静息细胞培养系统中葡萄糖氧化酶及过氧化氢酶的生物合成

黑曲霉发酵生产葡萄糖氧化酶（ＧＯＤ）及过氧化氢酶（ＣＡＴ）受许多因素的影响［１］．弄清楚这些因素究竟是直接对酶的生物合成起作用,还是通过影响细胞的生长,间接对酶合成起作用,用发酵法是难以判断的;但是研究清楚这些因素的可能机制,对指导该酶的发酵生产及研...     

葡萄糖氧化酶-过氧化氢酶共固定研究

以弱碱性阴离子交换树脂D301T为载体,对过氧化氢酶（CAT）和葡萄糖氧化酶（GOD）两种酶进行分次固定,并对固定化条件进行了优化。所得最佳工艺条件为：共固定化酶采用先固定CAT,再固定GOD的顺序进行,其中CAT 0.5 mL,GOD 0.25 mL。所得CAT蛋白结合量为1.07 mg/g,固定化效率为46.71%;GOD蛋白结合量为1.58 mg/g,固定化效率为43.62%;每mL GOD酶液的表观酶活为47.98 U/mL,每g载体中GOD的酶活为12.0 U/g。以戊二醛作为交联剂,体积分数取0.5%,交联时间取15 min时,所得固定化酶表观酶活达到最大值,为14.66 U/g,固定化酶连续反应10批后,其酶活为初始值的85.3%,显示出固定化酶具有良好的操作稳定性。     

聚乙烯醇-海藻酸钠共固定化葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶

酶的固定化是提高酶的稳定及降低使用成本的重要途径．通过制备聚乙烯醇(PVA)-海藻酸钠(SA)复合载体,对共固定化葡萄糖氧化酶(GOD)和过氧化氢酶(CAT)的条件进行了研究,优化了固定化酶制备工艺,研究了固定化酶性质．得出制备固定化酶最佳条件为：载体比例 PVA∶SA＝9．0∶1．5,加酶量10 mg/mL,酶活之比CAT∶GOD＝10∶1．固定化酶的最适反应温度为45℃,比游离酶提高了5℃,最适反应pH 没有发生变化,连续使用6次酶活保留60％．研究结果有一定的应用潜力．     

金属离子对过氧化氢酶的生物合成的影响

过氧化氢酶（ＥＣ１１１１６）是铁卟啉酶,其活性中心是血红素,能分解Ｈ２Ｏ２成Ｈ２Ｏ和Ｏ２．其最广泛的用途是作为抗微生物剂而用于食品加工中;其最常用的来源为动物和黑曲霉．在以前的有关产酶条件优化的文献中,过氧化氢酶基本上都是作为葡萄糖氧化酶的附...     

发酵代谢物对葡萄糖氧化酶生物合成的影响

用膜透析技术和静息细胞系统，对影响葡萄糖氧化酶（ＧＯＤ）发酵的控制因素进行了研究。静息细胞系统显示：鸟氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸和胱氨酸等氨基酸对ＧＯＤ的合成有促进作用；葡萄糖酸和丙酮酸对ＧＯＤ的合成有阻遏作用，１．５ｍｍｏｌ／Ｌ的丙酮酸使酶活降低４６．２４％；２０ｍｍｏｌ／Ｌ的葡萄糖酸使酶活降低２１％左右，但葡萄糖酸浓度增大，有被菌体作为碳源利用的可能。利用膜透析技术可除去部分发酵过程中产生的葡萄糖酸和丙酮酸等阻遏物，减少它们对ＧＯＤ合成的分解代谢物的阻遏作用，与分批发酵相比．提高酶活４０％左右。     

简述葡萄糖氧化酶

本文介绍了葡萄糖氧化酶的一般性质、分离纯化方法、活力测定法和应用。     

青霉葡萄糖氧化酶的分离纯化及性质研究

从青霉(Penicillium amagasakiense)发酵液中分离纯化葡萄糖氧化酶(简称GOD),通过DEAE-32离子交换柱层析、Sephacryl S-200分子筛凝胶过滤柱层析纯化,获得比活力为472 U/mg电泳单一纯酶制剂,采用SDS-PAGE电泳,表明该酶含有两个同型的亚基,分子量为150 ku.酶学性质研究表明:该酶催化葡萄糖氧化酶反应的最适pH为5.6,最适温度为40℃.酶的热稳定性研究表明:该酶在pH 5.5～8.5区间和温度低于50℃下稳定.金属离子对酶活力的影响表明:Na+、K+、Ca2+、Pb2+、Mn2+等对酶活力基本没有影响;Al3+、Zn2+对酶有一定的激活作用;Ag+、Hg2+、Mg2+、Cd2+、Cu2+、Co2+等对该酶活力有不同程度的抑制作用.该酶以葡萄糖为底物的米氏常数Km值为122.6 mmol/L,Vm为25.52 μmol/(L·min)(pH 7.0,37℃).     

麻疯树过氧化氢酶的分离纯化

麻疯树种仁经抽提、硫酸铵盐析、Phenyl Sepharose CL-4B层析、DEAE-Sepharose F.F.层析,获得了纯化的麻疯树过氧化氢酶(CAT).该酶比活力为69.23 U/mg,纯化倍数为37.63倍.经Sephacryl S-300 HR测定,该酶表观分子量为232 kD,SDS-PAGE显示为一条分子量为59 kD的条带,表明该酶是由四个相同的分子量为59 kD的亚基组成.经等电聚焦测定该酶的等电点为4.7.经过温度和pH考察,该酶最适温度为30℃,最适pH为7.0.Mn~(2+)对酶活有促进作用,Zn~(2+)、Cd~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)、Co~(2+)有抑制作用.6×10~(-3)mmol/L NaN_3以及0.9 mmol/L KCN能使酶活丧失.该酶的V_(max)和K_m分别为5 U/mL·min,1.5 mmol/L.     

