番薯过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

从番薯皮中分离和纯化番薯过氧化物酶,对其酶学性质进行表征,分析了温度、pH对酶促反应的影响,考查了酶的热稳定性、酸碱稳定性.分离纯化过程包括匀浆、水提、双水相萃取、Sepharose CL-6B凝胶层析、Phenyl Sepharose 6 fast flow疏水层析、Con A Sepharose 4B亲和层析.经纯化的番薯过氧化物酶比活力为6 930 U/mg,SDS-PAGE显示一条带,分子量为34 000,RZ值为2.酶反应的最适pH在5.5附近,最适温度为70℃;在中性偏碱性条件下酶的稳定性非常高,60℃保温1 h,酶活力残余60%.结果表明番薯过氧化物酶是一种良好的耐酸碱、耐热过氧化物酶.     

濒危植物桫椤过氧化物酶的分离纯化与性质

将齿叶黑桫椤叶片提取液经硫酸铵盐析、透析、DEAE-琼脂糖凝胶柱层析和Sephacryl S-200凝胶柱层析分离得到纯化的POD,其纯化倍数为26.29,回收率为27.04%;通过SDS-PAGE法测得POD的分子量为43000D;通过IEF-PAGE法测得POD的等电点为4.55;齿叶黑桫椤POD最适pH在4左右;最适温度在45℃左右;Km值在最适温度45℃、最适pH4的条件下为0.07 mol/L。     

烟草过氧化物酶Ⅰ的分离纯化及部分光谱特性研究

烟草过氧化物酶同工酶Ⅰ (TOPⅠ )的分离纯化过程 ,主要包括匀浆、超声破碎、过滤、(NH4) 2 SO4分级沉淀、DE 5 2纤维素阴离子交换层析、SephadexG 75凝胶层析、DEAE SephadexA 5 0阴离子交换层析 .经纯化的TOPⅠ ,纯化酶的比活力为 482 6U/mg ,在SDS PAGE上显示出一条蛋白带 ,分子量在 2 1 0 0 0左右 ,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI$CTOF MS)测得TOPⅠ分子量为 2 1 888.5 ,等电点pI为 3.5 ;光谱学分析揭示 ,在 40 2nm处有一典型的Soret带 ,在 498nm和 636nm处有特征吸收峰 ,表明TOPⅠ为一含血红素的酸性蛋白酶 .酸度对TOPI的在紫外可见区的特征吸收峰及荧光光谱均产生一定的影响 ,反映了TOPⅠ分子独特的光谱学特性     

灵芝漆酶的分离纯化及其部分酶学性质研究

将灵芝（Ganoderma lucidum）漆酶经过Sephadex G-75和DEAE-Sepharose Fast Flow两步纯化,获得具有3个同工酶的组分,并且纯度提高了81倍,酶活回收率高达83.9%。以ABTS为底物,漆酶最适pH值是2.2～2.6,在pH值4.6～7.8范围内稳定;最适温度45℃,在低于45℃时较稳定。大部分金属离子、酸根离子对灵芝漆酶普遍有抑制作用,除盐可以提高漆酶活力。     

苦瓜过氧化物酶的提取分离及性质测定

从苦瓜(Momordica charantia L.)中分离和纯化过氧化物酶(POD),分别测定其最适pH值、最适温度、热稳定性、底物浓度对酶活性的影响。结果表明:苦瓜过氧化物酶以邻苯二胺为底物时λmax=425nm,Km=4.6×10-3,Vmax=0.137unit/s,最适pH值为4.6,最适温度是50℃。在温度为50℃时过氧化物酶的酶活力最大,酶活性较高。在温度为60℃以上时过氧化物酶的失活率升高,在温度为70℃以上时过氧化物酶基本失活。抗坏血酸和半胱胺酸对过氧化物酶有明显的抑制作用,其失活率分别达到94%和92%;Al3 的抑制作用稍弱,过氧化物酶的失活率为69%;EDTA的抑制效果最不明显,过氧化物酶的失活率仅为13%。     

地衣芽胞杆菌产纤溶酶的分离、纯化及其酶学性质研究

以地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WBL-3进行固体发酵生产纤溶酶.通过生理盐水浸提、离心去除菌体、硫酸铵分级盐析、透析、离子交换层析和凝胶过滤层析对酶进行分离纯化,SDS-PAGE电泳检测酶的分子量大小,并对该纤溶酶的酶学性质进行研究.结果表明:经凝胶过滤层析后,纯化倍数为33.19,回收率12.39％;SDS-PAGE电泳检测为单一蛋白条带;酶学性质分析表明:酶的最适反应温度为55℃,稳定性随着温度的升高而降低;最适反应pH为8.5,pH7-10范围内酶活稳定性较高;Mg2+对该酶有微弱的激活作用,Cu2+、Ag+、Fe3+、Hg2+、Pb2+对酶有较强的抑制作用.本研究为开发新的溶栓药物提供了新的选择.     

