两昆虫杆状病毒诱导的细胞凋亡

首次发现粉纹夜蛾多粒包埋核多角体病毒和中国棉铃虫单粒包埋核多角体病毒分别诱导斜纹夜蛾细胞Ｓｌ－ｚｓｕ－１和纹夜蛾细胞Ｔｎ－５Ｂ１－４发生典型的细胞凋亡。     

昆虫细胞低血清和无血清培养基的研究

昆虫细胞低血清和无血清培养基均为ＴＣ－１００和ＴＣ－１９９－ＭＫ培养基混合液为基础液，补加微量元素，适量的维生素、甘油、肌苷等成份，研究结果表明：两种培养基均能支持小菜蛾细胞的生长和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒在其中复制。     

凋亡抑制基因p35对杆状病毒增殖的影响

以野生型苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒和多角体基因缺失的ＡｃＮＰＶ分别感染Ｓｆ９－３５细胞,研究了ｐ３５的稳定表达对杆状病毒增殖的影响。     

球孢白僵菌毒素对昆虫体外培养细胞胞内同功酶和代…

用吸附法从珠孢白僵菌的代谢产物中提取毒素，并将毒素作用于草地夜蛾体外培养细胞，以研究球孢白僵菌的昆虫致病机理，同功酶特异性染色结果表明，细胞中毒后，细胞内的乳酸胶氢酶，苹果酸脱氢酶，酯酶等同功酶在种类和含量上有所减少。并发现其细胞代谢紊乱，当毒素质量浓度在０－５００ｍｇ．Ｌ＾－１时，培养液中的葡萄糖和蛋白的质量浓度随细胞中毒加深而升高。     

球孢白僵菌毒素对昆虫体外培养细胞的超微结构和细？…

用吸附法从球孢白僵菌的代谢产物中提取毒素，并将毒素作用于草地夜蛾体外培养细胞Ｓｆ－２１细胞株，以研究球孢白僵菌毒素的昆虫致病机理，扫描和透射电镜观察结果表明，在毒素作用下，培养细胞的细胞膜，细胞核，线粒体和核糖体均有很大程度的损伤。     

草地贪夜蛾（Spodoptera furgiperda）在生物反应器中 …

对草地贪夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒａｇｉｐｅｒｄａ）Ｓｆ－９细胞在２－Ｌ Ｂｉｏｓｔａｔ＾Ｒ ＭＤ型搅拌式生物反应器中进行了培养,并对细胞的生长状况、葡萄糖的消耗进行了测定;对重组病毒的增殖、外源基因的表达进行了初步。结果表明：细胞在该生物反应器中生长良好,细胞群体倍增时间３３．４ｈ病毒感染率大约在８９．８％以上,并在细胞中成功地了半乳糖苷酶原因。     

人粒细胞集落刺激因子在昆虫细胞中的表达

利用苜蓿尺核型多角 体病带β－Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ基因标志的非融合蛋白基因转移载体ｐＢＢ成功地构了重组杆状病毒ＡｃＮＰＶ－Ｇ－ＣＳＦ．在感染重组病毒的草地夜蛾细胞中ｈＧ－ＣＳＦ得到了高效表达。表达产物由ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检出，其分子量约为１９ＫＤａ。     

甘蓝夜蛾性信息素的合成

以四氢康醇为原料合成了甘蓝夜蛾的性信息系组分顺及反－１１－十六碳稀基乙酸酯。     

大肠杆菌β－半乳糖苷酶基因在小菜蛾细胞中的表达

用携带大肠杆菌β－半乳糖苷酶（β－ｇａｌ）基因的杆状病毒转移载体．ｐＡｃ３６０－β－ｇａｌ与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ经钙磷沉淀法共转染小菜蛾细胞系（ＢＣＩＲＬ－ＰＸ２－ＨＮＵ２,Ｐｘ）,利用Ｘ－ｇａｌ空斑检测分析,β－ｇａｌ基因成功地插入ＡｃＮＰＶ基因组中,得到重组病毒Ａｃ－β－ｇａｌ,重组病毒在Ｐｘ细胞中表达出受ＡｃＮＰＶ多角体蛋白基因启动子控制的具有生物活性的外源基因表达产物──β－ｇａｌ．     

斜纹夜蛾传代细胞系的建立及病毒感染研究

以斜纹夜蛾卵建立ZSU-SL-1细胞株,细胞形态以球形及纺锤形为主,染色体数为56～260,多数细胞为多倍体,经20℃和27℃的生长曲线测定,细胞加倍时间为100～144小时.本细胞株对斜纹夜蛾和粉纹夜蛾两者的核型多角体病毒敏感.     

