HCV基因分型与血清分型相关性的研究

目的 探讨HCV血清分型和基因分型的相关性及临床意义。方法 HCV血清学分型应用ELISA法；HCV基因分型应用型特异性PCR法。结果 1．血清学分型率为52．38％（88／168），其中血清1型阳性率为48．86％（43／88），血清2型阳性率为34．09％（30／88），血清（1＋2）混合型阳性率为17．04％（15／88）。基因分型率为54．17％（91／168），其中基因Ⅱ型阳性率51．64％（47／91），基因Ⅲ型阳性率为31．86％（29／91），基因（Ⅱ＋Ⅲ）混合型阳性率为16．48％（15／91）。结论 兰州地区HCV以血清1型即基因Ⅱ型为主，其次是血清2型即基因Ⅲ型以及血清（1＋2）型即基因（Ⅱ＋Ⅲ）型。     

慢性丙型肝炎患者HCV基因分型研究

我国是丙型肝炎的高发地区。自然人群中丙型肝炎病毒（HCV）感染率为0.7%~3.1%。作者对兰州市部分人群调查健康人群HCV感染率为4.4%。HCV感染虽不如HBV感染常见，但是HCV感染更容易引起慢性化，并在肝硬化和肝癌的发生发展中起作用。HCV基因型的地理分布差异较大。目前人们对不同基因型感染致病机理和临床意义的研究还较少，为不断积累我国HCV基因分型地区性分布资料，了解本地区HCV基因型的分布特点，我们对慢性丙型肝炎患者血清进行了HCV基因分型研究。1 材料与方法1.1 研究对象1996年6月—1999年12月我院传染科住院和门诊的慢…     

二硫键寡核苷酸Microarray用于丙型肝炎病毒检测及HCV1b分型的研究

利用二硫键法制作寡核苷酸DNA Microarray,并将该技术应用到HCV检测中,建立了一种快速、灵敏、安全的寡核苷酸DNA Microarray丙肝病毒检测体系。该体系还可同时对占中国丙肝病毒75％左右的HCV1b亚型进行分型。另外,在丙肝病毒基因组RNA反转录的过程中采用随机引物,从而为进一步的多种肝炎病毒的寡核苷酸DNA Microarray混合检测奠定了基础。     

不同因素HCV结构区基因重组诱发小鼠产生抗体的影响

目的：寻求ＨＣＶ基因免疫的最佳动物实验方法,探讨不同处理因素对基因重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１诱发小鼠产生抗体的影响。方法：用分子生物学技术构建丙型肝炎病毒基因重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１,采用不同免疫次数、途径、剂量和不同处理方法免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠。结果：重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１经肌肉１、２、３和４次免疫小鼠后（１００μｇ／只,ｎ＝１２）,抗体水平分别为０．１８３±０．００６、０．４２８±０．０５、０．７０     

HCV非结构基因NS5分子生物学研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因5(NSS)区是RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)及一种磷蛋白的编码区,与HCV的复制、致病及抗药性关系密切。就HCV NS5区有关的分子生物学研究进展进行了综述。     

HCV不同基因型对慢性丙型肝炎抗病毒治疗疗效的影响

目的探讨干扰素联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎患者临床疗效的相关影响因素.方法对110例慢性丙型肝炎患者进行PEG-IFNα-2a 180μg/周联合RBV 800~1200 mg/d的标准治疗,并完成治疗后24周随访,同时分析HCV基因型、HCV-RNA定量对持续病毒学应答(SVR)的影响.应用罗氏试剂检测丙肝病毒定量,应用反转录-套式聚合酶链反应(PT-PCR)法检测HCV基因型.结果在110例进行标准联合治疗、并完成治疗后24周随访的慢性丙型肝炎患者中,68例患者获得SVR.其中,HCV基因1b型感染者SVR率为51.4%(37/72),HCV基因N-1b型感染者SVR率为81.5%(31/38);基线HCV-RNA水平1.0×10~5IU/m L的患者SVR率为71.2%(42/59),基线HCV-RNA水平≥1.0×10~5IU/m L的患者SVR率为50.9%(26/51).结论非1b基因型SVR率高于1b基因型;基线低病毒RNA水平(血清HCV-RNA水平1.0×10~5IU/m L)SVR率高于基线高病毒RNA水平(血清HCV-RNA水平≥1.0×10~5IU/m L).     

戊型肝炎病毒基因分型的研究进展

戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)是一种能引起急性、自限性病毒性肝炎的RNA病毒.主要经粪-口、血液等途径传播,常引起暴发性流行,或呈散发性流行.目前,HEV基因型分型不明确,给戊型肝炎的诊断、预防、流行病学调查及交流造成了一定困难.文章综述了戊型肝炎病毒基因分型的研究进展,目的是为HEV的研究奠定基础.     

ARMS实时PCR基因分型特异性的研究

以原癌基因K-ras基因12位密码子的4种基因型(野生型为GGT,突变型为AGT、TGT、CGT)质粒DNA为研究模型,采用SYBR GreenⅠ为实时PCR指示剂,进行ARMS实时PCR基因分型特异性的研究.结果表明在和模板匹配的ARMS引物3′端附近引入故意错配碱基,将ARMS引物浓度稀释10倍,并对传统三步PCR循环进行改良,即根据目的产物和引物二聚体的熔点差异,在传统延伸步骤之后增加一步恒温80℃检测荧光步骤,可消除引物二聚体的影响,使ARMS引物的特异性增强,得到清晰的基因分型结果.实验表明这种基于SYBR GreenⅠ的ARMS实时PCR基因分型方法,无需合成探针,实验设计简单,是一种快速、简便、经济、特异性好的基因分型方法,可推广用于其他基因的分型,并可望成为应用于临床的基因诊断技术之一.     

