小麦巯基蛋白酶抑制剂的纯化和性质研究

将小麦麦胚和麸皮的浸取液，经加热和利用ｐＨ沉淀，获得疏基蛋白酶抑制剂粗品；再经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子筛层析，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ柱上得到均为单一蛋白带的小麦ＣＰＩ纯品。其纯化度为原料浸液的４２倍。由ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得ＣＰＩ分子为单一肽链     

猪血浆巯基蛋白酶抑制剂的分离纯化及性质研究

用(NH_4)_2SO_4分段盐析,DEAE-纤维素离子交换和Papain—Sepharose亲和层析,从猪血浆纯化了一种巯基蛋白酶抑制剂(SUlfhydryl proteinase inhibitor;简称SPI);纯化倍数为54.36倍.经高pH、低PH不连续电泳呈一条区带.含糖量为7.77％;PI为4.80.氨基酸组成分析表明,猪血SPI富含酸性氨基酸、芳香族氨基酸和含硫氨基酸.用SDS-PAGE和SephadexG-100层析,测得分子量为130000d和131000d,由两个分子量略有差别的亚基组成.对木瓜蛋白酶有强烈抑制作用,对胰蛋白酶无作用。α-螺旋结构含量高。     

玉米巯基蛋白酶抑制剂的纯化及部分性质

从玉米种子纯化的两种巯基蛋白酶抑制剂（ＣＰＩ－Ｉ和ＣＰＩ－Ⅱ）分子量分别为９５００和１３０００,经们都只抑制巯基蛋白酶的水解活性,而对丝氨酸蛋白酶则无抑制作用,属于巯基蛋白酶水解抑制剂,它们在ｐＨ３．０～１１．０或１００℃温度范围内保有１００％的抑制木瓜蛋白的抑制活性,表明在这些外界条件下其分子非常稳定。     

艾滋病毒蛋白酶异位抑制剂体系的分子动力学研究

对艾滋病毒蛋白酶异位抑制剂体系和活性位抑制剂体系进行8 ns的分子动力学模拟,用MM-PBSA方法分别计算了抑制剂与蛋白酶的结合自由能。异位抑制剂体系中抑制剂与蛋白酶的结合自由能为-90.30 kcal/mol,活性位抑制剂体系中为-59.58 kcal/mol。在异位抑制剂体系中分子片段4DX卡在蛋白酶的exo位,使蛋白酶活性位点附近残基的活动范围减小,有利于抑制剂被束缚在活性位点附近。异位抑制剂使体系刚性更强,更稳定,抑制剂与蛋白酶的结合更为牢固。     

菠萝蛋白酶的基本性质研究

本文介绍了菠萝蛋白酶的紫外吸收光谱、分子量、米氏常数 K_■、激活剂等抟影响,以及最适的 pH 和温度、热失活情况等基本性质.实验表明菠萝蛋白酶为非金属酶;发现不同来源的菠萝蛋白酶的最适 pH 为中性,都具有一定的耐热性.     

变性剂和巯基修饰对黄精凝集素Ⅱ构象和活性的影响

采用圆二色谱、荧光光谱，研究了黄精凝集素Ⅱ（Polygonatum cyrtonema Hua.LectinⅡ,PCLⅡ）在4mol/L和6mol/L盐酸胍中，以及巯基修饰后，其活性和分子构象的变化关系，研究结果表明：PCL Ⅱ是一种稳定的蛋白质，巯基剂虽不影响其活性，但可使其分子构象发生变化，去除修饰剂后其结构部分能够恢复。在4mol/L盐酸胍中，PCL Ⅱ活性及构象可发生很大变化，去除盐酸胍后其活性恢复；6mol/L盐酸胍中，呈现典型的无规卷曲构象，活性完全丧失，去除盐酸胍后活性仍不能恢复，表明活性中心已遭到不可逆的破坏。     

赤小豆胰蛋白酶抑制剂抑制人体精子顶体蛋白酶的动力学

通过一系列酶促反应动力学的研究，结果表明赤小豆胰蛋白酶抑制剂对人体精子顶体蛋白酶（Ａｃｒｏｓｉｎ）有较强的不可逆竞争性抑制作用．其Ｋｍ和Ｋｉ值分别为１．８６×１０－３ｍｏｌ／Ｌ和２．１×１０－５ｍｏｌ／Ｌ．     

转番茄蛋白酶抑制剂Ⅱ基因烟草植株的培育及其抗虫特性分析

将分离的番茄蛋白酶抑制剂Ⅱ基因cDNA序列tin2和含有一个109bp内含子的基因组DNA序列tin2i,分别构建成植物表达载体pBCT2和pBT2.然后通过农杆菌介导转化烟草叶片外植体,获得了两类转基因烟草植株.分子生物学检测和胰蛋白酶抑制剂活性分析结果表明,tin2序列和tin2i序列都能够在转基因烟草中正确表达.抗虫活性检测结果显示,转tin2i序列的烟草植株的抗虫活性高于转tin2序列的烟草植株,推测这可能与tin2i序列中内含子的存在有关.     