海洋来源褐藻胶裂解酶分离纯化及酶学性质研究

以假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.zb7-4)发酵制备褐藻胶裂解酶粗酶液,采用弱阴离子DEAE交换层析分离褐藻胶裂解酶,分析纯化褐藻胶裂解酶Alg L的酶学特性.结果表明:Alg L的表观分子质量约为32 ku,比活力为(208.26±5.87)U·mg-1;其最适反应pH为7.0,在pH为6.0~10.0范围内稳定性较好,保温1 h仍能保持80%以上的相对酶活力;最适反应温度50℃,在40℃保温30 min,其残余酶活力高于80%;Cu2+、Cr3+、Co2+、Ba2+、Sr2+、Hg2+对该酶具有不同程度的抑制作用,Hg2+抑制作用最为明显;该酶具有较好的盐耐受性,在3 mol·L-1Na Cl反应体系中保温2 h,仍残余66%酶活力.动力学参数Km、Vmax、Kcat测定表明,该酶对聚古罗糖醛酸钠(PG)亲和力较高,为偏好聚甘露糖醛酸钠(PM)裂解作用的双功能酶.     

一种新型血栓溶酶的分离纯化及其性质

中国根霉23＃的发酵液经离心除菌、硫酸铵分级盐析、SephadexG-25凝胶过滤、SephdexG-75凝胶过滤层析、DEAE-纤维素柱层析等步骤，得到一种凝胶电泳均一的血栓溶酶。通过等电聚焦实验测得其等电点pI＝4.2。该酶在pH7.0～8.0较稳定。50 ℃保持30 min血检溶酶活力无明显变化。     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶的纯化与性质

用硫酸铵分级沉淀,凝胶过滤色谱,离子交换色谱等分离技术,对黑曲霉(Asper gillusniger)β-葡萄糖甙酶进行分离纯化,共得到4种酶组分(Ⅰ-la、Ⅰ-b、Ⅰ-lc、Ⅲb),经凝胶电泳鉴定均为单一带,Ⅰ-la、Ⅰ-lb、Ⅰ-lc、Ⅲb的最适pH分别为5.0、5.5、5.0、5.5,均在pH2.0～7.0之间稳定,最适温度分别为65、55、60、50℃;保温1h时的半失活温度t(1/2)分别为68、58、61、52℃,SDS-凝胶电泳法测得Ⅰ-la、Ⅰ-lb、Ⅰ-lc、Ⅲb的分子量分别为77000、67000、73000、43000,聚丙烯酰胺等电聚焦法测得四者的等电点分别为6.0、5.7、5.2和4.4.在所测定的化学试剂中,Ag~+、Hg~(2+)和Cu~(2+)对这4个酶组分均有较强的抑制作用,EDTA、SDS和脲对酶各组分也有明显的抑制作用。     

硫酸盐还原菌氢化酶的分离纯化及酶学性质研究

硫酸盐还原菌氢化酶上清液经硫酸铵沉淀、透析、DEAE 52阴离子交换层析和Sephadex G-150凝胶过滤层析纯化出氢化酶,纯化倍数为34.7,酶回收率为34.1%.对纯化酶性质进行研究,结果表明:该酶是由分子量为46KD和34KD的两个亚基构成的总分子量为80KD的αβ异二聚体;酶催化最适温度和pH值范围分别为45℃和6.5～8.5,在34~55℃和pH=6～9.2范围内具有较稳定的催化放氢活力;光谱扫描分析和激活剂及抑制剂测定表明该酶属含铁硫中心的唯铁氢化酶.     

