Src真核表达载体的构建与表达

构建酪氨酸蛋白激酶Src真核表达载体,并检测其在HEK293T细胞中的表达.根据Genebank（GI：4574718）提供的大鼠Src的cDNA序列设计特异性引物,以大鼠海马总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增Src的目的基因,然后克隆至真核表达载体pcDNA3.1.将筛选的阳性重组子转染入HEK293T细胞系,免疫印迹检测Src的蛋白表达水平,经限制性内切酶双酶切及测序分析,扩增的Src的cDNA成功连接入pcDNA3.1,并且序列与Genebank中一致.免疫印迹结果表明,构建的Src-pcDNA3.1可在HEK293T细胞中表达.成功构建了Src-pcDNA3.1真核表达载体,并且可在HEK293T细胞中高效表达.     

改良新生大鼠雪旺细胞的体外培养和纯化

为建立一种简易有效的体外培养和纯化雪旺细胞(Schwann cells,SCs)的方法,采用显微技术严格无菌条件下取新生大鼠坐骨神经,去除鞘膜,剪碎成0.5 mm3大小,混合酶分步消化法分离单个细胞,用连续阶段时间点(接种培养后第15 min、30 min和45 min)差速贴壁法联合适时阿糖胞苷抑制法进行纯化,通过形...     

中药黄芩的悬浮培养及过氧化物同工酶酶谱分析

以黄芩悬浮细胞为实验材料,研究黄芩悬浮培养过程中悬浮培养液pH值、电导率值、蔗糖质量分数,并对不同培养时间测定过氧化物同工酶酶谱进行分析,确定次生代谢产物黄芩苷与培养液及同工酶的关系.结果表明,在黄芩悬浮培养周期中,过氧化物酶酶谱变化与次生代谢产物黄芩苷的积累呈正相关,黄芩悬浮培养14 d过氧化物酶活性最强,黄芩悬浮培养第15天时,黄芩苷质量浓度最高.悬浮培养液pH值、电导率值、蔗糖质量分数随黄芩苷累积均有相应变化.     

红球菌菌株腈水合酶提取方法优化

研究了红球菌(Rhodoccus sp.Tccc28001)腈水合酶初步提取实验.对腈水合酶提取的菌体培养时间、细胞的超声破碎方法和硫酸铵分级分离方法进行了优化.结果表明,提取的最佳条件为:培养96 h收获菌体;在4℃下溶菌酶处理菌悬液40 h后进行超声波处理,400 W超声破碎60min,分2次进行,每次30 min(60个循环,15 s超声,15 s间歇);然后使用40 mmol/L磷酸缓冲液,经20%~70%饱和度硫酸铵沉淀,能获得最高产率的腈水合酶.此研究为腈水合酶的层析纯化奠定了基础.     

外源ABA对匍枝筋骨草悬浮细胞内源激素及蜕皮甾酮的影响

通过分别向匍枝筋骨草悬浮培养体系中添加不同浓度的脱落酸(ABA)并测定添加后不同时间悬浮细胞的生长状况和生物量,以及蜕皮甾酮(20E)和ABA的浓度变化,筛选出最适宜添加浓度.通过测定悬浮细胞内玉米素(ZR)、赤霉素3(GA3)和吲哚乙酸(IAA)及20E的含量变化,探讨ABA对匍枝筋骨草悬浮细胞生长的影响.结果表明,添加0.15 mg·L-1ABA后细胞生长速度减缓,但在未褐化期ABA促进20E的累积,在第48 h和72 h悬浮细胞中20E含量显著地高于对照组,但在第96 h悬浮细胞出现褐化现象,20E含量下降极显著地低于对照组;向匍枝筋骨草悬浮体系中加入外源ABA,悬浮细胞内ABA含量呈上升趋势,ZR,GA3,IAA含量呈相对下降趋势;在相同条件下添加ABA抑制剂(Na_2WO_4),则ABA,ZR,GA3和IAA的变化趋势与添加ABA相反,对20E的影响不显著.     

木聚糖酶产生菌固体发酵条件的初步研究

木聚糖酶产生菌 (Aspergillusniger) 1 - 1 3菌株以白酒丢糟作为碳源进行固体发酵生产木聚糖酶 .采用单因素搜索对其最适产酶的氮源和发酵条件进行优化 ,结果表明 :添加的最适氮源为硫酸铵 ,最适加入量为 1 6% (以白酒糟干质量计 ) ;最适产酶发酵条件 :温度为 30℃ ,初始含水量为 5 5 % ,接种量为 1mL菌悬液 (浓度为 7× 1 0 7个 /mL)接种到 1 0 g固体培养基中 .在此优化条件下培养 72h ,木聚糖酶活力可达最高为 370IU/ g酒糟粉     