运用圆二色谱研究酶与化合物相互作用的机理

介绍远紫外圆二色光谱数据计算蛋白质二级结构的原理、方法、实验技术。应用圆二色谱原理、方法、实验技术研究α-葡萄糖苷酶与化合物的相互作用,初步提出酶被化合物抑制的机理。     

固体材料中的磁圆二向色性

本文应用经典电磁场论,从 Lorentz 电子运动模型出发,结合有效场概念推导了磁光介质磁圆二向色性∈的色散关系,以及∈与有效场 H_i 和介质厚度 L 的关系。在正常色散区引入有效消光系数η概念,分析了∈与磁圆振双折射θ的相互关系。将推得的∈和θ表达式与用量子力学理论在双能级跃迁模型上得到的∈和θ表达式作了比较分析,阐述了线宽Γ和能级分裂△对∈和θ作用的微观机理。实验上测量了(BiTm)_3(FeGa)_5O_(12)磁光单晶薄膜的磁光旋转谱,以及∈、θ与 He、膜厚 h 的关系,并结合其吸收光谱作了相应分析。实验结果与理论分析符合较好。     

马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因克隆和结构分析

以马铃薯基因组ＤＮＡ为模板并基于天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因的ｃＤＮＡ序列所设计的两个引物，通过ＰＣＲ扩增得到６６６ｂｐ的天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因编码区，并将此片段克隆到ｐＵＣ１８的ＳｍａＩ位点．序列分析结果表明该基因除去末端一终止密码子外其可译框架编码２２１个氨基酸残基，前导肽包括３２个氨基酸残基，故该抑制剂的成熟蛋白由１８９个氨基酸组成，第６７位的精氨酸为抑制胰蛋白酶的活性中心．与ｃＤＮＡ相比核苷酸的同源性为９４．３％，氨基酸的同源性为９０％．基因ＤＮＡ无内含子．     

探索叶绿素诱导圆二色性起源的人造模型

探索叶绿素诱导圆二色性起源的人造模型刘海洋１）黄锦汪１）彭斌１）田王宣２）计亮年１）（１）中山大学化学系，广州５１０２７５；２）兰州大学应用有机化学国家重点实验室）关键词双卟啉，诱导圆二色性，叶绿素模型分类号Ｏ６１１．６，Ｏ６１４．２４１圆二色（Ｃ...     

Circular Dichroism Analysis of the Effect of Metalic Ions on Structure of Colagen Molecules

ＣｉｒｃｕｌａｒＤｉｃｈｒｏｉｓｍＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅＥｆｆｅｃｔｏｆＭｅｔａｌｉｃＩｏｎｓｏｎＳｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆＣｏｌａｇｅｎＭｏｌｅｃｕｌｅｓ＊ＺｈａｎｇＸｉｕｆａｎｇ（张秀芳），ＧｏｎｇＹａｎｄａｏ（公衍道），ＤｏｕＪｉａｎｇａｎｇ（...     

Sporothriolide电子圆二色谱的理论计算及其绝对构型的确定

Sporothriolide(6-己基-3-亚甲基四氢呋喃[3,4-b]呋喃-2,4-酮)最早是从Sporothrix sp.(孢子丝菌)中发现的一种抗真菌化合物。经核磁共振谱图解析,发现它是一个聚酮化合物;其化学结构中含有3个手性碳中心;并具有两种相对构型,即(3a S,6R,6aR)和(3aR,6S,6a S)。为了确定绝对构型,采用含时密度泛函方法,在MPW1LYP/6-31G(d,p)水平上计算了电子圆二色谱。通过与实测谱图的比对,其绝对构型被确定为(3a S,6R,6aR)。五元环的左手构象和右手构象产生了镜像对称的电子圆二色谱,表明五元环的构象翻转对其圆二色谱具有重要影响。此外,溶剂甲醇与sporothriolide之间的分子间氢键导致了低于14.1 nm的Cotton效应偏移,及低于75 cgs的峰强度的增强,说明溶剂化效应对sporothriolide的圆二色谱影响不大。     

马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因5′上游调控区的分离和序列分析

利用单一特异引物聚合酶链反应技术，将马铃薯ＤＮＡ中天冬氨酸蛋白酶抑制剂家族一成员的５′上游区分离，并克隆进ｐＵＣ１８质粒ＳｍａＩ位点中．用３２Ｐ中标记的单一特异引物──ＰｒｉｍｅｒＡ为探针，经斑点杂交得一阳性克隆．ＤＮＡ测序获得含有马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因５′上游区的插入物的核苷酸序列．从这序列结构中见到ＴＡ富含区，并发现典型的调控序列ＴＡＴＡ和ＣＡＡＴ．此上游序列与国外所得到的天冬氨酸蛋白酶抑制剂的上游区相比较在序列和ＴＡＴＡ及ＣＡＡＴ盒的位置上有着很大的不同．     

马铃薯蛋白酶抑制因子特性的研究

本文研究了马铃薯蛋白酶抑制因子的稳定性及其对胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的抑制能力,结果表明：该抑制因子对胰蛋白酶活性的抑制作用较弱,最大抑制程度为６５％;对胰凝乳蛋白酶活性的抑制作用较强,抑制程度最高可达９５％以上,并且,它对ｐＨ及温度的变化均具有较强的稳定性．     

芽孢杆菌嗜热蛋白酶的性质研究

对芽孢杆菌嗜热蛋白酶的性质进行了研究.该酶的分子量为32kD,最适作用pH为9 0,最适作用温度为85℃,具有良好的pH稳定性(在60℃时,pH稳定范围为6 0～11 0;在80℃时,pH稳定范围为6 0～10 0)和热稳定性(90℃时酶活的半衰期为20min).钙离子和有机溶剂能提高该酶的热稳定性,而EDTA和PMSF则能抑制该酶活性.