SLC38A3抗体的制备及细胞内定位

从人胎肝cDNA文库中钓取得到SLC38A3全长cDNA序列.利用生物信息学方法对SLC38A3蛋白序列进行分析,根据亲水性、抗原性、柔韧性及表面性等指标选择一段多肽序列作为抗原用于抗体制备.将该片段克隆到pET-DsbA融合蛋白表达载体上,在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下产生SLC38A3抗原肽.纯化目的蛋白并制备兔抗SLC38A3蛋白的多克隆抗体.利用Western blot鉴定抗体特异性,并初步分析该蛋白在人肺癌细胞A549内的定位.结果显示,成功构建了SLC38A3片段的原核表达载体,在大肠杆菌中实现可溶性表达,制备了特异性较高的人SLC38A3蛋白多克隆抗体,并证实该蛋白表达于细胞质内.为进一步研究SLC38A3的生物学功能奠定了基础.     

人鼻病毒3C蛋白酶在大肠杆菌中的表达、纯化及活性分析

人鼻病毒3C蛋白酶具有高特异性,且在低温条件下具有较高酶活,目前已被商品化.在大肠杆菌中利用麦芽糖结合蛋白(MBP)作为融合标签可促进人鼻病毒3C蛋白酶的可溶性表达.将人鼻病毒3C蛋白酶的DNA编码序列克隆到pRK792载体上,然后导入到大肠杆菌BL21(DE3),进行诱导表达,获得MBP-LEVLFQGP-6x His-人鼻病毒3C蛋白酶融合蛋白,随后通过Ni柱亲和纯化获得目的蛋白.用该产物切割纯化的MBP-LEVLFQGP-6x His-木聚糖酶融合蛋白,可获得木聚糖酶并用底物平板检测其活性.实验结果表明人鼻病毒3C蛋白酶能够在大肠杆菌中表达,并且能特异性地在其底物识别序列进行切割,从而移除MBP标签,获得仅带有6x His的人鼻病毒3C蛋白酶.该酶可以特异性地去除木聚糖酶融合蛋白中的MBP标签,获得有活性的木聚糖酶.利用MBP标签能够促进人鼻病毒3C蛋白酶可溶性表达,且人鼻病毒3C蛋白酶的活性不受影响,有利于一些不稳定的蛋白在低温下的标签去除和纯化.     

大肠杆菌硫氧还蛋白thioredoxin基因的克隆及表达

以大肠杆菌XL1blue为模板，通过PCR技术扩增大肠杆菌硫氧还蛋白基因，并将目的基因分别连接到克隆载体pUC18和表达载体pTrcHisC上，构建重组质粒．重组质粒pTrcHisC-TRX在大肠杆菌中高效表达，最后利用固定化金属螫合亲和层析技术(IMAC)获得较纯的目的蛋白，为进一步研究硫氧还蛋白的功能及其应用提供了条件．     

构建的FIt3L胞外域原核表达载体在大肠杆菌中的表达

目的:构建含组氨酸标签的FMS样酪氨酸激酶3配体(Fms-like tyrosine kinase 3 ligand,FIt3L)胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达.方法:依据FIt3L基因序列设计引物,以RT-PCR的方法从小鼠脾脏总RNA中克隆FIt3L基因并构建其胞外域原核表达载体,测序鉴定后在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达,用免疫印迹鉴定.结果:克隆到FIt3L编码区全长序列,经DNA测序证明与已报道的序列相同;构建羧基端带有His6标签的FIt3L胞外域蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌后SDS-PAGE分析显示在BL21(ED3)中获得较高表达;免疫印迹分析表明IPTG诱导后表达的FIt3L胞外域蛋白的相对分子质量(Mr)为19 000,与理论值相符,此蛋白与抗His6标签的抗体发生特异性反应.结论:成功克隆FIt3L基因,构建其胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得表达.     

hIAPP与麦芽糖结合蛋白的融合表达、纯化和鉴定

基于人胰岛淀粉样多肽(h IAPP)的氨基酸序列,按照大肠杆菌(E.coli)密码子偏好性合成基因,并克隆到pMAL-c2x载体中,与MBP蛋白mal E基因融合表达,获得重组表达质粒pMAL-hIAPP.将质粒pMAL-hIAPP转化到表达宿主E. coli BL21(DE3)中,利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白MBP-hIAPP表达.SDS-PAGE电泳显示融合蛋白MBP-hIAPP的相对分子质量约为4.9×104.利用重组型烟草蚀纹病毒的半胱氨酸蛋白酶(rTEV)酶切MBP-hIAPP,并采用凝胶过滤层析的方法分离出高纯度的hIAPP,利用MALDI-TOF质谱进行了验证.     