球孢白僵菌毒素对昆虫体外培养细胞胞内同功酶和代谢水平的影响

用吸附法从球孢白僵菌（Beauveriabassiana）的代谢产物中提取毒素，并将毒素作用于草地夜蛾（Spodopterafrugiperda）体外培养细胞，以研究球孢白僵菌的昆虫致病机理．同功酶特异性染色结果表明，细胞中毒后，细胞内的乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、酯酶等同功酶在种类和含量上都有所减少．并发现其细胞代谢紊乱，当毒素质量浓度在0～500mg·L(－1)时，培养液中的葡萄糖和蛋白的质量浓度均随细胞中毒加深而升高．     

PI3K-Akt和JNK信号通路抑制剂对杆状病毒诱导昆虫细胞凋亡影响的初步研究

为了探讨杆状病毒诱导昆虫细胞凋亡通路与细胞内PI3K-Akt和JNK信号通路的关系,应用PI3K的特异性抑制剂Wortmannin和JNK的特异性抑制剂SP600125处理芹菜夜蛾核型多角体病毒(AfMNPV)感染的斜纹夜蛾SL-1细胞,研究了这些抑制剂对杆状病毒诱导昆虫细胞凋亡的影响.分别使用浓度梯度2.5,25,50μmol的SP600125和0.3,3,30μmol的Wortmannin处理感染了SfaMNPV的SL-1细胞,24h后进光镜观察、DAPI荧光染色,流式细胞术分析显示,抑制PI3K-Akt和JNK信号通路后杆状病毒诱导的细胞凋亡受到明显影响,细胞凋亡水平明显降低.研究结果提示AfMNPV诱导斜纹夜蛾SL-1细胞凋亡过程可能涉及细胞PI3K-Akt和JNK信号通路.     

斜纹夜蛾微孢子虫在昆虫细胞系的体外培养

以受斜纹夜蛾微孢子虫(Nosema sp.)感染的斜纹夜蛾幼虫血淋巴感染草地贪夜蛾传代细胞系,建立了感染斜纹夜蛾微孢子虫的体外传代细胞.以这种体外细胞培养试验证明,斜纹夜蛾微孢子虫不能在37℃下发育,最适发育温度为25℃.用光学显微镜及电子显微镜的研究证明,斜纹夜蛾微孢子虫整个生活周期都以一对双核存在,母孢子以二分裂形成两个孢子母细胞;孢子具有一对双核的孢质、极管及极质体;极管为12～13圈,为典型的微粒子属.     

人α－干扰素基因在小菜蛾细胞中的表达及其影响因素探讨

将含有人α－干扰素（ＩＦＮα）基因的杆状病毒转移载体（ｐＡｃ３７３－ＩＦＮα）与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ经钙磷沉淀法共转染小菜蛾细胞系（ＢＣＩＲＬ－Ｐｘ２－ＨＮＵ３,Ｐｘ）,空斑纯化后,利用细胞致病效应（ＣＰＥ）抑制法检测得到了干扰素效价（６８７２．６ＩＵ）,证明得到了可以在Ｐｘ细胞中表达ＩＦＮα的重组病毒（Ａｃ－ＩＦＮα）．并探讨了培养温度和血清浓度对ＩＦＮα表达水平的影响,结果表明：在２８℃时,培养基中补加２％的小牛血清,可获得最高的ＩＦＮα效价（１７４３５．９ＩＵ）．     

球孢白僵菌毒素对昆虫体外培养细胞的超微结构和细胞内总蛋白的影响

用吸附法从球抱白鹰菌（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ　ｂａｓｓｉａｎａ）的代谢产物中提取毒素,并将毒素作用于草地夜蛾（Ｓｐａｏｄｏｐｔｅｒａ　ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）体外培养细胞Ｓｆ－２１细胞株,以研究球抱白僵菌毒素的昆虫致病机理．扫描和透射电镜观察结果表明,在毒素作用下,培养细胞的细胞膜、细胞核、线粒体和核糖体均有很大程度的损伤．聚丙烯酸胺凝胶电泳结果表明,其细胞内总蛋白的种类和含量均有所改变,进一步证明,细胞完整结构的破坏导致了细胞内物质环境稳定性的破坏．     

