昆虫病毒包涵体在银溶胶中表面增强拉曼散射光谱的研究

昆虫病毒包涵体在银溶胶中表面增强拉曼散射光谱的研究＊刘新民鲍培谛（物理系）黄天荃（分析测试中心）伍铁桥（生物工程系）利用表面增强拉曼散射（ＳＥＲＳ）光谱研究生物大分子的工作已有很大的进展，但对昆虫病毒的研究截至１９９１年都未见报道［１］．我们从１９９...     

DpNPV多角体蛋白拉曼光谱的研究

研究了马尾松毛虫核型多角体病毒多角体蛋白的拉曼光谱。结果表明，ＤｐＮＰＶ多角体蛋白的二级结构主要为α螺旋和无规卷曲，后者含有大量的β回析，多角体蛋白的侧链Ｃ－Ｃ－Ｓ－Ｓ－Ｃ－Ｃ－构型为反式－扭曲－反式。     

氯离子对DpNPV包涵体表面增强拉曼散射谱的影响

研究了氯离子对马尾松毛虫核型多角体病素（ＤｐＮＰＶ）包涵体在Ａｇ胶听表面增强拉曼散射（ＳＥＲＳ）谱的影响，在Ａｇ胶中加入Ｃｌ＾－离子，可增强ＳＥＲＳ效应，能改变包涵体膜蛋白的ＣＯＯ＾＿和ＮＨ２基团在Ａｇ表面上的吸附状态，至使Ｐｈｅ残基侧链接近Ａｇ表面，其低波数峰红移达２６ｃｍ＾－１，并对所得实验结果进行了分析和讨论。     

SlNPV多角体蛋白基因的序列分析

ＳｌＮＰＶ多角体蛋白基因的开放读码框为７５０ｂｐ,编码２４９个氨基酸的蛋白质,是目前所发现的最长的多角体蛋白基因．ＳｌＮＰＶ多角体蛋白Ｍｒ＝２９２３６,其氨基酸序列与其它核多角体病毒的多角体蛋白氨基酸序列有高度同源性．     

形成多角体家蚕重组病毒通用转移载体构建

从家蚕核型多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）通用转称载体ｐＢＫ２８３和粉纹夜蛾核型多角体病毒（ＴｎＮＰＶ）转移载体ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３系列出发，构建了一个７．２ｋｂ能形成多角体且可以用于克隆含不同读码框外源基因的ＢｍＮＰＶ通用转移载体系列ｐＢＭＸ３．ｐＢＭＸ３系列以ＢｍＮＰＶ多角体结构基因上游的１．９ｋｂ和下游１．３ｋｂ的片段作为与ＢｍＮＰＶ基因组进行体内同源重组的同源序列；ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３系列的ＳＸＩＶ双启动子用于外源基因的表达；ＡｃＮＰＶ的多角体基因作为重组病毒形成多角体的基因．以ＢｍＮＰＶ－ＬａｃＺ（ｏｃｃ－ｇａｌ＋）为出发株病毒，ｐＢＭＸ３系列的重组病毒筛选有ｏｃｃ＋和ｇａｌ－两个遗传标记     

棉铃虫细胞系SFE—HA—8212的克隆化及对HaSNPV受纳性提高的克隆系的建立

用细胞临界生长密度法对棉铃虫蛹卵巢细胞系ＳＦＥ—ＨＡ—８２１２进行克隆化，获得８株克隆细胞系．各株克隆细胞系各自的形态较为均一，但相互间在形态、生长特性、对病毒受纳性等方面有很大差别，其中一株ＣＳ细胞对棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）的受纳性明显高于ＳＦＥ—ＨＡ—８２１２细胞，形成多角体的细胞比率、多角体的产量、游离病毒粒子的产量及多角体蛋白的产量均有提高，是研究和应用ＨａＳＮＰＶ的有效系统．     

昆虫病毒PrGV包涵体表面增强拉曼散射光谱的研究

通过对菜粉蝶颗粒体病毒包涵体（ＰｒＧＶ－ＩＢ）,在不同酸碱度银胶溶液中表面增强拉曼散射（ＳＥＲＳ）光谱的研究表明,该样品分子在溶液中以阴离子［ＮＨ２ＲＣＯＯ＾－］构型存在。其增强作用为电磁增强和分子增强共同作用的结果,并以分子增强为主。作者还对谱带的归属,吸附形式,吸附基团的几何状态以及侧链振动随溶液酸碱度的变化等有关问题进行了讨论分析。     

