红莲型水稻不育系与保持系线粒体DNA酶切分析

为研究红莲型水稻细胞质雄性不育的分子基础，我们提取纯化了红莲型水稻丛广４１Ａ和丛广４１Ｂ的线粒体ＤＮＡ，采用限制性内切酶酶切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）方法比较了红莲型不育系和保持系线粒体ＤＮＡ酶切图谱，发现两者之间存在一定的差异，部分支持了细胞质雄性不育与线粒体ＤＮＡ有关的结论。     

萝卜叶绿体rbcL基因定位及ctDNA基因文库的构建

用改进的高离子强度法分离的萝卜叶绿体经ＳＤＳ６０℃裂解，抽提的ｃｔＤＮＡ只需简单纯化即可用于酶切分析，萝卜ｃｔＤＮＡ用４种限制性内切酶ＢａｍＨＩ，ＰｓｔＩ，ＨｉｎｄⅢ和ＥｃｏＲⅠ分别进行单酶完全酶解，推算其分子量和长度分别为８２．５×１０６６Ｔ １２５ＫＢ。     

转基因油菜雄性不育系15A及其恢复系菌核病抗性的鉴定与筛选

采用苗期接种法对湖南油料所构建及选育的转基因油菜雄性不育系15A、胞质三系不育系742A,常规油菜恢复系695、780的抗耐油菜菌核病进行鉴定,结果表明,4个品种均为抗性品种,其中15A为中抗,742A、695、780为低抗。四个品系的病情指数均比对照中油821低。各品系单株之间抗性存在明显差异。     

葡萄DNA提取与纯化方法的比较研究

以巨峰葡萄叶片为试材,在ＣＴＡＢ法,ＳＤＳ法及高盐低ｐＨ法基础上加以改进,应用５种方法对葡萄ＤＮＡ提取,纯化方法进行了比较研究。结果表明,高盐低ｐＨ法和区室化提取法是２种适合于葡萄属植物ＤＮＡ提取的方法。     

青菜花粉管通道法导入外源DNA的研究初报

采用花粉管通道法，将青菜株系７５Ｆ５、１４号大白菜、紫阳等三个品种的总ＤＮＡ及质粒ｐＡｃｔ１－Ｄ ＤＮＡ导入青菜６０５品系，收获青菜种子。种子发芽后分别提取约两周苗龄的小苗总ＤＮＡ，并经ＥｃｏＲⅠ酶切，以ｇｕｓ基因片段为探针做子杂交，证实了外源ｇｕｓ基因已整合到青菜６０５品系中；田间观察还获得了一株与供体大白菜花形相似的变异株。     

玉米雄性不育制种技术的研究和开发应用

玉米雄性不育化制种技术,利用雄性不育的母本,免去人工去雄,从根本上解决了自交苗的问题.引进部分Y型雄性不育胞质,成功地将478、8112、832等主要品种的母本转为不育系.采用直接回交法,从遗传学上讲,当选育亲本回交达7代时,不育胞质A的核置换达99.2%,显著提高了制种质量和大田生产产量,降低制种成本,社会、经济效益显著.     

豌豆中GPAT基因编码cDNA的克隆及分析

参照国外报道的豌豆ＧＰＡＴ基因ｃＤＮＡ序列，设计并合成一对寡核苷酸引物，通过ＲＴＰＣＲ技术，从云南地方栽种的豌豆品种中分离到了ＧＰＡＴ基因的编码ｃＤＮＡ片段，并将其纯化后直接克隆到ｐＧＥＭＴ载体系统中，经ＮｃｏⅠ和ＮｏｔⅠ双酶切鉴定，所得的重组质粒中含有１３８０ｂｐ左右的片段．采用ＰｓｔⅠ，ＨｉｎｄⅢ两种限制性内切酶进行酶切，酶切图谱分析表明所克隆的豌豆ＧＰＡＴ基因编码ｃＤＮＡ的酶切图谱与国外所报道的该基因ｃＤＮＡ的酶切图谱一致，暗示了该基因在进行上具有一定的保守性．     

不同细胞质雄性不育小麦阳离子过氧化物酶和IAA—氧化酶？…

选用Ｃ－型，Ｍ－型，Ｍｔ＾２－型，Ｇ－型４个不同类型的细胞质雄性不育小麦为材料，以其保持系中国春作对照，用低ＰＨ值提取酶液。对分蘖期，拔节期，孕穗期和抽穗期叶，穗和花药中的阳离子过氧化物酶和ＩＡＡ－氧化酶活性进行了研究。     