斜纹夜蛾核多角体病毒诱导甜菜夜蛾细胞凋亡的研究

 斜纹夜蛾核多角体病毒（Spodoptera litura multiple nucleopolyhedrovirus, Splt MNPV）不能成功感染亲缘关系相近的甜菜夜蛾Spodoptera exigua,为了探究其中原因,取Splt MNPV感染甜菜夜蛾离体细胞Se301,利用光学显微镜,电子显微镜以及DAPI(4′,6-Diamidine 2′ phenylindole dihydrochloride)荧光染色等方法对其进行检测。结果显示Se301细胞被Splt MNPV感染后出现早期凋亡特征,但未进行至细胞凋亡晚期形成凋亡小体;病毒感染受到阻碍,始终没有病毒多角体和有感染性的芽生型子代病毒产生;综合以上结果说明早期细胞凋亡仍然是限制病毒完成复制周期的重要因素。     

斜纹夜蛾前胸腺的生长发育研究

 通过解剖观察4龄至蛹期斜纹夜蛾前胸腺,对其形态特点和生长发育规律进行了研究,主要结果如下：发现斜纹夜蛾前胸腺由53个左右的圆形或椭圆型细胞成串组成,Y型,成对,外围包裹一层透明鞘膜,位于胸部第一气门的气管丛内;在斜纹夜蛾4龄到蛹期的发育过程中,前胸腺不发生有丝分裂,细胞数量基本恒定;前胸腺细胞直径在幼虫发育期间不断增大,斜纹夜蛾幼虫在4龄第1天的前胸腺直径为(28.80±0.47) μm,而到了6龄末期,则增加到(92.22±2.43) μm;幼虫期的斜纹夜蛾前胸腺细胞直径和虫体体质量呈显著相关,r=0.826,P=0.000,拟合曲线方程为Y=82.1X ^0.263;此外,幼虫期的斜纹夜蛾前胸腺细胞直径和虫体体长也呈现出显著相关,r=0.886,P=0.000,拟合曲线方程： Y=e^{(4.781-1.863/Z)}。     

人M-CSF与SCF融合蛋白的构建及其在昆虫细胞中的表达

应用重组DNA技术构建M-CSF与SCF的融合基因并将其克隆于昆虫杆状病毒转移载体pVL1392中,通过与野生型苜蓿夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)DNA共转染草地夜蛾细胞Sf9,融合基因插入AcNPV基因组.重组病毒感染单层Sf9细胞后,表达产物分泌到胞外培养液中,用MTT比色法和TF-1细胞株可检测到表达产物与IL-3的协同效应.上述研究为开发具有应用价值的新型细胞融合因子奠定了基础.     

S1NPV对斜纹夜蛾幼虫的侵染阈值

斜纹夜蛾核型多角体病毒对斜纹夜蛾幼虫的侵染阈值因温度和虫龄而异，早龄愈大，温度愈高，则侵染阈值也大。在２０－４０℃内，３龄幼虫的侵染阈值为９０９０．９－６６６６６６．７ＰＩＢ头，５龄幼 虫为１３１５７８．９－７１４２８５．７ＰＩＢｓ／头。温度升高，各龄幼虫的侵染阈值差异逐渐减小，接种量为２×１０＾６ＰＩＢｓ／头左右及高于２×１０＾７ＰＩＢｓ／头时，Ｓ１ＮＰＶ自身似有一定的协生作用和拮抗作用。     

苏云金芽孢杆菌新分离株S_(11-11)δ-内毒素基因在Btk.BE_(20)中的克隆和表达

用对鳞翅目夜蛾科幼虫有很强毒杀作用的土壤新分离株Ｓ１１－１１为δ－内毒素基因的供体菌,以穿梭质粒ＰＨＴ３１０１为载体,用ＰｓｔⅠ和ＥｃｏＲⅠ分别对供体和载体ＤＮＡ作双酶切,并将酶切片段用Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接,用电激法将重组ＤＮＡ转入苏云金芽孢杆菌无晶体突变株Ｂｔｋ．ＢＥ２０中,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳及扫描电镜观察证明：δ－内毒素基因在Ｂｔｋ．ＢＥ２０中得到表达,并具有较高的表达量．生物测定表明,重组株对夜蛾科幼虫具有较高的毒性．此外,对质粒提取的方法也进行了讨论．