川滇琼地区麻疯树种子核糖体失活蛋白资源调查

本研究对西昌、攀枝花、仁里、海口、三亚、东方六地的麻疯树种子进行资源调查研究,结果显示六个地区麻疯树种子胚乳核糖体失活蛋白含量均值为1.8770~2.5602mg/g,由高到低依次为西昌、三亚、海口、仁里、攀枝花、东方,且地区间差异较大.各地区内部种子胚乳核糖体失活蛋白含量数据分析显示,仁里地区种子胚乳核糖体失活蛋白含量变异系数最大,为14.6189;海口地区的变异系数最小,为7.1876.麻疯树种子性状相关性分析结果显示胚乳核糖体失活蛋白含量与百粒重、出仁率值在0.01水平上没有相关性,与含油率相关性不显著,与可溶性蛋白含量在0.01水平上低度负相关.综合各项指标认为西昌地区的麻疯树种子核糖体失活蛋白含量较高,可作为现阶段核糖体失活蛋白应用的材料来源之一.     

一种快速微量的非放射性核糖体失活蛋白活性检测方法

建立了一种非放射性的利用兔网织红细胞裂解液（Rabbit Reticulocyte Lysate）无细胞翻译系统和荧光素酶检测系统（Luciferase Assay System）的核糖体失活蛋白检测方法，快速检测了两种方法提取的麻疯树核糖体失活蛋白（RIPs）Curcin的无细胞蛋白质翻译抑制活性，测得离子交换层析法纯化Curcin的IC50＝0.045±0.009nmol/L，分子筛层析纯化Curcin的IC50＝0.217±0.026nmol/L；该方法避免了放射性同位素的使用，使检测过程简便、快速     

麻疯树核糖体失活蛋白curcin基因的原核表达及其抗真菌活性的研究

通过PCR方法,将麻疯树核糖体失活蛋白curcin的开放阅读框片段从麻疯树总DNA中扩增出来.并将该克隆基因片段连接到原核表达载体pQE-30中,成功构建了重组质粒pQE-C,转化大肠杆菌M15菌株.经IPTG诱导后,curcin重组蛋白在大肠杆菌中成功表达.然后通过纯化原核表达产物,得到纯化的curcin重组蛋白,并以纸片法进行体外抗菌活性检测,发现其具有较强抗真菌活性.     

麻疯树外植体愈伤组织中毒蛋白的Western-blot鉴定

麻疯树外植体愈伤组织中毒蛋白的Western blot鉴定戎　芳1,2,王胜华1,赵小光1,郭　亮1,魏　琴1,唐　琳1,徐　莺1,陈　放1, (1.四川大学生命科学学院,成都610064;2.安徽大学生命科学学院,合肥230039)麻疯树(JatrophacurcasL.)系大戟科麻疯树属植物,耐干旱贫瘠,抗病虫能力强[1,2],主要生长在热带和亚热带地区,在我国西南地区有丰富的资源.麻疯树种子对整体动物,如小白鼠[3]、羊[4]及人,特别是幼儿[5]表现出一定的毒性,且具有致死作用.麻疯树种子含毒成分主要是种子毒蛋白(curcin),该蛋白是一种单链核糖体失活蛋白,具抗癌活性[6],是一种具开…     

Curcin和curcin C与腺嘌呤互作位点的比较分析

麻疯树核糖体失活蛋白curcin和curcin C均具有抗肿瘤活性，但后者的活性水平显著高于前者，为了探索造成这一差异的结构基础，本文采用在线的同源建模预测软件SWISSMODEL，对两种麻疯树核糖体失活蛋白curcin、curcin C的三维结构模型进行预测，采用SYBYL对预测模型进行能量最小化优化，采用PROCHECK、VERIFY 3D和ERRAT软件对优化前后的模型进行质量评估，随后采用AutoDock软件将预测的模型与腺嘌呤进行分子对接分析.结果显示，两种蛋白采用与Ricin A类似的方式与腺嘌呤相互作用，但在相互作用的氨基酸残基种类、数量以及形成的氢键和疏水相互作用上还是存在差异，其中，curcin C与腺嘌呤具有最强的结合能力，curcin则最低.     