理化因子对黄芩悬浮细胞苯丙氨酸解氨酶活性的影响

从稳定黄芩悬浮细胞系中筛选生长状况良好的黄芩悬浮细胞,研究了pH值、接种量和摇床转速对黄芩悬浮细胞中苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的影响.结果表明,在黄芩悬浮细胞生长初期,pH值为6.6时PAL活性略高,但纵观整个黄芩细胞生长周期,pH为5.8时的PAL活性明显更好;而当接种量为30 g·L-1,摇床转速为110 r·min-1时,黄芩悬浮细胞中的PAL活性亦是最佳.利用正交实验设计方案筛选出适于黄芩悬浮细胞PAL活性提高的培养条件:NH4+∶NO3为10∶40 mmol·L-1,蔗糖4%,6-BA 1.0 mg·L-1,2,4-D 0.2 mg·L-1.     

磷酸钙沉淀法去除厌氧养猪废水中磷的实验研究(英文)

利用钙盐对模拟的厌氧养猪废水进行除磷研究,找出磷酸钙形成沉淀所需的适宜钙磷比。先后进行批次和连续流试验,比较生石灰与熟石灰的除磷效果以及石灰与钙盐在除磷应用上的区别,优化选出最佳除磷试剂。实验表明:磷酸钙沉淀法能有效去除厌氧养猪废水中的磷元素,同时降低废水的色度和浊度。     

ABA对匍枝筋骨草防御酶活性及蜕皮激素合成的影响

向培养了7 d的匍枝筋骨草悬浮细胞培养体系内分别添加0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 mg/L的ABA,以研究ABA对匍枝筋骨草细胞防御系统的作用及ABA对蜕皮激素合成的影响.试验结果表明:向培养7 d的悬浮体系中,添加0.1~0.4 mg/L的ABA后,悬浮细胞第4天出现褐化;添加0.5 mg/L的ABA后,第3天出现悬浮细胞褐化现象;添加不同质量浓度的ABA后第4天测其悬浮细胞生长量均与对照差异不显著;添加不同质量浓度ABA后悬浮细胞的SOD,POD和CAT活性在48 h内均显著上升,而PAL活性变化在2~24 h间不显著,后上升;添加不同质量浓度的ABA可使筋骨草悬浮细胞的蜕皮激素含量增高,而添加0.1 mg/L ABA,其蜕皮激素含量增高最为显著.     

C_3启动子克隆及荧光素酶报告基因载体构建

为克隆C_3基因启动子序列,构建C_3基因启动子荧光素酶报告基因载体,运用PCR的方法从血液中提取到的基因组DNA中获得目的基因,双酶切后连接到荧光素酶报告基因载体上,构建C_3基因启动子报告基因载体.构建的pGL3-Basic-C_3-promotor重组质粒和内参质粒SV40瞬时转染Hela细胞,检测荧光素酶活性.结果表明,PCR扩增出C_3基因启动子片段;双酶切及测序鉴定重组体构建正确;转染Hela细胞后经双荧光素酶报告基因检测确定重组体有启动子活性.成功构建了C_3启动子报告基因载体,在细胞系中进行初步活性分析得知所克隆的C_3基因调控序列包含启动子活性区域.     

功能化石墨烯载hTERTsiRNA的制备及其对宫颈癌Hela细胞的影响

以氧化石墨烯(GrapheneOxide,GO)为基质,制备了氧化石墨烯-聚乙二醇-叶酸(GO-PEG-FA)纳米载体,借助于通过π-π相互作用负载在GO表面的胺甲基芘盐酸盐(PyNH2),介导人端粒酶反转录酶siRNA(hTERTsiRNA)转染入宫颈癌Hela细胞.GO-PEG-FA-PyNH2-hTERTsiRNA纳米基因复合物被成功制备,并通过红外光谱和紫外光谱进行表征.荧光显微镜观察该纳米载体的转染效率明显优于裸siRNA组,Western blot实验检测Hela细胞hTERT蛋白表达显著降低,MTT实验观察该载体对细胞无毒,其共载hTERTsiRNA和抗肿瘤药阿霉素后对Hela细胞生长的抑制具有协同作用.因而该功能化氧化石墨烯可以作为靶向基因载体,有效传递siRNA及化疗药物进入肿瘤细胞发挥作用.     

彩色豆腐的制作方法

彩色豆腐与传统豆腐一样,都是以大豆为原料.不同的是,它在制作中加入天然蔬菜果汁辅料,形成天然色彩,且含有丰富的营养成分,保存了蔬菜中的纤维质,有利于人体吸收、消化.制作彩色豆腐的基本工艺与传统豆腐略同,关键工序是菜汁的加入.     

