杉木DNA提取方法的研究

在杉木新鲜针叶和干叶ＤＮＡ提取过程中，应用ｐＨ值较低，无机盐浓度较高的提取缓冲液可沉淀蛋白质，其中加入２％的β－羟基乙醇可有效地防止酚类物质使变色，提出２出的ＤＮＡ样品产率在６０～２００ｎｍ／ｍｇ．ＦＷ，ＤＡＮ质量和纯度较高，２６０ｎｍ／２８０ｎｍ光密度比值在１．８～１．９，所得ＤＮＡ可直接用于限制性内切酶酶切，并可用于随机引物ＰＣＲ扩增，该方法为杉木分子生物学研究提供基础。     

草鱼线粒体DNA酶切图谱的研究

用１０种限制性内切酶对草鱼肝脏线粒体ＤＮＡ进行了分析，其分子太小约１６．５８ｋｂ．ＰｓｔＩ，ＢａｍＨＩ，ＸｂａＩ，ＢｇｌＩ，ＨｉｎｄⅢ，ＢⅡ，ＰｖｕⅡ，ＸｈｏⅠ，ＥｃｏＲⅠ，ＳａｌⅠ在草鱼ｍｔＤＮＡ分子上分别具有２，３，３，４，７，３，６，２，４及０个切点。根据单酶解及双酶解结果建立了草鱼ｍｔＤＮＡ的限制性酶切图谱。     

鳙鱼线粒体DNA的限制性内切酶图谱

用１１种限制性内切酶分析鳙鱼的线粒体ＤＮＡ，构建了全部１１种酶２２个切点的物理图谱，鳙鱼线粒体ＤＮＡ的分子大小约为１６．４４ｋｂ。酶切位点的分布是非随机的。     

与小麦高分子量谷蛋白基因探针杂交的阳性克隆分离及基因在重组子上的定位

将经San 3A部分酶切后的小麦总DNA片段克隆到λCharon40载体上构建了小麦基因文库.以两个人工合成的同源于小麦高分子量(HMW)谷蛋白基因的片段对此基因库进行筛选,获得了两个阳性克隆,推测其中一个包含了HMW谷蛋白全部的基因顺序.两个克隆的部分限制性内切酶位点已被确定.在Southern杂交中,用位于基因编码区内的寡核苷酸片段作探针,将阳性部分定位在一定的酶切片段上.     

重组质粒pPAHD1的限制性内切酶图谱分析

本文对我们构建的含有青霉素酰化酶(Acylace)基因的重组质粒pPAHD1进行了限制性内切酶图谱的测绘。使用了限制酶14种,证明BglⅡ,SalⅠ,SmaⅠ和BamHⅠ在重组质粒上各有切点一个;EcoRⅠ有切点两个:HindlⅡ,AvaⅠ各有切点三个;PvuⅠ有切点四个;EcoRⅤ和XmnⅠ各有切点五个。     

长吻Wei肝脏线粒体DNA的研究

采用密度梯度离心法及ＤＮａｓｅ Ｉ、ＲＮａｓｅ消化法制备并纯化了长吻Ｗｅｉ肝脏线粒体ＤＮＡ（ｍｔ ＤＮＡ）。用９种限制性内切酬谢ｍｔ ＤＮＡ进行了分析。Ｘｈｏ Ⅰ，Ｂｇｌ Ⅱ、ＥｃｏＲ Ⅰ、Ｐｓｔ Ⅰ、Ｂｇｌ Ⅰ、ＢａｍＨ Ⅰ、Ｈｉｎｄ Ⅲ、Ｓａｌ Ⅰ在长吻Ｗｅｉ ｍｔＤＮＡ分子上分别具１、３、３、２、１、２、４、７、０个切点。ｍｔ ＤＮＡ分子量约１０．３１×１０＾６道尔顿，大小为１６．６９ｋｂ。根据     

129小鼠CgA基因cDNA 5'端部分片段及CgA基因的克隆

通过RT-PCR方法,从129小鼠脑组织中克隆到CgA基因cDNA 5'端部分片段,序列分析结果表明,所克隆到的片段序列与文献中完全一致.以此片段为探针,从129小鼠基因组库中筛选获得阳性噬菌体1-1,克隆了CgA基因,并与文献中的小鼠CgA基因限制性内切酶图谱进行了比较分析.     

