正常人脐静脉内皮细胞的原子力显微镜观察

目的:利用原子力显微镜(AFM)在单细胞水平分析正常人脐静脉内皮细胞的形貌特征和机械性质,为了解内皮细胞结构与功能的关系奠定基础.方法:新鲜人脐静脉内灌注质量分数为0.25%胰蛋白酶消化,获得人脐静脉内皮细胞(HUVECs),M199培养基进行培养,免疫细胞化学检测内皮细胞第Ⅷ因子的表达.将体外培养的HUVECs用质量...     

体外人脐动脉平滑肌细胞不同培养方法的应用研究

探索人脐动脉平滑肌细胞（human umbilical artery smooth muscle cell,hUASMC）体外培养稳定的模型。取人脐动脉，分别用贴块法、贴块＋酶解法进行原代培养，以免疫细胞化学的方法对细胞进行鉴定。结果显示：贴块法成功培养出平滑肌细胞，免疫细胞化学染色显示细胞内a-Actin阳性表达。贴块＋酶解法反复多次均失败。说明对于人脐动脉平滑肌细胞的原代培养，贴块法是一种较实用的方法。     

人类心房肌细胞的原代培养与鉴定

探索人心房肌细胞的原代培养方法。取心外科手术患者(5/12~57岁,平均6.5岁)常规切除的右心耳,利用酶消化法原代培养心房肌细胞并进行光镜和免疫细胞化学鉴定。结果急性分离的细胞成圆形,1 d后开始贴壁。贴壁的心肌细胞部分聚集成团,成梭形或三角形。随着培养时间延长,细胞逐渐向四周伸展。免疫细胞化学分析显示90%以上的细胞呈横纹肌肌动蛋白染色阳性。说明利用酶消化法成功培养出人心房肌细胞,为深入研究人心房肌细胞基因与功能打下了基础。     

慢病毒载体介导SV40LT致人脐静脉内皮细胞永生化

为成功分离与鉴定人原代脐静脉内皮细胞,用猿猴病毒40大T抗原(SV40LT)异位表达建立永生化人脐静脉内皮细胞系。将含SV40LT cDNA片段的慢病毒载体,转染人原代脐静脉内皮细胞,连续传代培养。通过形态、细胞免疫组织化学、RT-PCR及管状成形试验进行原代及转染后细胞形态学和功能学鉴定及检测SV40大T抗原表达。结果SV40LT转染后的人脐静脉内皮细胞为扁平多角形或短梭状,呈单层铺路石状镶嵌排列。特异性表达Ⅷ因子、KDR、SV40LT表达,并具有管状成型能力。说明成功分离与鉴定永生化的脐静脉内皮细胞系,为后续血管靶向治疗奠定了基础。     

原代HUVECs分离培养关键影响因素分析

内皮细胞与心脑血管病变和癌症发生密切相关,人脐静脉内皮细胞(HUVECs)是最佳的研究工具.针对影响原代HUVECs培养的主要因素提出解决办法,建立稳定可靠的原代HUVECs培养方法.方法是取自剖宫产手术的脐带,消化法分离HUVECs,M199培养传代.针对消化条件、培养液、培养瓶/板处理、传代时间、胰酶浓度等因素考察.结果表明培养瓶/板预先2%明胶包被,采用I型胶原酶分离消化,含10%胎牛血清的M199培养,24h后换液,细胞生长至紧密后传代,O.05%胰酶传代消化,取4～5代细胞用于实验.认为经过控制原代HUVECs培养的主要影响因素,建立了不易污染、纯活度高的原代HUVECs培养方法.     

人脐静脉内皮细胞培养液的选择

目的:筛选出人脐静脉内皮细胞(HUVECs)原代、传代最适培养液.方法:0.02%II型胶原酶灌注脐静脉消化15min获得细胞,用不同的培养液培养.24h后观察细胞贴壁状况,细胞计数法得到贴壁细胞数量;内皮细胞标志性蛋白vWF进行细胞鉴定.传代培养后,用MTT法比较不同培养液对HUVECs活力的影响.结果:用含ECGS、20%FBS的ECM组进行原代培养,可获得贴壁细胞数量最多的HUVECs,且与其他组间有显著差异;用含30ng·mL-1 VEGF165、10%FBS的M199进行传代培养,HUVECs活力较ECM组无明显差异.结论:HUVECs原代、传代培养分别选用优化后的培养液,既保证原代HUVECs的质量和数量,又使传代培养成本降低60.8%.     

