无杂交信号.②小鼠睾丸组织生精上皮内,凋亡细胞数从生后第15-20天呈增加趋势,于生后第20天出现峰值,生后第25天又降低.上述结果表明Si1基因可能参与了小鼠睾丸的发育过程,在小鼠睾丸发育的特定时期发挥作用,由于Si1基因的表达与小鼠生精细胞凋亡发生的时期同步,表明该基因可能与小鼠睾丸发育过程中的细胞凋亡有关.     

人Rab蛋白cDNA的克隆和表达

从人胎脑cDNA文库中克隆到一种新的Rab cDNA,全长920bp,以编码213个氨基酸残基,该蛋白预测的分子质量为24567u,等电点7．34,经同源比较,该cDNA与GenBank数据库中登录号为X14964的Rab蛋白有83％的相似性和76％的相同性,将该cDNA克隆到经改造的PBV220表达质粒,转化DH5a菌株诱导表达出该蛋白,取24种不同组织的总cDNA各100ng,用该基因序列设计引物作PCR,结果在胎肝组织中检测到有明显条带,表明该Rab基因相对在胎肝有高表达。     

AtbZIP19和AtbZIP23蛋白的原核表达

bZIP类转录因子参与调控多种生物学过程,包括植物生长、花的发育、种子的成熟、衰老、光信号传导、损伤修复、病菌防御以及对各种环境胁迫的响应等。文章构建AtbZIP19和AtbZIP23基因的原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了蛋白表达;提取拟南芥植株总RNA,通过RT-PCR克隆AtbZIP19与AtbZIP23基因cDNA全长;将pET-32a+载体和聚合酶链反应(PCR)产物进行双酶切,通过DNA连接反应将2个基因定向克隆到pET-32a+质粒中;经菌液PCR和测序鉴定获得阳性克隆后,将重组质粒转化至大肠杆菌原核表达菌株BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后表达得到目的蛋白。     

神经生长抑制因子(GIF)和小分子G蛋白Rab3a在大鼠脑组织中的定位研究

神经生长抑制因子（GIF）是金属硫蛋白家族中唯一具有明确生理功能的成员,在Alzheimer’s症脑提取物存在下,对神经细胞的生长还具有抑制作用。Rab3a为小分子G蛋白的一种,通常以一种Ca2＋依赖形式在调控神经递质释放的过程中起着十分重要的作用。目的：本文用免疫组织化学的方法验证二者间的相互作用。方法：利用酶标定和荧光标定的免疫组化方法,确定GIF和Rab3a蛋白在大鼠脑中的分布定位及其二者的共定位。结果：用ABC Kit进行酶标定测得GIF和Rab3a在鼠大脑中的主要分布区域为脑皮层、海马等部位,用荧光标定的方法确定GIF和Rab3a两蛋白能在脑组织中共定位。结论：GIF和Rab3a广泛分布于脑组织申．且二者有共定住行为。为二者问存在相互作用提供了有力的证据．     

Nm23-H1 基因在膀胱移形细胞癌中的表达及意义

膀胱移行细胞癌石蜡包埋标本62例，正常对照标本9例，采用免疫组化SP法研究nm23-H1基因表达与膀胱癌分级、分期、复发及转移的关系。结果表明：nm23-H1基因在62例膀胱癌中的阳性表达率为66．1％，阳性表达率随膀胱移行细胞癌分级、分期的增高而增高，而随复发及转移的增多而降低。因此推论，nm23-H1基因在膀胱移行细胞癌形成过程中起促进作用，而在复发和转移过程中起抑制作用。可作为评价膀胱癌恶性度、肿瘤进展的指标。     

紫荆花逆境下不同器官抗性物质研究

以不同温度刺激下的逆境条件,通过SOD、POD、黄酮、脯氨酸这些抗性指标,研究紫荆树花发育、荚发育、各器官不同部位物质含量表现,结果表明:在花发育过程中,花瓣中SOD、黄酮、脯氨酸含量高,花萼POD活性高。在荚发育过程中,嫩荚SOD活性强,老荚POD、黄酮、脯氨酸含量高。总趋向规律是花瓣中脯氨酸含量偏少,种子中SOD、POD、黄酮偏少。     

Cloning of a down-regulated gene encoding small GTP binding protein in hybrid wheat

Previous studies showed that differential gene expression between wheathybrids and their parents was responsible for the heterosis. To provide an insight into the molecular basis of wheat heterosis, one cDNA, designated TaRab, was identified from the cDNA library of wheat seedling leaves. The sequence comparison in GenBank revealed that TaRab is homologous to a group of genes encoding Rab-GTP binding protein. Semi-quantitative RT-PCR analysis indicated that TaRab was expressed in all plant tissues examined, but at slightly higher level in leaves. Further analysis exhibited that TaRab displayed lower expression in hybrid than in its patents in both roots and leaves, which was in agreement with the original results of suppression subtractive hybridization. TaRab was located on chromosome 7B and C-7DS5-0.36 by in silico mapping. The relationship between differential expression of TaRab and the molecular basis of wheat heterosis was also discussed.     

无患子不同器官中的总皂苷和总黄酮含量

【目的】研究无患子皂苷和黄酮在不同器官中的含量及其在叶中的积累动态,并对彼此间相关关系进行探讨,可为无患子的综合高效利用提供参考。【方法】以无患子为材料,分别用香草醛-高氯酸比色法和分光光度法检测其花、果、枝、根等器官及8个时期叶片的总皂苷和总黄酮含量。【结果】总皂苷和总黄酮在不同器官中的分布存在差异,各器官中的总皂苷质量分数(0.98%~13.26%)均显著高于总黄酮质量分数(0.31%~1.74%);果皮中的总皂苷含量最高(13.26%),其次为花(5.68%~6.21%)和叶(4.11%,8个时期平均值);各器官中总黄酮质量分数由大到小顺序为:叶(1.74%,8个时期平均值)、花苞(0.88%)、花朵(0.74%)、根(0.53%)、枝(0.44%)、果皮(0.31%)。叶中总皂苷和总黄酮在1个年生长周期内的积累规律不同,总皂苷含量总体上呈逐渐升高趋势,总黄酮含量波动变化。总皂苷含量与总黄酮含量间存在一定的负相关关系。【结论】无患子总皂苷和总黄酮在不同器官中的分布及其在叶中的积累规律各异,皂苷和黄酮的积累可能存在着间接竞争关系;除传统利用果皮部位,花和叶也是积累皂苷和黄酮的主要器官,具有一定的应用价值,建议合理采收及开发利用。