阻滞和非阻滞品系小鼠早胚体外培养的比较

收集阻滞品系昆明（Kunming,KM）小鼠和非阻滞品系B6C3F1小鼠受精卵,以及KM小鼠和B6C3F1小鼠交叉交配所得受精卵,进行体外培养,研究阻滞品系小鼠早胚体外发育阻滞原因。结果表明,卵母细胞内在因素对子一代早胚体外发育的能力影响较大,即体外培养是否发生2-细胞阻滞与卵母细胞有关。     

小鼠胚胎细胞数量的观察

本试验观察了不同时期小鼠胚胎的细胞数含量。结果表明，由早期桑椹胚至孵化囊胚，其胚胎细胞数含量由２０士５．８逐渐增加１２１．２±１６．７，且显示与胚胎发育阶段不同而不同。     

小鼠2—细胞期胚胎细胞电融合的研究

为了探索核移植克隆动物技术中的细胞融合参数，进行了小鼠２－细胞期胚细胞的电融合试验。直流电场强度为２ｋＶ／ｃｍ，脉冲过程４０μｓ时，效果较好，可以获得７０．５％的融合率和６４．５％的发育率，进一步提高电场强度，裂解死亡率也明显提高；采用非电解质溶液作为融合液。     

8-细胞期显微注射获得高嵌合率的2n及4n小鼠囊胚

本实验通过对8-细胞期2n或4n胚胎进行单细胞显微注射单个IPS,结果可以获得高嵌合率的胚胎,2n和4n胚胎的嵌合率分别达到86.0%±8.4%和70.4%±18.1%,相比囊胚注射更易操作,此实验为进一步制备高嵌合率的小鼠做准备.     

不同体外培养条件对牛体外受精胚胎质量影响的研究

研究探讨了不同体外培养条件下牛体外受精胚胎的发育速度及囊胚细胞数，从而了解不同体外培养系统对牛体外受精胚胎质量的影响，实验一中伴体外受精卵分别在ＳＯＦ＋牛输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ）和ＴＣＭ１９９＋ＢＯＥＣ两种培养系统内培养，在这两种培养条件下囊胚发育率分别为２２．２％和２１．２％，囊胚细胞数分别为１１３．３±５．０和９７．９±８．３，受精后第６～９ｄ的囊胚出现率分别为４０．１％，３７．０％，１９．     

昆明小鼠体外受精卵体外发育的研究

分别以TYH和T_6为受精用培养液,将昆明小鼠附睾精子获能培养1小时后与超排卵子进行授精,受精率分别为70.2%和65.3%.将体外受精卵分别在Whitten,Whitten 输卵管上皮,Whitten 输卵管上皮 EDTA,TCM199,TCM199 输卵管上皮和TCM199 输卵管上皮 EDTA中进行培养,授精后24,48,72小时观察发育情况,结果Whitten和TCM199以及分别在其内添加输卵管上皮不能维待2细胞胚的进一步发育;当在Whitten和TCM199中分别同时加入输卵管上皮和EDTA时,2细胞、4细胞胚的发生率明显高于其它四种处理组,且分别有84.1%和81.6%的2细胞胚可克服2细胞阻滞,发育至桑椹胚.     

昆明小鼠胚胎输卵管移植技术研究

目的通过研究不同输卵管胚胎移植方法、不同细胞类型及适宜胚胎的数量对移植后妊娠率和产仔率的影响,旨在提高小鼠胚胎移植效率。方法分别将1-细胞、2-细胞和8-细胞胚胎、移入发情的假孕KM雌鼠的输卵管,选择最适宜的胚胎类型用以研究最合理的胚胎移植数量,以及比较输卵管伞移植和膨大部移植两种方法的优劣。结果2-细胞胚胎移植后的妊娠率显著高于1-细胞和8-细胞处理组（66.67%vs25%,33.33%,P〈0.05）;每只小鼠输卵管移植25个2-细胞胚胎后的产仔率显著高于15个和35个两处理组（36%vs16.67%,10.71%,P〈0.05）;采用输卵管壁切口移植的妊娠率和产仔率显著高于输卵管伞移植（50%vs75%,38.9%vs49.3%,P〈0.05）。结论采用25枚左右的2-细胞期胚胎通过输卵管壁切口移植的方法可以取得较高的输卵管移植成功率。     

甘薯胚性悬浮系的建立及其细胞生长特性研究

徐薯18叶片接种在附加2mg/L,4-D的MS固体培养基上，形成了质地松散的胚性愈伤组织，胚性愈伤组织在附加1mg/L,2,4-D的MS液体培养基中进行悬浮培养，建立了增殖迅速、分散度良好的具有较高体胚分化能力的细胞悬浮系。小型细胞团（直径小于350μm）以2％－4％的接种量转移到无激素MS液体培养基中，可分化出大量体胚。在继代初期，悬浮系pH值呈下降趋势，细胞处于旺盛分裂时期，导致悬浮系鲜质量、干质量、细胞紧实体积（PVC）的显著升值；4d以后，pH值逐渐回升，细胞分裂缓慢而体积增长迅速，导致鲜质量、PVC增加而干质量少有变化；6d以后pH值继续回升而细胞分裂和生长受到明显抑制。     

牛体外受精胚胎与输卵管上皮细胞和卵丘细胞的共同培养

采用四种方法以对牛体外精胚进行培养，以便了解牛输卵上皮细胞和卵丘细胞对牛体外受精胚发育的影响。其中方法１是输卵管上皮细胞培养法，２是卵丘细胞培养法，３是输卵管上皮细胞＋卵丘细胞培养法，４是输卵管上皮＋ＥＧＦ培养法，实验１采用方法１、２和３进行培养，结果采用方法３的囊胚发育率为１９．２％，显著低于采用方法１的整胚发育率。实验２采用方法１、２和４进行培养，结果采用方法１和４的囊胚发育分别为１９．４％和     