脐静脉内皮细胞的提取与形态学观察

目的 获取胶原酶灌注法提取脐静脉内皮细胞的有效方法.探讨内皮细胞培养过程中生长因子的添加浓度,并对内皮细胞进行形态学观察及鉴定.方法 采用血球计数法对在不同时间和不同胶原酶浓度下提取的脐静脉内皮细胞进行计数.同时采用MTT法探讨了生长因子(Endothe-lia Cells Growth Supplement,ECGS)的浓度对脐静脉内皮细胞生长的作用,并用倒置显微镜和HE染色法观察了脐静脉内皮细胞的形态,Ⅷ因子免疫组化对获取的脐静脉内皮细胞进行鉴定.结果 当提取时间为10～30 min时,随着时间的增加,内皮细胞的提取数量增加;当胶原酶的浓度为0.1%～0.3%时,消化的脐静脉内皮细胞数量逐渐增加.ECGS的浓度为30μg/mL时,促进脐静脉内皮细胞的生长,种植4天后细胞进入平台期.脐静脉内皮细胞体外培养形态为"铺路石"状.Ⅷ因子免疫组化鉴定为阳性.结论 胶原酶灌注法是一种快速而有效的获取血管内皮细胞的方法,可以为组织工程血管内皮化提供充足的种子细胞.     

兔和牛角膜上皮、基质及内皮细胞体外培养和增殖的研究

目的：研究兔和牛角膜上皮、基质及内皮细胞等3种细胞体外培养的生物学特性，探索和改进这3种细胞体外培养的方法，为组织工程角膜奠定基础。方法：采用消化法分离培养兔和牛角膜上皮、内皮和基质细胞，观察细胞贴壁生长情况，同时对生长良好的原代细胞进行消化传代，进一步观察传代细胞的形态和生长情况。结果：角膜上皮、内皮和基质细胞均在培养48～72h贴壁生长，培养6～9d能形成良好单层，细胞形态典型，进行多次传代后细胞仍维持原有形态和功能，获得的细胞能进行长期培养。结论：为兔和牛角膜上皮、内皮和基质细胞体外培养，提供了简单高效经济的方法。     

树鼩胸主动脉血管内皮细胞的分离培养与鉴定

目的 体外分离、培养树鼩(Tupaia belangeri)胸主动脉血管内皮细胞(vascular endothelial cells, VECs),并对培养细胞进行初步鉴定, 为新型实验动物树鼩的应用研究提供体外模型。方法 无菌取幼龄树鼩胸主动脉,采用组织块培养法和胰蛋白酶、胶原酶连续消化法分别进行树鼩胸主动脉血管内皮细胞分离,经完全培养液培养,倒置显微镜观察细胞形态,并用抗Ⅷ因子抗体进行荧光染色鉴定细胞。结果 经组织块培养法分离培养的血管内皮细胞,3 d有细胞贴壁,7 d后细胞从组织块中大量长出,15 d汇合为单层;酶消化法所得细胞12 h即贴壁,3～7 d生长较快,12 d汇合成单层,镜下观察发现细胞呈典型的铺路石状;两种方法分离所得原代细胞经体外培养传代,6代内,细胞生长均良好;利用血管内皮细胞标志分子Ⅷ因子进行免疫荧光鉴定后确定为阳性。结论 本研究采用简便的方法成功分离到了树鼩胸主动脉血管内皮细胞,为血管内皮细胞相关研究提供了实验模型。     

