谷物中玉米赤霉烯酮化学发光免疫分析方法的建立

开发了一种管式磁微粒化学发光免疫分析法来测定谷物中玉米赤霉烯酮(ZEA).使待测样品中的ZEA、辣根过氧化物酶标记的ZEA(HRP-ZEA)与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗ZEA单克隆抗体发生竞争性免疫反应,以抗FITC抗体包被的磁微粒(MPS)作为固相抗体及分离相.对免疫反应的条件及各项参数如:稀释度、温育时间、磁微粒及发光底物的体积等进行了测定和优化.在最优条件下,该法的线性范围是0.5~50 ng·mL~(-1),检测灵敏度为0.1 ng·mL~(-1);批内变异和批间变异均小于15%,回收率在89.2%~105.2%之间.通过本法对40例谷物样品检测,同时与商品化试剂盒进行对比检测,结果无明显差异.     

HPLC切换波长法同时测定舒肝健胃丸中五种活性成分

建立HPLC法同时测定舒肝健胃丸中五种成分(芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、和厚朴酚与厚朴酚)含量的方法.采用高效液相色谱法,色谱柱为TC-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),检测波长为0~10 min,230 nm,10~20 min,283 nm和20~55 min,294 nm;流动相为乙腈-水溶液,梯度洗脱0~15 min,22%~22%;15~25 min,22%~72%;25~35 min,72%~72%;35~40 min,72%~90%;40~50 min,90%~90%;50~55 min,90%~22%;流速为1.0 m L·min-1;柱温为25℃.芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、和厚朴酚与厚朴酚的质量浓度分别在0.672~67.2 mg·mL~(-1)、3.124~312.4 mg·mL~(-1)、2.3712~237.12 mg·mL~(-1)、0.44~440 mg·mL~(-1)和1.196-1~119.6 mg·mL~(-1)范围内呈良好的线性关系.测定舒肝健胃丸中芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、和厚朴酚和厚朴酚的含量分别为0.68 mg·g~(-1)、2.85 mg·g~(-1)、6.75 mg·g~(-1)、1.09 mg·g~(-1)和1.09 mg·g~(-1).本方法简单方便、准确可靠、专属性强,为舒肝健胃丸药品的质量控制提供了方法依据.     

胭脂红与dsDNA相互作用在有无纳米TiO_2掺杂的碳糊电极上的比较研究及其应用(英文)

与裸碳糊电极相比,胭脂红与dsDNA的嵌插作用在TiO_2掺杂的碳糊电极上得到增强.这是由于纳米TiO_2的存在,增加了胭脂红的电子传递速率.基于胭脂红与dsDNA的强嵌插作用,当dsDNA的浓度在21.24~127.44μg·mL~(-1)时,胭脂红的氧化还原峰电流下降值与dsDNA的浓度成正比,检测限为16.04μg·mL~(-1).而在裸电极上,dsDNA的浓度范围为31.76~74.34μg·mL~(-1),检测限只有30.32μg·mL~(-1).对于这两种电极,胭脂红与dsDNA的结合常数分别是4.92×10~8,6.41×10~7L·mol~(-1),结合比均为1∶2.因此,胭脂红与dsDNA在纳米TiO_2掺杂的碳糊电极嵌插作用被用于测定合成样品中的dsDNA,平均回收率在96.02%~102.5%.     

UPLC-MS/MS法同时测定云南黄草乌中滇乌碱、粗茎乌头碱甲和塔拉萨敏的含量

用UPLC-MS/MS法同时测定云南5种不同产地黄草乌中滇乌碱、粗茎乌头碱甲和塔拉萨敏的含量.采用安捷伦C18色谱柱,以乙腈-甲酸(φ=0.1%)水溶液为流动相进行梯度洗脱,电喷雾离子源正离子多反应监测模式进行质谱分析,采用多个特征离子对和外标标准曲线法对3种生物碱进行定性、定量分析.滇乌碱、粗茎乌头碱甲和塔拉萨敏在质量浓度1~100 ng·mL~(-1)范围内线性良好(r≥0.9990),检出限(LOD)分别为0.01、0.01 ng·mL~(-1)和0.02 ng·mL~(-1),定量限分别为0.03、0.04 ng·mL~(-1)和0.07 ng·mL~(-1);准确度均大于90%,日内及日间精密度均小于5%.5种黄草乌中均检出滇乌碱、粗茎乌头碱甲和塔拉萨敏,但不同产地黄草乌中3种成分的含量差异较大.     