甘薯品种岩8-6凝集素的分离纯化及其性质

甘薯品种岩8－6的叶片组织依次经硫酸铵分级沉淀,甲壳素亲和层析及Sephadex G-75分离纯化得到一种凝集素（IPomoea Batatas Lectin,简称IBL）,纯化的IBL电泳显示一条蛋白质着色带,IBL的亚基相对分子质量为47000,IBL对兔红细胞有凝集作用,凝血活性可被D－果糖明显抑制,IBL对热不稳定,加热到70度时,活性完全丧失,IBL对碱敏感,IBL含有16种氨基酸,富含Asp和Glu,中性糖含量为5．07％。     

Ti质粒对甘薯叶片和愈伤组织的转化

用根癌农杆菌菌株T_(37)和B_6S_3感染甘薯叶片和愈伤组织,在无激素的MS培养基上诱发产生了转化愈伤组织。两菌株对愈伤组织的转化率明显高于对叶片的转化率。电泳结果表明,转化组织中均具有LpDH或NpDH活性,证明Ti质粒上的T-DNA已转移到甘薯细胞的基因组中。同时还进行了转化组织的过氧化物同工酶分析。     

非洲高淀粉甘薯品种Tanzania的再生研究

研究了一个非洲高淀粉甘薯品种Tanzania的胚状体再生途径.将去腋芽的茎段在含有不同生长素浓度(0~2mg/L)MS培养基上置于暗处,经过6~8周诱导出了胚性愈伤组织.Tanzania品种的胚性愈伤组织诱导频率较低,平均为13.4%,而对照Huachano品种为43.3%.Tanzania品种胚性愈伤组织由于生长素种类的不同而呈现不同的质量,形态和颜色特征.当诱导条件优化后,Tanzania品种茎尖在含1mg/L的4-fluorophenoxyacetic acid(4-FA)的培养基上,胚性愈伤组织诱     

甘薯糖蛋白的分离、纯化和结构分析

采用二乙基氨基乙基52和葡聚糖凝胶G100柱层析法,从甘薯中分离纯化甘薯糖蛋白,并对其进行结构分析．用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检验纯度和分子质量;根据β-消除反应判断糖肽键的连接方式;利用气相色谱法分析单糖组成;通过红外光谱推断糖苷键类型．研究结果表明,甘薯糖蛋白是以共价键连接而成的结合蛋白,呈白色粉末状,易溶于水,分子质量约为62ku,属O-连接方式,含有β-糖苷键和典型酰胺羰基结构,蛋白质含量为12．01％,糖链部分含有岩藻糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖．     

Primary Structural Characterization of Phospholipid Hydroperoxide Glutathione Peroxidase

IntroductionBoth physico-chemical properties and functions ofproteins are based on their primary structure.Theoretical analysis of the primary structure ofproteins will give the structural characteristics ofthe same kind of proteins and provide ideas forfurther experimental research. More than 2 0native or deduced phospholipid hydroperoxideglutathione peroxidase (PHGPX) proteins werefound;three of which were cloned from rice,momordica and radishes in our laboratory[1 ,2 ] .There is a need to…     

氯嘧磺隆标准品的合成、纯化与表征

利用 2 -乙氧羰基苯磺酰胺与草酰氯反应 ,得到 2 -乙氧羰基苯磺酰基异氰酸酯 ,再与 2 -氨基 -4-氯 -6 -甲氧基嘧啶进一步反应 ,合成氯嘧磺隆 .采用柱层析法对合成的氯嘧磺隆粗品进行纯化 ,所得标准品经元素分析 ,1H NMR,MS,IR确定为目标化合物 ,HPLC检测纯度为 99%以上 .     

芽孢杆菌WF63脂肪酶分离纯化及酶学性质

芽孢杆菌WF63脂肪酶发酵上清液经硫酸铵沉淀、Sephaery1 S200柱层析、CMSephrose FF柱层析,得到纯化的脂肪酶,纯化倍数为9.45倍,活性回收率为4.27%.对该酶性质研究表明:该酶水解橄榄油的最适温度为50℃,最适pH为8.0,在60℃以下和pH4~10之间有很好的稳定性.K+,Mg2+对该脂肪酶的水解活性有促进作用,而Na+,Mn2+,Ca2+对脂肪酶则没有显著的促进作用,Fe2+对酶活的抑制作用不明显.浓度为0.1%时,Triton X-100对脂肪酶活力有明显促进作用;Brij 35,Tween-80对酶活力的影响不明显;离子型表面活性剂SDS则表现出抑制作用.     

甘薯近缘野生植物的开花特性研究

对2个甘薯野生种和4个甘薯种间体细胞杂交种的开花性及其特征特性进行总结:甘薯种间体细胞杂种“北农5501”、“北农5521”、“北农5522”、“北农5502”和6倍体野生种(I.trifida)在重庆容易开花,日单株开花数分别为10.7,9.1,7.0,4.9,5.4朵,而4倍体野生种(I.littoralis)不易开花,开花数仅为1.4朵.表明4个种间体细胞杂种和6倍体野生种的形态特征更接近于甘薯品种.