2株甲型肝炎病毒(L8 株、H2株)蛋白酶2A在大肠杆菌中的表达

首次把生长特性有显著差异的 2株甲型肝病毒 (L8株、H2 株 )的蛋白酶 2A基因分别用基因工程技术克隆到大肠杆菌表达载体 pGEX -KG上 ,重组质粒转化至大肠杆菌 (E .coliBL - 2 1和DH5α)中 ,表达的结果显示 :2株甲型肝病毒的蛋白酶 2A均得以表达 ;表达量占菌体总蛋白 2 0 %以上 .为进一步纯化该蛋白酶、研究其生物学功能和与真核细胞代谢的关系奠定了基础 .     

人USP14蛋白在大肠杆菌中表达纯化的初步研究

采用PCR技术从人胎脑cDNA文库中克隆了usp14(ubiquitin-specific peptidase 14)基因编码区全长序列。序列分析表明人usp14基因含有peptidase蛋白酶C19A保守区,将usp14基因与pET-28b(+)载体相连,构建表达载体pET28b/usp14;把该表达载体转入大肠杆菌Rosetta(DE3)pLyS,以Isopropyl-D-thiogalactopyranoside(IPTG)诱导25°C 6小时,USP14蛋白获得高效表达。对表达产物进行Western blotting检测,并用Ni-NTA亲和层析技术获得了纯化的人USP14蛋白,表达的目的蛋白大小约为56kDa。     

长爪沙鼠CST3序列同源性分析及蛋白体外表达

目的 分析长爪沙鼠半胱氨酸蛋白酶抑制剂C (Cystatin C,CST3)cDNA序列同源性,并建立CST3蛋白原核表达体系,为长爪沙鼠CST3抗体制备和后续基因功能研究奠定基础。方法 对长爪沙鼠Cst3 cDNA序列进行克隆、同源性分析及密码子优化;将优化后序列酶切连接到pET28a载体,完成重组CST3蛋白表达载体构建;将该载体转化到感受态细胞中,通过异丙基硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-Thiogalactoside,IPTG)诱导实现CST3蛋白的原核表达,并用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证。结果 长爪沙鼠Cst3基因与人和小鼠Cst3基因的序列同源性较低。密码子优化后的长爪沙鼠Cst3表达序列插入到pET28a质粒中,获得了CST3蛋白表达载体。经1 mmol/L IPTG 37 ℃诱导12 h,可获得大量CST3蛋白。结论 成功地构建了长爪沙鼠CST3蛋白的体外表达体系。     

大肠杆菌酒石酸脱氢酶β亚基的克隆、表达、纯化及包涵体的复性

利用PCR技术从大肠杆菌BL21中获取酒石酸脱氢酶β亚基基因(TtdB),并将之克隆到质粒pUC18上,转化大肠杆菌DH5α细胞.经测序证明序列无误后,将之与表达载体pTrcHisC连接,在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和双波长扫描分析,确定酒石酸脱氢酶β亚基在大肠杆菌中表达时以包涵体形式存在.目的蛋白用TALON金属亲和树脂纯化,通过分步透析逐步去除变性剂的方法复性.复性产率可达90%.     

一种新的产生天然蛋白的不依赖于连接的克隆载体

报道一种新的不依赖于连接的克隆（LIC）载体．该载体被缺刻的内切酶N．BbrCIA和限制性内切酶SwaI作用产生长的粘性末端．靶向基因的PCR片段在4mmol／LdGTP的孵育下被T4DNA聚合酶处理生成互补粘性末端．将处理过的载体和PCR产物共转化到大肠杆菌体内,插入载体的接合能够被宿主酶和给定的重组质粒修复．接着引入到大肠杆菌表达系统,该融合蛋白能够被表达和纯化,再用烟草蚀刻病毒TEV蛋白酶处理将移去靶蛋白的N末端,产生天然蛋白．两个基因,绿色荧光蛋白基因egfp和硫氧环蛋白基因txn已被用于这个系统．结果表明LIC策略对于高通量克隆和表达是高效的,对于天然蛋白的产生也同样高效．     

生物技术的生态风险

综述了生物技术的生态风险产生的原因,论述了生态风险评估的方法及防范生物技术产生生态风险的生物安全立法．最后,本文展望了生物技术的生态风险评估的未来发展．     

环境生物技术的实践(英文)