环状芽胞杆菌基因启动子的分离与鉴定

环状芽胞杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｉｒｃｕｌａｎｓ）总ＤＮＡ经Ｓａｕ３ＡＩ酶切后插入到启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ１的ＢａｍＨＩ位点，转化大肠杆菌后，在卡那霉素的平板上筛选到５０个抗性菌落。从随机挑取的２９个抗住菌落所分离到的质粒ＤＮＡ经限制酶切和琼脂糖凝胶电泳后表明，各质粒均有ＤＮＡ插入片段，对２９个样品进行卡那霉素抗性试验显示，抗性最高的可超过１０００μｇ／ｍＬ这表明来自环状芽胞杆菌的某些基因启动子能在大肠杆菌中十分有效地启动基因表达，选取两个最大的克隆ＤＮＡ片段ＢＣ３和ＢＣ６作为探针与Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓｃ－２．总ＤＮＡ作Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，均获得杂交带。斑点杂交结果表明，这两个ＤＮＡ片段来自不同的基因启动子。对ＢＣ６和ＢＣ３分别进行了限制酶谱分析，并绘制了限制酶图。     

小麦叶绿体DNA的提取与psbA基因的扩增

利用高离子强度，低ｐＨ值缓冲液匀浆细胞的方法，提取小麦叶绿体ＤＮＡ，并以此为模板，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）对小麦叶绿体ｐｓｂＡ基因进行了特异性扩增。     

导入高梁DNA选育丰产、抗逆小麦新品系及其RAPD分子验证

通过花粉管通道法,将高粱ＤＮＡ导入小麦,结果在其后代产生了广泛的变异,并从中选育出高产、抗逆、耐盐碱小麦新品系８９１２２．在省级区试中,连续两年表现优良,比统一对照高原６０２增产２４．０８％,比原受体陇春１３号增产２１．０６％．在盐碱地,比当地主栽品种Ｖ２８增产１０．５％,比原受体增产２２．５％．光合效率明显提高．ＲＡＰＤ分析结果表明,新品系基因组出现多态性,并具有供体特异性ＤＮＡ带,表明该小麦新品系为转基因后代     

酒精和冷冻处理对肌肉组织基因组DNA提取的影响

提取基因组DNA的质量对于后续的基因扩增、酶切以及测序等分子生物学研究具有关键的影响,对肌肉组织进行不同的酒精和冷冻处理会显著影响提取DNA的质量。经过-80℃超低温冷冻数日的黄鳝样品解冻,取肌肉组织放入75%酒精处理后提取的基因组DNA完整性差、降解厉害;经过-80℃超低温冷冻数日的黄鳝样品直接取肌肉组织提取的基因组DNA比较完整、降解程度低;活体采取的黄鳝新鲜肌肉组织样品经过75%酒精处理,在-80℃超低温冷冻数日然后提取的基因组DNA质量也较好,电泳条带明晰而锐利,弥散降解带较少。后两种处理方法对黄鳝肌肉组织中DNA酶活性降低显著,因此提取的肌肉组织基因组DNA质量较高,可以有力支持后续的酶切、PCR扩增等分子生物学实验。     

水稻配子体细胞质雄性不育基因orf79/orfH79的变异多态性研究

线粒体基因组异常嵌合基因orf79/orfH79被证实为水稻配子体细胞质雄性不育（cytoplasmic male sterility,CMS）基因。为了调查配子体CMS基因orf79/orfH79在水稻资源中的遗传与变异,来自不同国家的31份水稻材料被用于PCR检测。10份水稻材料被检测出具有配子体CMS基因orf79/orfH79,表明配子体CMS基因orf79/orfH79在水稻资源中具有较高的分布频率（32.2%）。DNA序列分析显示水稻配子体CMS基因orf79/orfH79具有非常保守的遗传特性（98.3%）,只有4个多态性碱基位点被检测出,4个碱基位点的变异导致多肽ORF79/ORFH79三个氨基酸位点的改变。基于orf79/orfH79 DNA序列的聚类分析系显示10份水稻材料被分成了3个类群,表明配子体CMS胞质在水稻资源中存在多种变异模式。研究结果为新水稻CMS胞质的发掘与培育提供重要的理论和实验依据。     

白菜hau CMS不育系特异分子标记的开发与应用

以不同胞质的白菜和芥菜为材料,将hau CMS胞质的线粒体基因组与芸薹属植物中其他的细胞质雄性不育系的线粒体基因组进行比较,再经生物信息学分析,筛选得到hau CMS线粒体基因组上特异的序列,并根据该序列信息开发出用于鉴定白菜hau CMS类型的分子标记hau CMS-Specific.同时,通过序列对比分析发现hau CMS线粒体基因组缺失但其他胞质共有的线粒体基因组序列.根据该序列信息,开发了互补检测的分子标记hau CMS-Deletion.最后利用hau CMS、ogu CMS、pol CMS、oxa CMS、orf220CMS等不同胞质类型材料的DNA成功验证了这两对标记.     