酶解法提取海南龙血树叶总皂苷的工艺研究

研究了酶解法提取海南龙血树叶总皂苷的工艺.采用酶解-乙醇浸提,以龙血树叶总皂苷的提取率作为评价指标,通过单因素试验和正交试验,确定提取海南龙血树叶总皂苷的最佳工艺.结果表明：最佳工艺条件是,酶质量浓度0.20 mg/mL,酶解温度50℃,pH=5.0,酶解时间为1.5 h,料液比1∶12.在此条件下,海南龙血树叶总皂苷提取率为4.13%.     

脂肪酶产生菌的筛选及其原生质体的制备

实验采用加有维多利亚蓝或若丹明-B染料指示剂的油脂鉴定平板，在室温条件下从长期接触油脂的土壤中分离挑选产脂酶菌种，经琼脂块平板初筛和摇瓶复筛后获得一酶活较高的白色丝状真菌-地霉(Geotrichum,Sp)GS，为对该菌株进行原生质体诱变育种，将菌丝经DTT溶液预处理后，用混合脱壁酶液处理制备原生质体，并加入0．6mol／L MgSO4溶液离心后收集呈絮状飘浮的原生质体团，从而获得大量不带菌丝的原生质体供诱变使用。     

AcSDKP对体外培养条件下人骨髓间充质干细胞增殖周期的影响

为阐明AcSDKP调控骨髓间充质干细胞(MSCs)生长的作用机制,进行人骨髓MSCs体外培养,采用BrdU掺入法、流式细胞术、MTT比色法和集落形成实验等,检测了在AcSDKP作用下的DNA合成速率、细胞周期活动和贴壁能力,观察了AcSDKP作用效应的可逆性.结果显示,在AcSDKP浓度为1012～10-10mol/L的MSC培养体系中,BrdU标记阳性细胞数减少;S+G2/M期细胞的比率降低,G0/G1期细胞增加;24 h后的贴壁细胞数与对照组比较减少;在培养体系中撤除AcSDKP后,MSC集落生成数多于对照组.这些效应均有显著性意义.其结果提示,在体外培养条件下,AcSDKP能阻止人骨髓MSCs进入S期,减慢增殖周期运转,其作用具有可逆性,还能影响其贴壁能力.     

国产和进口柠檬酸消毒剂杀细菌芽胞效果的比较研究

为了比较国产和进口柠檬酸消毒剂的杀菌效果,采用悬液定量杀菌试验和消毒模拟现场试验,同时对国产柠檬酸消毒剂和进口柠檬酸消毒剂的杀细菌芽孢效果进行实验室研究.研究结果发现在试验温度80℃时,25%和50%国产柠檬酸消毒剂和进口消毒剂都对枯草芽胞杆菌具有明显的杀菌作用.杀灭对数值分别为〉7.31和〉7.26均具备同样的杀菌效果.     

薄荷组织和细胞培养的研究进展

结合相关资料,综述了薄荷组织的离体培养和细胞悬浮培养的研究概况,指出目前薄荷组培技术方面的局限和不足,提出细胞培养直接产生次生代谢产物的开发利用途径,为以后进行薄荷组织和细胞培养工作指明方向。     

Fenton试剂耦合叶腊石改善厌氧污泥脱水性能

利用Fenton试剂耦合叶腊石改善生物乙醇厌氧消化污泥脱水性能。结果表明,最佳污泥脱水条件下,Fenton试剂添加量为55 mg/g干污泥,叶腊石为67 mg/g干污泥时,此时污泥脱水性能指标污泥比阻(SRF)和可压缩性系数分别减小到2.7×10~(12)m·kg~(-1)和0.492,与原污泥SRF 12×10~(12)m·kg~(-1)和可压缩性系数1.327相比,SRF和可压缩系数分别减小77.5%和62.9%;污泥扫描电镜分析表明,经Fenton试剂耦合叶腊石处理的污泥,污泥结构发生明显变化,能形成致密且具有较大孔径的絮体;污泥热重曲线显示,与原污泥相比,耦合调理污泥后脱水起始温度和热重峰明显前移。耦合调理污泥比单独调理污泥脱水效果均具有优势,使用叶腊石可以明显减少Fenton试剂的使用量;此外,该方法处理生物乙醇厌氧消化污泥,不影响污泥后续资源化利用。     

新型维生素C衍生物的制备及其抗氧化活性研究

以维生素C、3-O-烷基维生素C醚等衍生物和杜鹃花酸为原料制备了系列新型的维生素C衍生物AG1、AG2,探讨了溶剂、酶催化剂的种类等因素对反应的影响,发现以NOVO 435为酶催化剂,在叔戊醇介质中进行反应时转化率相对较高.具体反应条件如下:酶催化剂NOVO 435加入量为8％、维生素C和杜鹃花酸摩尔比为1.1∶1、T...