大鼠血浆中利托那韦的HPLC法测定及其药动学研究

目的:建立了测定大鼠血浆中利托那韦的高效液相色谱法,并用于利托那韦在大鼠体内的药动学研究.方法:大鼠血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,采用高效液相色谱法测定血浆中利托那韦的含量.选用Agilent Zorbax XDB-C18色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液(55∶45)为流动相,流速1.0mL·min~(-1);柱温35°C,检测波长254nm.结果:该方法下大鼠血浆中利托那韦在0.05-5μg·mL~(-1)浓度范围内线性关系良好;高、中、低浓度下日内和日间RSD值均小于5%;提取回收率在85%~(-1)25%之间;稳定性良好.大鼠灌胃给予利托那韦混悬液(8mg·kg~(-1))后,血浆中利托那韦的药动学参数分别为:Cmax120.30±9.00ng·mL~(-1),Tmax1±0.35h,T1/20.41±0.14h,AUC0-∞624.30±39.88h·(ng·mL~(-1)),AUC0-t789.80±19.73h·(ng·mL~(-1)).结论该方法简单、快速、经济、重复性良好,适用于利托那韦大鼠体内药代动力学的研究.     

紫草素体外抗菌活性的实验研究

目的:本文主要研究紫草主要成分紫草素体外抗菌活性及其抗菌谱.方法:用琼脂平板法测定紫草素的抗菌谱;以左氧氟沙星为阳性对照药,通过试管二倍稀释法检测紫草素最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC).结果:紫草素对多种常见菌株包括革兰阳性菌、革兰阴性菌以及真菌显示出抗菌作用,对金黄色葡萄球菌(MIC为6.25μg·mL~(-1),MBC为25.0μg·mL~(-1))、大肠埃希菌菌(MIC为12.5μg·mL~(-1),MBC为25.0μg·mL~(-1))、白色念珠菌(MIC为1.563μg·mL~(-1),MBC为3.125μg·mL~(-1))、蜡状芽孢杆菌(MIC为1.563μg·mL~(-1),MBC为6.25μg·mL~(-1))、沙门氏菌(MIC为25.0μg·mL~(-1),MBC100.0μg·mL~(-1))的生长有显著的抑制作用.抗菌能力与左氧氟沙星相当.结论:紫草素具有良好的抗菌作用,具有成为抗菌药物先导化合物的条件.     

小球藻在养殖水体内的生长特征及其影响作用

研究小球藻Chlorella vulgaris在养殖水体内的生长特征及其作用。结果显示,在光强4 500 lx,水温25℃条件下,小球藻在养殖水体内呈Lgiatic方式增长,K值为2 543×10~4 mL~(-1),r值为0.591 3,最大可持续产量(MSY)为375.91×10~4 cell·mL~(-1)·d~(-1),在养殖系统内每10~6 cell L~(-1)小球藻的生产力为9.4 J·L~(-1)·d~(-1)。对比实验研究发现,水体营养盐浓度对小球藻密度有一定的影响,罗非鱼苗在自然养殖水体内的最大密度制约作用为4.47 g·L~(-1),小球藻能够有效吸收养殖水体中的氮、磷营养物质,能够改善养殖环境,减轻养殖密度制约作用,提高养殖效果。     

基于纳米金表面等离子体共振光散射法测定视黄醇结合蛋白

采用柠檬酸钠还原法制备了粒径约为12nm的纳米金颗粒,并用其标记视黄醇结合蛋白抗体(anti-RBP).在pH=5.29的KH_2PO_4-Na_2HPO_4缓冲溶液中,纳米金标记anti-RBP可与视黄醇结合蛋白(RBP)发生特异性结合使纳米金颗粒凝集成网格结构,由于纳米金颗粒的表面等离子体共振效应,使其在620nm处共振光散射信号显著增强.C_(RBP)在0.1~60ng·mL~(-1)范围内与共振光散射增强值ΔI_(620nm)线性相关,检出限为0.02ng·mL~(-1),用于定量分析人血清中的RBP,方法简单、灵敏,结果满意.     

HPLC法测定蓝花药中三种活性成分

采用高效液相色谱法同时测定蓝花药中儿茶素、表儿茶素和胡黄连苷Ⅰ含量的实验条件.色谱柱:Agilent TC-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇:0.5%醋酸(梯度洗脱);流速,1.0 m L·min~(-1);柱温:25℃;检测波长:280 nm;进样量:10μL.结果:儿茶素、表儿茶素和胡黄连苷Ⅰ分别在0.036 1~3.61 mg·mL~(-1)、0.008 3~0.83 mg·mL~(-1)和0.003 5~0.35 mg·mL~(-1)范围内呈良好的线性关系.测得蓝花药中儿茶素、表儿茶素和胡黄连苷Ⅰ的含量分别为1.366 4 mg·mL~(-1)、0.221 0 mg·mL~(-1)和0.086 6 mg·mL~(-1).儿茶素平均回收率109.51%,RSD为0.57%;表儿茶素平均回收率109.93%,RSD为0.54%;胡黄连苷Ⅰ平均回收率86.83%,RSD为0.94%.本方法简单方便、准确可靠、专属性强,可用于蓝花药的质量控制.     