Sequence analysis of the gene correlated with cytoplasmic male sterility (CMS) in rape-seed (Brassica napus) Polima and Shaan 2A

orf224 is a CMS-related mitochondrial gene discovered in Polima cytoplasm. Shaan 2A CMS line is the parent of the first rapeseed hybrid cultivar Qinyou No. 2that has been grown in many regions of China. In this work,genomic DNA of Polima CMS line and Shaan 2A CMS line were used as templates, two primers of specific oligonucleoamplification fragments were cloned into pGEM-T Easy vectors and DNA sequences were determined. The CMSassociated gene, orf224-1 present in Shaan 2A CMS line, has a sequence highly homologous to the orf224 of the Polima CMS line, except for one nucleotide at position +398. There were only one base (AAC→AGC) and one amino acid (Asn →Ser) differences between the two. The homologies of the two sequences in nucleotide and. amino acid were 99.9 % and 99.6%, respectively. It is concluded that orf224 in Polima CMS line and orf224-1 of Shaan 2A CMS line are the allele at the same locus in mitochondria.``     

硅胶破碎法抽提真菌染色体DNA

在进行基因组步行PCR克隆真菌木聚糖酶基因的研究中,探索并建立了一套可在普通分子生物学实验室采用的高得率、高质量真菌染色体DNA的抽提方法.采用液氮研磨和硅胶破碎相结合提高染色体DNA得率,采用亚精胺法纯化提高DNA的纯度.抽提的染色体DNA用琼脂糖凝胶电泳、限制酶切、PCR反应及紫外吸收光谱等方法进行了鉴定,结果显示此方法可以获得分子量大、样品纯的染色体DNA,可有效地用于PCR扩增,并能被限制酶有效地消化.     

菠菜性别差异NUPTs序列的克隆及分析

质体DNA向核基因组转移能够形成核质体DNA,核质体DNA序列的插入是推动动植物基因组及染色体组演化的重要动力.但是核质体DNA的插入和植物性染色体起源及演化之间的关系仍不清楚.以雌雄异株植物菠菜为材料,利用基因组消减杂交技术筛选分离菠菜雌雄基因组差异的NUPTs序列,并进行验证和分析.结果表明,从构建的菠菜消减杂交文库中共得到39条长度为75~308 bp的雌雄差异序列,其平均长度约为154 bp.对获得的序列进行Blastn同源比对发现了12条序列为叶绿体基因组来源序列,这些序列与菠菜叶绿体基因组相似度在98%以上,说明所获得的差异片段为核质体DNA序列.将筛选出的核质体DNA序列进行进一步验证后获得了两个稳定的长度分别为146 bp和199 bp的雄性偏好核质体DNA序列,说明所获得的两个NUPTs序列在菠菜雄性基因组中有更多的累积.     

Sequence analysis of the gene correlated with cytoplasmic male sterility (CMS) in rape-seed (Brassica napus) Polima and Shaan 2A

orf224 is a CMS-related mitochondrial gene discovered in Polima cytoplasm. Shaan 2A CMS line is the parent of the first rapeseed hybrid cultivar Qinyou No. 2 that has been grown in many regions of China. In this work, genomic DNA of Polima CMS line and Shaan 2A CMS line were used as templates, two primers of specific oligonucleotides at 5′ and 3′ ends were used, PCR was performed, the amplification fragments were cloned into pGEM-T Easy vectors and DNA sequences were determined. The CMS-associated gene, orf224-1 present in Shaan 2A CMS line, has a sequence highly homologous to the orf224 of the Polima CMS line, except for one nucleotide at position +398. There were only one base (AAC→AGC) and one amino acid (Asn →Ser) differences between the two. The homologies of the two sequences in nucleotide and amino acid were 99.9% and 99.6%, respectively. It is concluded that orf224 in Polima CMS line and orf224-1 of Shaan 2A CMS line are the allele at the same locus in mitochondria.