用小鼠单个MⅡ卵和2-细胞期胚胎构建cDNA文库

阶段特异性cDNA文库的构建和筛选是一种分离和克隆早期胚胎特异表达基因的有效方法.本研究利用小鼠单个MⅡ卵母细胞及发育至2-细胞的胚胎分别构建了cDNA文库.滴度分别为:6.5×106、7.2×107,基因片段平均长度为250-1500bp并用β-actin验证了文库的可靠性.这种利用单胚胎构建cDNA文库的方法,不仅解决了胚胎研究材料受限制的问题,而且在材料的发育时间上更加精确,更能反映胚胎发育的规律,是研究早期胚胎发育基因表达以及克隆胚胎发育相关基因的一种有效手段.     

小鼠孤雌生殖的胚胎干细胞的初步研究

比较去透明带孤雌桑葚胚和留透明带孤雌囊胚、体内受精胚胎、体外受精胚胎在饲养层上囊胚的扩张率、岵壁生长率．结果表明去透明带孤雌桑葚胚比留透明带孤雌囊胚的扩张率显著（p〈0．05）提高,而贴壁率则极其显著地（p〈0．01）提高,此外前者还发生增殖．但孤雌胚胎的囊胚扩张率、贴壁率和增殖率均极其显著地（p〈0．01）低于体内受精胚胎和体外受精组;体内受精胚胎的体外发育最佳．说明去透明带孤雌桑葚胚比留透明带孤雌囊胚更利于在饲养层上贴壁生长,为建立孤雌生殖的胚胎干细胞系提供了基础．     

Aberrant DNA methylation patterns in cultured mouse embryos

Mouse early embryos undergo genome-wide demethylation and remethylation events during pre-implantation development. Abnormal methylation reprogramming is thought to be associated with development arrest. Using immunofluorescence staining with an antibody against 5-methylcytosine (MeC), we examined the genome methylation patterns of mouse embryos cultured in vitro. The results did not show the difference in staining patterns between development-blocked two-cell embryos that cultured in vitro and the two-cell embryos that were freshly collected from the donor mice. But in vitro-arrested morulae displayed a strong positive staining when compared to the morulae freshly collected from the donor mice. At the blastocyst stage, although most embryos showed the expected methylation patterns, with highly stained inner cell mass (ICM) and weekly stained trophectoderm (TE), a proportion of embryos were dimly stained in both ICM and TE. These results indicated that the methylation profile of the embryos could be changed by culturing in vitro when the embryos were in the transition from morulae to blastocyst.     

成年小鼠成纤维细胞体外培养

成年小鼠皮肤成纤维细胞可从尾部取材用组织块培养法进行原代培养,添加血清的M 199(E arle′s)和低糖的DM EM均能较好的满足原代细胞的生长.两种培养液中细胞增殖的速度无明显差异.用0.25%胰蛋白酶消化小鼠尾尖原代培养物,上皮细胞与成纤维细胞有明显的敏感度差别.经控温控时消化传代,可将上皮细胞与成纤维细胞分离纯化.     

体外受精——胚胎移植在不孕症治疗中的应用

对 6 0例不孕症患者采用GnRH -a FSH HCG超促排卵方案治疗 ,应用HTF培养基培养胚胎。采样 6 0个取卵周期 ,5 8个周期进行胚胎移植。移植周期妊娠率达34.5 %。从临床效果可见 ,体外受精—胚胎移植是解决输卵管因素不孕最直接的方法     

2种红豆杉的离体胚培养

建立了2种红豆杉的离体胚培养和植株再生系统.结果表明,4℃保存和流水冲洗能够在一定程度上破除红豆杉胚的休眠,不同培养基对种胚培养的影响没有明显的差别,经过低温处理的种胚萌发率由41.7%提高到69%,成苗率由33.3%提高到44.8%;流水冲洗预处理对种胚萌发也有促进作用,处理2 d后种胚的萌发率和成苗率都有明显的提高.     

精子和酒精对小鼠卵母细胞激活的比较

对不同卵龄的小鼠卵母细胞被精子和酒精激活后的激活率进行了比较。结果显示,卵母细胞对常规的体外受精和酒精的人工激活的激活率存在卵龄的差异。注射hCG后15～24h的卵母细胞容易被酒精的人工刺激所激活,20h卵龄的卵母细胞激活率最高,平均为81．6％,且速即卵裂率也最高,平均为48％,卵龄更大的卵母细胞激活率降低,而13h的卵母细胞难以被酒精激活。另一方面,13～15h的卵母细胞容易被精子激活而受精,卵龄较大的卵母细胞在体外难以被精子激活受精。这表明,精子和酒精对卵母细胞的激活机制有所不同。     

久效磷对小鼠早期胚胎体外发育的影响

采用小鼠早期胚胎的体外培养技术,研究了久效磷对小鼠着床前胚胎发育的影响。结果表明,剂量低于0.22mmol/L对小鼠早期胚胎无明显作用,剂量为0.34mmol/L时,70.6％的8细胞胚胎能发育至囊胚,剂量达0.45mmol/L,对小鼠早期胚胎有显著的毒害作用,只有5.7％可以发育至囊胚。在经久效磷处理的小鼠早期胚胎电镜照片上可以看到,细胞内网架结构保持完好,线粒体被破坏,数量变少,空泡变大、增多,细胞内不同结构对久效磷的敏感性有一定差异。