半乳糖凝集素PPL13的表达纯化及免疫组织化学研究

在E．coli M15中表达纯化半乳糖凝集素PPL13(placenta protein lectin13)，制备兔抗人PPL13多克隆抗体。以免疫组织化学法检测PPL13在人胎盘及脐静脉的表达情况．结果显示PPL13分布在胎盘及脐静脉的内皮细胞中．提示PPL13可能与胎盘及脐静脉内皮细胞的功能相关．     

Establishment of the model of vascular endothelial cell membrane chromatography and its preliminary application

A model of vascular endothelial cell membrane chromatography was established by using an ECV304 cell membrane stationary phase (ECV304 CMSP) prepared by immobilizing the ECV304 cell membrane onto the surface of silica carrier. The surface and chromatographic characteristics of ECV304 CMSP were studied. The active component from Caulophyllum robustum was screened by using the model of vascular endothelial cell membrane chromatography. The interaction between the active component and membrane receptor was determined by using a replace experiments. The effect of the active component was tested by using tube formation of ECV304 cell. The results indicated that the model of ECV304 cell membrane chromatograph (ECV304 CMC) can stimulate the interaction between drug and receptor in vitro and the retention characteristics of taspine as active component was similar to that of model molecule in the model of ECV304 CMC. And therefore, taspine acted on VEGFR2 and inhibited the tube formation of ECV304 cell induced by VEGF. This model can be used to screen definite active component as a screening model.     

研究内皮细胞形状对大分子跨血管壁的传质的影响

血管内皮细胞形状与血液动力学流动形态密切相关。本文研究在不同流动状态下,内皮细胞形状与动脉硬化密切相关的大分子传质影响。比较了处于高剪切区的拉长了的内皮细胞和处于低剪切的圆形细胞的传质特性。所得结果支持了目前占压倒优势的所调低剪切观点,即早期动脉硬化常发生在流动分离或有逆流的低剪切区。     

Progress in studies of angiostatin and its anti-tumor effects

Angiostatin is a 38 ku circulating angiogenesis inhibitor purified from the serum and urine of mice bearing a murine Lewis lung carcinoma. It is regarded as an internal fragment of plasminogen containing the first 4 Kringle structures. In vitro, angiostatin specifically inhibits endothelial cell proliferation. In vivo, it inhibits angiogenesis and suppresses the growth of such primary tumors as Lewis lung carcinoma and hemangioendotheliolma in mice.     

大鼠血管内皮细胞siRNA转染条件的优化

目的:旨在优化siRNA转染大鼠血管内皮细胞的转染条件.方法:将0.75μL和1.5μL的脂质体LipofectamineTM3000分别与20、40、60、80nmol带荧光标记的FAMsiRNA组合,转染6、12、18、24h后,用荧光显微镜计数阳性细胞率、MTT法检测各浓度条件下内皮细胞的存活率,筛选最优转染条件.结果:(1)转染12h后,用荧光显微镜检测20、40、60、80nmol各组,均可观察到绿色荧光(2)siRNA浓度为60nmol/L,脂质体为1.5μL的组合转染效率最高,继续增加siRNA的浓度,转染效率提高不明显.(3)转染时间超过24h,各组细胞荧光减弱,细胞死亡率显著增加.结论:结果表明,以1.5μL LipofectamineTM3000与60nmol/L的siRNA浓度组成转染混合物转染12h可以实现对大鼠血管内皮细胞高效转染并保持较高的细胞活性.     

冠状动脉平滑肌细胞和内皮细胞膜电位对冠状动脉血管紧张性的影响

冠状动脉平滑肌细胞和内皮细胞的膜电位对冠状动脉血管紧张性的调节具有极其重要的意义.平滑肌细胞和(或)内皮细胞的超极化可导致冠状动脉舒张,平滑肌细胞和(或)内皮细胞的去极化可导致冠状动脉收缩.各种不同因素刺激平滑肌细胞和(或)内皮细胞可使它们产生超极化或去极化的反应从而导致冠状动脉血管舒张或收缩.掌握这一机制可以在临床治疗当中很好的控制患者的冠状动脉血流.     