限制性内切酶介导的整合技术

限制性内切酶介导的整合技术是近年发展起来的一种研究基因的新方法,与质粒拯救相结合,可快速分离质粒两侧的DNA序列,进而对该序列做进一步分析和研究．该技术已应用于基因突变、基因标记、寻找新基因等研究领域．本文重点介绍了限制性内切酶介导的整合技术的原理、影响因素及应用现状．     

克隆含有MT-Ⅰ和MT-Ⅱ基因的染色体DNA片段及其内切酶图谱的鉴定

用小鼠MT-ⅠcDNA作为探针,从129小鼠的基因组库中获得含MT-Ⅰ基因的DNA片段。从6.8×10⁵的噬菌斑中挑出4个阳性噬菌体克隆,分别命名为1-1, 2-1, 1-6和4-3。在这4个克隆中1-1和2-1的阳性信号更强些。应用插入片段的末端引物作为探针进行杂交结合部分酶切的方法,对这2个克隆的插入片段进行了限制性内切酶酶切图谱分析,确定了克隆1-1和2-1的酶切图谱及MT-Ⅰ基因在2个克隆DNA中的位置。并进一步发现和证明了在2个克隆中含有MT-Ⅱ基因。     

中国白兔线粒体DNA限制性图谱

用 ６ 种限制性内切酶分析了中国白兔的线粒体 Ｄ Ｎ Ａ（ｍ ｔ Ｄ Ｎ Ａ）。测得其相对分子质量约为１６．８, Ｅｃｏ ＲⅤ, Ｂａｍ ＨⅠ, ＰｓｔⅠ, Ｅｃｏ ＲⅠ, ＨｉｎｄⅢ在中国白兔 ｍ ｔ Ｄ Ｎ Ａ 上分别有 １,２,２,２,６ 个切点, ＳａｌⅠ 在其上没有切点。根据单酶降解和双酶降解片段的相对分子质量,构建了中国白兔ｍ ｔ Ｄ Ｎ Ａ的限制性内切酶图谱。     

限制性内切酶MluⅠ基因的合成、克隆和初步表达

在已知基因序列但缺乏DNA模版的情况下,人工设计合成多条引物,采用重叠PCR技术体外人工合成899bp的MluⅠ基因和1 312bp的M.MluⅠ基因.并将合成的MluⅠ基因连接到表达载体pet30a上,重组表达载体构成pet30a-MluⅠ,将M.MluⅠ基因连接到表达载体PUC19上,重组表达载体构成PUC19-M.MluⅠ.测序结果显示,载体构建成功后利用体外重组转化技术,将pet30a-MluⅠ和PUC19-M.MluⅠ转入T7expression E.coli表达菌株中.重组工程菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE鉴定,发现限制性内切酶MluⅠ成功表达.该酶的成功表达不仅为后续研究提供了材料,而且为实验室制备限制性内切酶在方法上开辟了新的途径,为更多新发现的内切酶基因的成功克隆提供了参考.     

柳毒蛾核型多角体病毒内蒙株(LsNPV-IM)DNA的限制性内切酶谱分析

将柳毒蛾核型多角体悬液降解 ,降解产物经 Tris-饱和酚和氯仿抽提 ,乙醇沉淀分离出Ls NPV-DNA.用限制性内切酶 Pst ,Hind ,Pst /Hind ,Hind /Eco R 和 Pst /Bam H 单酶切或双酶切 .经琼脂糖凝胶电泳并对其结果进行分析 ,建立了酶切图谱     

柳毒蛾核型多角体病毒内蒙株（LsNPV—IM）DNA的限制性 …

将柳毒蛾核型多角体悬液降解,降解产物经Ｔｒｉｓ－饱和酚和氯仿抽提,乙醇沉淀分离出ＬｓＮＰＶ－ＤＮＡ,用限制性内切酶ＰｓｔＩ,ＨｉｎｄⅢ,ＰｓｔＩ／ＨｉｎｄⅢ,ＨｉｎｄⅢ／ＥｃｏＲＩ和Ｐｓｔ／ＢａｍＨＩ单酶切或双酶切,经琼脂糖凝胶电泳并对其结果进行了分析,建立了酶切图谱。     