氯化血红素作为过氧化氢模拟酶制备高纯度低聚果糖

为了探索以树脂作为载体、以戊二醛作为交联剂制备的固定化血红素作为过氧化氢酶模拟酶,用于制备高纯度低聚果糖,以1.0 g树脂在0.05%(W/V)戊二醛溶液中与10 mg氯化血红素交联,在35℃下反应8 h,可得到53 U/g的固定化血红素作为过氧化氢模拟酶,然后以3.5 g(185 U)固定化血红素、2.0 g(160 U)固定化果糖基转移酶和2.5 g(100 U)固定化葡萄糖氧化酶作用于250 mL 20%(W/V)的蔗糖溶液,结果表明,反应24 h后得到含量>80%的高纯度低聚果糖。实验证明,氯化血红素可以作为过氧化氢模拟酶,用于高纯度低聚果糖的制备,明显降低低聚果糖的生产成本。     

锰过氧化氢酶及其模拟物的研究进展

在化学生物模拟物体系中,含锰金属酶的研究是近年来比较活跃的领域之一,因其可快速、无污染的除去H2O2,而受到化学研究者的青睐.在此,依据连接两个锰离子的桥,以及中心锰离子的个数不同对锰过氧化氢酶模拟物的结构以及活性进行比较分析.     

蚯蚓过氧化氢酶的纯化及性质

赤子爱到胜蚓组织匀浆抽提液经硫酸铵盐析、透析浓缩后，用大柱制备电泳纯经得到两个过氧化氢酶，均为糖蛋白，Ｍｒ分别为３９００００、４０００００。用氧电极法测 得后者的表观Ｋｍ值为１４３ｍＭ，最适ＰＨ值８．０左右。     

过氧化氢酶固定化方法的改进

报道通过更换烷基化试剂,即用三乙基氧■四氟化硼代替硫酸二甲酯,使固定化过氧化氢酶膜的性能有了很大的改善．     

黑曲霉中提取葡萄糖氧化酶的探索：I.葡萄糖氧化酶合成及 …

多次筛选培育获得含有较高活力葡萄糖氧化酶的黑曲霉菌株ＺＢＹ－７，在原有培养基条件的基础上，研究了培养时间，培养温度，ｐＨ，中和剂的浓度对生产葡萄糖氧化酶影响，并进一步对细胞浸出液的葡萄糖氧化酶性质进行了研究，实验结果表明，胞外葡萄糖氧化酶含量远远低于胞内酶。     

紫杉醇生物合成途径及其相关酶的研究进展

紫杉醇的生物合成过程已基本阐明,其合成以NB028牛儿基NB028牛儿基二磷酸为前体约需20步酶促反应,近一半的相关酶基因已得到克隆与表达.综述了紫杉醇生物合成及生物合成途径中9个酶基因的克隆和表达方面的研究进展,并指出随着紫杉醇生物合成分子生物学研究的不断深入,利用分子生物技术大规模生产紫杉醇将为期不远.     

葡萄糖氧化酶基因的克隆及其在转基因烟草中的表达

通过PCR扩增,克隆了黑曲霉编码葡萄糖氧化酶的GO基因.构建了CaMV35S启动子驱动的GO基因植物表达载体,经农杆菌介导的遗传转化,获得了转基因烟草植株.经Southern,Northern和Western杂交分析,证明了GO基因在转基因烟草中的整合、转录和翻译.转基因烟草中H2O2的含量最高可达610μmol/L,比对照提高近5倍.嫁接试验证实H2O2可由砧木远距离运输至接穗,但不能由接穗转运至砧木,说明H2O2是通过导管由下向上运输.非转基因接穗嫁接至转基因砧木上3周,接穗上不同节位叶片中H2O2的含量不存在浓度梯度,说明这是一种主动运输而不是被动扩散.     

超声波对过氧化氢酶酶活影响的机理

为了解超声波对微生物抗氧化酶类防御体系的影响机制,以过氧化氢酶(CAT)为对象,研究了不同超声波条件对CAT酶活的影响,同时采用红外光谱分析无超声作用和超声作用后CAT二级结构的变化。结果表明:CAT酶活随着超声波功率增大而降低,延长超声时间对CAT酶活影响不大;超声作用下CAT的稳定温度和pH值分别为37℃和7.4;经超声波处理后的CAT的动力学参数Km和Vmax值变大,且二级结构由有序向无序转变.     

亚铁配合物模拟过氧化氢酶研究

应用碘化钾显色和紫外可见分光光度法，在２０℃下研究了亚铁－组氨酸配合物与亚铁－三乙烯四胺模拟过氧化氢酶催化过氧化氢分解反应。提出了一种金属配合物催化的数学模型。计算结果表明，金属离子的恰当配位体的络合作用，对得得良好催化性能的金属配合物很重要。     

黑曲霉中提取葡萄糖氧化酶的探索 Ⅰ.葡萄糖氧化酶合成及其性质

多次筛选培育获得含有较高活力葡萄糖氧化酶的黑曲霉菌株ＺＢＹ－７,在原有培养基条件的基础上,研究了培养时间、培养温度、ｐＨ、中和剂的浓度对生产葡萄糖氧化酶影响．并进一步对细胞浸出液的葡萄糖氧化酶性质进行研究．实验结果表明：胞外葡萄糖氧化酶含量远远低于胞内酶．