AcNPV增强子hr5增强HBsAg基因表达的研究

用形成包涵体（ＯＯＣ＋）并能利用人工合成启动序列和多角体ＸＩＶ启动子表达外源基因的转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３将多角体基因、乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢＳＡｇ）基因和苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）的增强子ｈｒ５部分序列同时插入无包涵体的粉纹夜蛾核型多角体病毒ＴｎＮＰＶ－ＳＶＩ－Ｇ基因组中，得到两株高效表达ＨＢｓＡｇ基因又形成包涵体的重组病毒ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ３５－ＯＣＣ＋和ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ２６－ＯＣＣ＋．对重组病毒的酶切鉴定、ＤＮＡ斑点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析证实，外源基因及其相应的启动子和增强子序列已正确插入病毒基因组中．插入顺序中，ｈｒ５增强子是插入ＨＢｓＡｇ基因下游，多角体基因与ＨＢｓＡｇ基因方向相反．１２５Ⅰ－固相放射免疫检测和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果表明，ＨＢｓＡｇ基因在昆虫离体细胞中得到高效表达并保留了抗原活性．ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ２６－ＯＣＣ＋和ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ３５－ＯＣＣ＋表达的ＨＢｓＡ吕蛋白与没有插入增强子序列的重组病毒ＴｎＮＰＶ—ＨＢｓ８５－ＯＣＣ＋的比较，分别提高了４０％和４６％．     

GrNPV多角体蛋白的表面增强拉曼光谱研究

草原毛虫核型多角体病毒(简称GrNPV)是四川大学生物工程系首次分离发现和命名的一种昆虫病毒,现已用GrNPV研制成一种复合的病毒杀虫剂,研究GrNPV的分子结构是很有必要的工作,我们已研究了GrNPV包涵体的SERS谱,这里是研究GrNPV多角体蛋白的SERS谱.GrNPV多角体蛋白的荧光背底强,未能得到较好的常规拉曼谱,但我们在pH3·5下获得了具有一增强效果的SERS谱,并作了分析和讨论.     

具全期启动子盒的杆状病毒高效表达载体的组建与应用

通过ＰＣＲ扩增，得到苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａＮｕｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ，ＡｃＮＰＶ）具早晚期启动子元件的ｐ３５基因启动子，将其插入到杆状病毒转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３多克隆位点上游，使之与ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３质粒中的人工合成后期启动子（ＰＳｙｎ）、多角体ＸＩＶ启动子（ＰＸＩＶ）串联构成早期、晚期、极晚期能持续启动外源基因表达的转移载体质粒ｐＳＸ３５．将ｐＳＸ３５用于组建含ＨＢｓＡｇ基因并形成多角体的重组ＴｎＮＰＶ，ＨＢ－ｓＡｇ基因的表达量显著提高，表达时间亦明显提前，从而实现了外源基因在杆状病毒表达系统的全期、高效表达．ｍＲＮＡ引物延伸试验结果显示，Ｐｐ３５在重组病毒中可产生２套转录本，分别于病毒感染的早期和晚期起始ＨＢｓＡｇ基因的表达．     

硒（Ⅳ）—碘化物—维多利来蓝4R体系共振瑞利散射,二级散？…

在０．１６～０．３２ｎｏｌ／Ｌ的盐酸溶液中，维多利亚蓝４Ｒ（ＶＢ４Ｒ）的共振瑞利散射（ＲＲＳ）、二级散射（ＳＯＳ）和倍频散射（ＭＦＳ）均十分微弱。在过量碘化物存在下，当硒（Ⅳ）氧化Ｉ＾－形成Ｉ３＾－配阴离子并进一步与ＶＢ４Ｒ反应形成离子缔合配合物时，３种散射均大大增强并产生相应的散射光谱。最大ＲＲＳ波长位于５８２ｎｍ，另在３２０ｎｍ，４１０ｎｍ，４５２ｎｍ，４７０ｎｍ，８００ｎｍ和９４０ｎｍ处有强     

棉铃虫细胞系SFE—HA—8212的克隆化及对HaSNPV受纳性提高的…

用细胞临界生长密度法对棉铃虫蛹卵巢细胞系ＳＦＥ－ＨＡ－８２１２进行克隆化，获得８株克隆细胞系。各株克隆细胞系各自的形态较为均一，但相互间在形态，生长特性，对病受毒纳性等方面有很大差别，其中一株Ｃ８细胞对棉铃虫单粒包埋型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）的受纳性明显高于ＳＦＥ－ＨＡ－８２１２细胞，形成角体的细胞比率，多角体的产量，游离病毒粒子的产量及多角体蛋白的产量均有提高，是研究和应用ＨａＳＮＰＶ的有效系     

东莨菪碱在薄层色谱原位的傅立叶变换表面增强拉曼光谱研究

利用高效薄层色谱（ＴＬＣ）分离技术与表面增强拉曼散射技术（ＳＥＲＳ）的结合，获得了分析东莨菪碱成分的新方法．ＳＥＲＳ结果表明，在ＴＬＣ原位约８μｇ样品就可获得东莨菪碱分子的主要振动特征谱带．通过光谱检测揭示出ＳＥＲＳ与固体光谱的异同，并指明了东莨菪碱分子与银溶胶的吸附模式．ＴＬＣＳＥＲＳ使高效分离与指纹鉴定结合，可对化学成分进行高灵敏度检测     