太白红杉总DNA的快速提取方法

对太白红杉总DNA提取方法进行了探讨，并对其不同部位和器官、不同处理方式材料进行了提取实验研究．通过琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶处理等方法对所提取的DNA样品进行检测．结果表明，改良后的CTAB法，对于太白红杉总DNA的提取是一种良好的简单易行的方法，无论是烘干后的材料还是新鲜材料提取的总DNA中基本没有蛋白质及酚类污染．该方法可在短时间内获得大量的DNA样品，并可根据需要对样品进行适当操作．     

四种昆虫病毒基因组DNA限制性内切酶图谱分析

应用限制性内切酶图谱分析,结果ＤＮＡ单分子层和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交方法,对黄地老虎颗粒体病毒,甘兰菜粉蝶颗粒体病毒,三叶草夜蛾颗粒体病毒和荨麻蛱蝶核型多角体病毒等四种杆状病毒提取基因组ＤＮＡ用９处限制性内切酶酶切,得到不同的酶切图谱使其在基因型上进行区分,通过ＤＮＡ单分子展层发现其核酸链都呈闭环和超螺旋构型,用＾３２Ｐ标记ＡｕＮＰＶ与ＧＶ杂交,没有发现与ＧＶ的同源性。     

129小鼠CgA基因cDNA 5′端部分片段及CgA基因的克隆

通过RT-PCR方法,从129小鼠脑组织中克隆到CgA基因cDNA 5′端部分片段,序列分析结果表明,所克隆到的片段序列与文献中完全一致。以此片段为探针,从129小鼠基因组库中筛选获得阳性噬菌体1-1,克隆了CgA基因,并与文献中的小鼠CgA基因限制性内切酶图谱进行了比较分析。     

阔叶榧总DNA的提取及其RAPD反应条件的研究

在阔叶榧新鲜针叶DNA提取过程中，应用pH值较低，无机盐浓度较高的提取缓冲液可沉淀蛋白质，其中加入2％的β-颈基乙醇可有效地防止次生代谢物质使DNA变色。提取出的DNA样品产率在83．7－197．5ng/mg.f.，DNA质量和纯度较高，260nm/280nm光密度比值在1．8－1．9之间。所得DNA可直接用于限制性内切酶酶切，并可用于随机引物PCR扩增，在优化RAPD各种反应条件研究中，确定 了阔叶榧最佳RAPD反应体系为：15μL反应体系中含有50mmol/L KCl．10mmol/L Tris-HCl(pH9.0）．0．1％Triton-100、3nmolμL MgCl2、0.6nmol/μLdNTPs、6μg/μL BSA、1U Taq酶、60ng引物、50－100ng左右的阔叶榧DNA。     

129小鼠CgA基因cDNA5‘端部分片段及CgA基因的克隆

通过ＲＴ－ＰＣＲ方法,从１２９小鼠脑组织中克隆到ＣｇＡ基因ｃＤＮＡ５‘端部分片段,序列分析结果表明：所克隆到的片段序列与文献中完全一致,以此片段为探针,从１２９小鼠基因组库中筛选获得阳性噬菌体１－１,克隆了ＣｇＡ基因,并与文献中的小鼠ＣｇＡ基因限制性内切酶图谱进行了比较分析。     

杨树毒蛾核型多角体病毒的形态结构与病毒DNA的限制性内切酶酶谱分析

杨毒蛾核型多角体病毒(Lencoma Salicis nuclear polyhedrosis virus,简称LsNPV)是一种多粒包理型的杆状病毒。在扫描电镜下呈不规则多面体,病毒多角体大小不一致,平均直径为1.2μm。病毒粒子长为215nm直径30～50nm。LsNPV的基因组是一个环状双链DNA。限制性内切酶BglI,SalI分别把病毒DNA酶解为26和24个限制性片段,由片段总和法计算,基因组大小为86.3kb。