环境生物技术所从事的是"使微生物群落能为人类社会提供服务",它的成功来自与原核微生物的协同作用,其广泛的代谢能力可以被利用来破坏污染物的结构并产生可再生材料.要想发挥微生物的作用,需要通过微生物分子生态学、分析化学和数学建模等学科的发展去很好地理解它,从而看清微生物黑箱模型内部的本质.同样重要的是将对生物技术的理解转化为"利用好微生物以使他们为我们工作".这种转化需要新颖的反应器设计,先进材料的利用,以及与用户的良好合作.成立于2005年的亚利桑那州立大学Swette环境生物技术中心,就是将相关的科学与工程领域中的多种方法和手段汇集在一起,形成了一种跨学科的研究中心.该中心强调团队协作精神,并与世界各地的研究者和实践者进行合作.介绍了3个新的技术:用于消减水中许多氧化性污染物的H2基膜生物膜反应器(MBfR);用于有机污染物转化为可再能源的微生物电化学电池(MXCs);以及用于加速难生物降解有机污染物脱毒的光催化与生物降解紧密结合的光-生物催化技术说明了中心是如何将基本原理应用于"利用好微生物"的.     

生物修饰玉米粉的特性研究

制备谷氨酰胺转氨酶修饰玉米粉和植物乳杆菌修饰玉米粉两种生物修饰玉米粉后,分析了玉米粉生物修饰前后的凝胶特性、黏度特性和结晶结构的变化.玉米粉的凝胶特性经生物修饰后得到改善,表现在膨胀度、保水力、溶解度、透明度的提高,凝沉性下降.生物修饰玉米粉的糊化时间比原玉米粉明显缩短.生物修饰处理对玉米粉的结晶结构影响不大,仍保持A型X-衍射结构,结晶度稍微有所提高.     

Omics in marine biotechnology

Marine biotechnology emerged in the 1980s, and since then it has been gradually gaining momentum to meet growing demands that cannot be satisfied by terrestrial sources alone.     

生物技术专业实践体系构建

随着生物技术及其产业化的快速发展,社会对高素质的实践和创新型生物技术专业人才的需求不断增加,传统的实践体系已难以满足这种需求。围绕以大纲要求与社会需求为指导、实践为基础、能力为根本、制度为保障、就业为目的的一条龙的实践模式,着重论述了实践教学体系的内容、形式及其重要性,以期为培养高素质的实践创新型生物技术应用型人才提供有力依据。     

生物技术专业实验教学的改革实践

实验教学是为实现专业培养目标和规格的整个教育过程的重要部分,是培养学生综合能力和创新思维能力的重要过程。实验教学对学生知识、能力、技能等综合素质的培养有着理论教学不可替代的作用。按照生物技术专业人才培养目标和人才规格,针对沈阳师范大学化学与生命科学学院生物技术专业人才培养模式中的实验教学与实践教学存在的问题进行改革与实践;充分发挥实验教学在培养高素质生物技术专业人才中的作用,构建了分层次实验教学体系;优化实验教学内容;改进实验教学方法及手段;构建了新的考评机制;对于实验教学及实践教学中存在的问题提出对策。     

环境生物工程技术的发展前景展望

环境生物技术是一门利用微生物介质为人类提供服务的技术科学，其核心思想是依据各类微生物的生态活动规律，从中寻找最有效的能解决目前一些环境问题的途径，如稀释污染物、截留废物中的可循环利用资源等．在过去15年里，分子生物技术的广泛使用，为逐步掌握微生物生态活动规律提供了可能，如：它们是如何自组织繁衍的，不同类体之间是如何相互影响的；同时，一些新的数学模型方法和新材料的尝试使用，也极大地拓宽了学科研究的手段．目前，有两种力量正在推动该学科的进行，一是其他学科领域的发展所带来的“推力”，二是社会的环境安全需求所产生的“拉力”．为了利用这种大好的发展时机，未来学科的研究耍注意以下4个方面：①把解决水和能源可持续发展问题放在首要位置；②开发和采用更有效的分子技术工具去揭示微生物的生态活动规律；③综合利用分子技术工具、模型分析工具和采用新材料去努力解决实际环境问题；④耍注重生物膜技术的研究．还提供了几个案例说明了如何把这4个方面的思想贯彻到实际研究之中。     

兰花生物工程研究进展

对兰花组织培养的历史和进展作了扼要综述 .着重阐述了外植体取材、培养基、激素等因素对外植体培养、原球茎增殖及芽分化的影响 ,并介绍了兰花种子离体萌发技术、兰花原生质体培养、原生质体融合及基因工程的研究进展情况