大肠杆菌β－半乳糖苷酶基因在小菜蛾细胞中的表达

用携带大肠杆菌β－半乳糖苷酶（β－ｇａｌ）基因的杆状病毒转移载体．ｐＡｃ３６０－β－ｇａｌ与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ经钙磷沉淀法共转染小菜蛾细胞系（ＢＣＩＲＬ－ＰＸ２－ＨＮＵ２,Ｐｘ）,利用Ｘ－ｇａｌ空斑检测分析,β－ｇａｌ基因成功地插入ＡｃＮＰＶ基因组中,得到重组病毒Ａｃ－β－ｇａｌ,重组病毒在Ｐｘ细胞中表达出受ＡｃＮＰＶ多角体蛋白基因启动子控制的具有生物活性的外源基因表达产物──β－ｇａｌ．     

一甲基硫脲与弱吸附无机阴离子的共吸附模型

用常规Ｒａｍａｎ光谱、电化学原位表面增强拉曼散射光谱（ＳＥＲＳ）和时间分辨ＳＥＲＳ光谱（ＴＲＳＥＲＳ）研究了甲基硫脲（ＭＴＵ）分别在ＨＣｌＯ４、Ｈ２ＳＯ４、ＨＮＯ３以及它们两两混合的酸性介质中与一种或两种弱吸附无机阴离子的共吸附行为。发现ＭＴＵ是以Ｓ端按σ配全吸附键的方式,在－０．２～－０．７Ｖ的较正电位区间偏向于甲基一侧倾斜吸附在银电极表面上;在－０８～－１．２Ｖ的较负位区间,则偏向于甲基一侧斜     

槲皮素的TLC—SERS研究

本报告了利用高效薄层色谱（ＴＬＣ）分离技术和表面增强拉曼散射技术（ＳＥＲＳ）的结合，建立了分析中草药有效成分槲皮素的析方法。ＳＥＲＳ结果揭示出，在ＴＬＣ原位约３μｇ样品就可获得槲上素的主要振动特征谱带，从而阐明了ＴＬＣ－ＳＥＲＳ的有效结合，可对中草药化学成分进行高灵敏度的检测。     

从虫体提纯HBsAg基因表达产物的新方法

感染含乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）基因的粉纹夜蛾重组核型多角体病毒ＴｎＮＰＶ－Ｈｈｓ８５－ＯＣＣ￣＋的粉纹夜蛾幼虫先经匀浆澄清处理后，再用单克隆抗体亲和柱层析的方法提纯ＨＢｓＡｇ蛋白．提纯的蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，出现３条电泳带，分子量分别为２４ＫＤ，２７ＫＤ和４５ＫＤ．用此法从虫体提纯ＨａｓＡｇ基因表达产物，具有简单、快速、高效的特点．     

棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒诱发草地贪夜蛾细胞株Sf的程序性死亡

棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）能够诱发草地贪夜蛾Ｓｆ细胞株发生早期死亡现象．依据死亡过程的细胞形态变化，ＤＮＡ降解的梯状电泳特征以及对不同抑制剂敏感性的差异，可以初步断定该死亡现象为程序性死亡．早期死亡伴随着病毒ＤＮＡ复制与子代病毒生成的中止．同时发现野生型ＡＣＭＮＰＶ的共感染能够有效地抑制早期死亡的发生，并对抑制作用的可能性机制进行了探讨．     

大尺寸充气体黑洞中激光等离子体相互作用

本文是根据Ｒ．Ｅ特内、Ｒ．Ｌ考夫曼等人之作编译而成。大尺寸充气体黑洞具有类似于国家点火装置（ＮＩＦ），所预期的等离子体条件，可用来测量受激布里渊散射（ＳＢＳ）。上述等离子体是热的（３ｋｅＶ），电子密度高，处于似稳态，而在大于２ｍｍ长度上是均匀的。另外，还介绍了类似的ＮＩＦ照射条件，低ＳＢＳ背光的观测。     

东莨菪碱在薄层色谱原位的傅立叶变换表面增强拉曼光？…

利用高效薄层色谱（ＴＬＣ）分离技术与表面增强拉曼散射技术（ＳＥＲＳ）的结合,获得了分析东莨菪碱成分的新方法,ＳＥＲＳ结果表明,在ＴＬＣ原位约８μｇ样品就可锋得东莨菪碱分子的主要振动特征谱带,通过光谱检测揭示出ＳＥＲＳ与固体光谱的异同,并指明了东莨菪碱分子与银溶胶的吸附模式,ＴＬＣ－ＳＥＲＳ使高效分离与指纹鉴定结合可对化学成分进行高灵敏度检测。