SDS在HCV基因工程抗原包被中的应用研究

在间接ELISA法检测HCV抗体过程中,通过使用含有十二烷基硫酸钠（SDS）的包被液对HCV基因工程抗原固相化,发现使用SDS提高了HCV间接ELISA法诊断试剂检测的阳性标本和阴性标本的偏比,改善了反应模式,为改善HCV-ELISA法诊断试剂的质量提供了有效途径.     

地高辛掺入法检测HCV RNA含量在肝病诊断中的应用

目的：研究血清HCVRNA含量与HCV感染者肝病程度的关系。方法：应用地高辛掺入法检测血清HCVRNA含量。在PCR过程中将DIG－dUTP掺入到PCR产物中去，再用PCRELISA法检测PCR产物，结合标准参考样本而达定量目的。结果：丙肝后肝硬化组血清HCVRNA含量显著高于丙型肝炎组。结论：地高辛掺入法检测血清HCVRNA含量可以为HCV感染者的病情判断提供科学依据。     

丙型肝炎病毒抗体快速诊断试剂的方法学研究

通过将抗原片段用点膜仪固相在硝酸纤维素膜上,依次加入标本、生物素标记的IgG、链霉亲和素-碱性磷酸酶,最后加底物显色,建立一种快速、敏感、实用的丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)检测方法.结果表明,整个检测过程仅需15～25 min,操作简便,已通过"第3代ELISA抗-HCV诊断试剂国家参考品".该方法简便、快速,结果易判断,既有ELISA的特异性和灵敏性,又有金标记法的检测速度;既适合输血筛查实验,又适合临床常规检查.     

广西肝细胞癌与丙型肝炎的关系

用４种抗丙型肝炎病毒蛋白的单克隆抗体，免疫酶染色法直接检测肝细胞癌的病理组织中丙肝病毒蛋白。结果８／５２例（１５．４％），一至数种抗体阳性，阳性反应物主要定位于肝和癌细胞的胞浆中，值得注意的是本组几乎全部病例为乙肝，丙肝两种病毒混合感染，表明广西丙型肝炎的混合感染的比较高，乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）加上黄曲霉毒素（ＡＦＢ１）或丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）可能是广西肝细胞癌（ＨＣＣ）高发的原因。     

分支DNA探针法检测21例丙型肝炎血清病毒RNA

目前主要依赖检测丙型肝炎抗体来确定对丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)感染的诊断,但它不能反应机体是否有活动的病毒血症。分支DNA探针法应用合成的DNA分子与靶HCV—RNA特异性的杂交,形成RNA—DNA杂交体,用dioxetane作为底物与化学发光物结合,通过测定其发光强度可直接检测血清HCV—RNA的含量。本文测定21例慢性活动性丙型肝炎血清。HCV—RNA最低值为0.66Meg/ml;最高值为58Meg/ml,21例中86％的数值分布在0.66Meg/m-12Meg/ml的范围内。此方法cutoff值为0.5Meg//ml。我们所测定的21例均高于cutoff值。此方法操作简便,特异性强。为临床丙型肝炎治疗的监测及疗效的判断提供了重要的依据。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3/4A的研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3共有631个氨基酸组成,具有丝氨酸蛋白酶、三磷酸核苷酶(NTpase)和螺旋酶(Helicase)的功能,在HCV多聚蛋白的成熟和病毒复制过程中发挥着重要作用.非结构蛋白NS4A,其主要功能就是作为NS3丝氨酸蛋白酶的辅助因子,在HCV多氨酸成熟过程中发挥着不可替代的调节作用.此外,NS3/4A还参与NS5A的超磷酸化修饰过程.     

单胺氧化酶活性分析在HBV感染者中的应用

目的分析乙肝病毒(HBV)感染者血清单胺氧化酶活性,研究其临床应用价值.方法应用终点比色法检测血清单胺氧化酶(MAO)活性;ELISA法检测乙肝病毒标志物;PCR法检测HBv DNA;常规方法检测ALT.结果 ALT异常组,大三阳HBsAg(+),HBeAg(+),Anti-HBc(+)和小三阳HBsAg(+),Anti-HBe(+),Anti-HBc(+)合并HBV DNA阳性的HBV感染者MAO显著升高,而小三阳并HBV DNA阴性者MAO升高不明显;ALT正常组仅40例大三阳患者MAO升高明显,其他各组MAO大多在正常范围内.结论 HBV感染后,只要有病毒复制,就会破坏肝细胞,引起MAO升高.MAO活性分析对肝脏病情的判断有重要价值.     

暴发性鸭瘟的诊断

通过对四川德阳地区某养殖场的发病种鸭的流行病学调查，临床观察。病理剖检。病原分离及聚合酶链式反应确诊该养殖场鸭群暴发鸭瘟：并针对其场地的具体情况提出了相应的防疫建议。