丝素包埋SPA成膜的理化性能和生物效应研究

研究将丝素溶液包埋金黄色葡萄球菌A蛋白(staphylococcal protein A)(简称A蛋白或SPA ),制成不溶性SPA丝素膜.用粘附生长因子RGD(序列为GLY-ARG-GLY-ASP-SER-PRO-L YS)的抗体IgG结合IgG到该丝素膜的表面,再将RGD结合到不溶性SPA丝素膜表面RGD抗体IgG 上,制备成RGD-IgG-SPA丝素膜.用酶联免疫吸附试验(简称ELISA)方法,证明RGD-IgG -SPA丝素膜是稳定的.种植培养血管内皮细胞(vascular endothelial cell,简称EC细胞) 于该改性丝素膜的表面,用四甲基偶氮唑盐比色方法(简称MTT法)检测细胞的生长,证明改性丝素膜能有效地促进EC细胞的生长.     

Human endothelial senescence induced by IL-1α in vitro

Interleukin 1(IL-1) is an important proinflammatory cytokine that causes pleiotropic effects. Vascular endothelial cells stimulated by IL-1α can lead to the inflammatory response. Reactive oxygen species (ROS) are also generated at the site of inflammation and serve as an important factor against foreign invader. Here we report that long-term stimulation of human vein endothelial cells with IL-1α can accelerate their senescence associated with β-galactosidase activity. The flow cytometric analyses showed that most of the induced cells entered G0-G1 phase. DNA damage was more severe in senescent cells by comet assay. The induced cells by IL-1α had higher levels of ROS and malonyldialdehyde (MDA), lower activity of antioxidant enzymes and lower capacity of total antioxidant systems than control, which led to cell damage and cell degeneration, that is to say, which contributed to cellular senescence. Our results gave a direct proof to a new hypothesis-"the inflammation hypothesis of aging" on cellular level, and also provided a basis for the study on anti-aging and aging-related diseases.     

人纤溶酶原Kringle 1 结构域在大肠杆菌中的克隆、表达和纯化

Ｐｌａｓｍｉｎ(ｏｇｅｎ)ｗａｓｋｎｏｗｎｆｏｒｉｔｓｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙａｓｗｅｌｌａｓｉｔｓω ａｍｉｎｏｃａｒｂｏｘｙｌｉｃａｃｉｄ ｂｉｎｄｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ.Ｏｎｅｈｉｇｈａｎｄ 4ｌｏｗ ａｆｆｉｎｉｔｙｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎｈｅａｖｙｃｈａｉｎ .Ｃｏｎｃｕｒ ｒｅｎｔｌｙ 5ｈｉｇｈｌｙｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｔｒｉｐｌｅｌｏｏｐｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｎａｍｅｄａｓｋｒｉｎｇｌｅｄｏｍａｉｎｓｗｅｒｅｆｏｕｎｄｆｏｒｍｉｎｇ…     

软骨血管生成抑制因子抑制血管生成及其抗肿瘤作用的研究

测定了小牛软骨血管生成抑制因子对血管内皮细胞细胞毒作用,对内皮细胞骨架系统及其运动迁移的抑制效应,对小鼠肿瘤生长的对抑制效应。     

桑叶对乳腺癌肿瘤血管内皮细胞抑制作用的研究

本文通过流式细胞仪(FCM)和酶联免疫吸附法(ELISA)来研究桑叶对乳腺癌肿瘤血管内皮细胞(ECs)细胞凋亡、细胞周期及内皮细胞生长因子受体-2(VEGFR-2)的影响.FCM分析表明,桑叶中有效成分能够诱导异常增殖的内皮细胞凋亡,使细胞周期停滞在DNA合成期,有效阻止内皮细胞的有丝分裂(P0.05);ELISA法结果表明,VEGFR-2的表达受到明显的抑制(P0.05).以上结果证实桑叶能够有效促进乳腺癌肿瘤血管内皮细胞的凋亡、影响其细胞周期的分布、抑制乳腺癌肿瘤血管内皮细胞生长因子受体-2的表达,对其增殖具有抑制作用.