麻疯树外植体愈伤组织中毒蛋白的Westem-blot鉴定

麻疯树(Jatropha curcas L.)系大戟科麻疯树属植物，耐干旱贫瘠，抗病虫能力强，主要生长在热带和亚热带地区，在我国西南地区有丰富的资源．麻疯树种子对整体动物，如小白鼠、羊及人，特别是幼儿表现出一定的毒性，且具有致死作用，麻疯树种子含毒成分主要是种子毒蛋白(curcin)，该蛋白是一种单链核糖体失活蛋白，具抗癌活性，是一种具开发成为新型抗癌药物潜力的蛋白．本文报道用组织培养的方法，从胚乳愈伤组织中可以获得此毒蛋白，为以后毒蛋白的进一步开发应用提供一定的基础。     

两种麻疯树核糖体失活蛋白基因Curcin和Curcin C在种子萌发过程中的表达模式研究

为了研究和开发丰富的麻疯树资源,本研究以四川省西昌市金沙江干热河谷地区的麻疯树种子为材料,将种子浸水萌发后收集各组织用于实验。qRT-PCR结果显示胚乳中Curcin、Curcin C基因表达先增加后减少,在子叶中Curcin C基因的表达也是如此。Western Blot结果显示Curcin蛋白在根、下胚轴、真叶、子叶中不表达,Curcin C蛋白在根和下胚轴中也不表达,而在真叶、子叶中表达。生物信息学软件预测及亚细胞定位结果都显示Curcin:GFP和Curcin C:GFP融合蛋白定位在细胞壁上。本研究初步阐明了两种麻疯树核糖体失活蛋白Curcin、Curcin C的表达模式并对其进行了亚细胞定位。     

多效唑对水涝胁迫下麻疯树幼苗生理指标的影响

在1/1000质量浓度的多效唑（PP333）作用的水涝环境下测定麻疯树幼苗平均叶面积无明显增加并有较高的根冠比, 单水涝胁迫下的根冠比先升高后降低, 无胁迫组则始终呈下降趋势与预期相符. 水涝胁迫组的叶绿素含量先降低随后恢复到正常水平而另两组则变化甚微.实验中三组的超氧化物歧化酶（SOD）酶活一直下降而MDA含量一直上升.在8d的水涝胁迫下, 幼苗的过氧化物酶 (POD)、过氧化氢酶 (CAT)的活性先增加后降低变化显著.实验证明: 多效唑会明显减缓麻疯树幼苗长势, 但能使麻疯树幼苗各项生理指标的变化介于水涝组和对照组之间, 能提高抗氧化酶系酶活, 有缓解水涝胁迫的作用     

麻疯树萜醇Ⅰ的杀虫活性及其对菜粉蝶幼虫PKC活性的影响

研究了麻疯树萜醇Ⅰ对菜粉蝶幼虫的杀虫活性,并利用荧光标记多肽的非同位素检测方法首次检测了取食麻疯树萜醇Ⅰ对菜粉蝶幼虫中肠细胞内蛋白激酶C(PKC)活性的影响.结果显示:麻疯树萜醇Ⅰ对莱粉蝶幼虫无触杀活性,而具有明显的胃毒作用,处理后48h、72h和120h的LC_(50)分别为1.2753,0.8318和0.3991mg/mL.菜粉蝶幼虫对处理叶片的取食量显著少于对照组,24h和48h的拒食中浓度(AFC_(50))分别为0.3789mg/mL和0.5706mg/mL.取食麻疯树萜醇Ⅰ后,菜粉蝶幼虫体重增长显著被抑制.麻疯树萜醇Ⅰ对菜粉蝶幼虫中肠细胞内的PKC具有显著地激活作用,处理后PKC的活性逐渐上升,12h时活性为对照组的4.21倍.麻疯树萜醇Ⅰ对菜粉蝶幼虫中肠细胞PKC的激活从而导致的蛋白质磷酸化作用可能是其杀虫作用的重要机理.     

麻疯树雌雄花分化对4种外源激素的响应

为了探究激素对麻疯树Jatropha curcas L.花芽分化的影响,寻求诱导雌花分化的最佳激素及浓度处理,提高其雌雄比例,本文以4年生麻疯树为研究对象,采用4种可促雌分化的激素(IAA、6-BA、NAA、乙烯利)对花芽期的麻疯树进行诱导试验,确定对麻疯树雌花诱导效果最佳激素种类及浓度配比。4种激素对麻疯树都有一定的促雌分化效果,IAA最适浓度为60 mg/L,对麻疯树雌花的诱导率最高达70.97%;NAA最适浓度为60 mg/L,对麻疯树雌花诱导率最高达54.84%(主要是抑制雄花分化,提高其雌雄比);6-BA最适浓度为60 mg/L,对麻疯树雌花诱导率最高达20%;乙烯利最适浓度为1 440 mg/L,对麻疯树雌花诱导率最高达41.94%。经IAA处理后,麻疯树座果率高达98.83%,同时提高了种子质量,而种子含油率没有显著提高。综合分析比较,最终确定喷施浓度为60 mg/L的IAA是提高麻疯树雌雄比例最适宜的激素,其雌雄比为1∶12.0,坐果率49.96%。