免疫亲和柱净化-液相色谱-串联质谱法测定水环境中微囊藻毒素

建立了水环境中微囊藻毒素-LR(microcystin-LR, MC-LR)和微囊藻毒素-RR(microcystin-RR, MC-RR)的免疫亲和柱净化-超高效液相色谱-串联质谱(IAC-UPLC-MS/MS)的分析方法。过滤好的水质加入抗坏血酸防止氧化,混合均匀后将pH调节至中性,经过免疫亲和柱富集和净化后,采用LC-MS/MS测定,采用外标方法定量。以乙腈-0.1%甲酸水溶液(含5 mmol·L~(-1)乙酸铵)为流动相,梯度洗脱分离,电喷雾正离子多反应监测模式监测。结果显示,MC-LR、MC-RR在0.50～20.00 ng·mL~(-1)浓度范围内呈良好线性,线性相关系数均0.999 5,定量限为0.30 ng·mL~(-1)和0.50 ng·mL~(-1),在2.00、5.00和10.00 ng·mL~(-1) 3种添加水平下的加标回收率分别为88.52%～94.83%、84.71%～91.59%,相对标准偏差分别为0.54%～2.27%,0.39%～5.94%。结果表明本方法重现性好,灵敏度高,适合水环境中MC的实际测定。     

DBP与DEHP对稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)的急性毒性评价

为研究水体中DBP与DEHP对生物毒性效应,采用静态试验法进行了DBP、DEHP的鱼类急性毒性实验。结果显示:DBP对稀有鮈鲫的96 h-LC50为6.39 mg·L~(-1),95%置信限为5.68~7.44 mg·L~(-1);DEHP对稀有鮈鲫的96 h-LC502.95mg·L~(-1),DBP与DEHP混合液对稀有鮈鲫的联合毒性效应未见明显的协同作用或拮抗作用。     

纳米银与富里酸对AL细胞增殖及产生RNS/ROS的影响

利用ALamar Blue法和RNS/ROS荧光特异性探针,探讨不同浓度纳米银(nAg,0.1~5μg·mL~(-1))、银离子(Ag+,0.01~0.5μg·mL~(-1))及纳米银与富里酸(FA,10μg·mL~(-1))协同作用对人鼠杂交瘤(AL)细胞增殖及活性氮/活性氧自由基产生的影响及在这一过程中的作用.结果显示:在低浓度(小于等于1μg·mL~(-1))情况下,nAg对AL细胞的毒性作用主要来自于nAg释放的银离子(Ag~+),Ag~+通过诱导胞内RNS的产生,进而产生增殖抑制作用;在高浓度(5μg·mL~(-1))情况下,nAg对AL细胞的毒性主要来自于Ag~+诱导的RNS和nAg本身诱导的ROS二者共同的作用.模拟水环境中存在的FA(10μg·mL~(-1))能够显著降低nAg和Ag~+对AL细胞增殖的抑制作用,并且能显著降低nAg和Ag~+引起的A_L细胞内RNS和ROS的升高作用.     

胭脂红酸ELISA检测试剂盒的制备及应用

为了快速高效检测肉类食品中胭脂红酸含量,制备了胭脂红酸ELISA检测试剂盒,检测了市售肉类样品中胭脂红酸含量,并通过高效液相色谱法进行了验证。结果显示试剂盒的检测限为1 ng/mL,线性范围7. 8～1 150 ng/mL,灵敏度IC50值为95. 2 ng/mL;该试剂盒中的检测抗体对胭脂红的交叉反应率为108. 7%,但与其他4种色素添加剂均未见交叉反应。检测市售肉类样品的批内回收率在79. 1%～103. 1%之间,批间回收率在81. 6%～98. 8%之间;批内、批间试验的相对标准偏差基本小于10%,且与HPLC方法具有良好的一致性(R2=0. 927),说明该试剂盒具有灵敏、准确、简便、快速的特点,为胭脂红酸免疫学快速检测方法的建立提供了技术基础。     

非线性化学指纹图谱法测定软膏剂含量

目的:建立一种应用非线性化学指纹图谱技术测定中药祛痘软膏剂含量的方法.方法:采用非线性化学指纹图谱技术,以诱导时间为评价技术指标,对中药祛痘软膏剂含量进行测定.结果:中药提取物检测范围6~34 mg·mL~(-1),线性回归方程:t=6897-183.6c,R=0.9972,日内RSD为1.08%,日间RSD为1.69%,加样回收率RSD1%,三批样品含量均在98.6~101.5%之间,符合方法学要求.结论:通过方法学考察,建立一种方便、有效、准确的评价中药软膏剂的新方法.     

基于银纳米增强的化学发光法检测对苯二酚

在碱性条件下,银纳米(Ag NPs)对luminol-K3Fe(CN)6化学发光体系具有显著的增强作用.研究发现,对苯二酚(HQ)对luminol-K3Fe(CN)6-Ag NPs化学发光体系具有抑制作用.结合流动注射技术提出了luminol-K3Fe(CN)6-Ag NPs化学发光(FI-CL)灵敏检测HQ的新方法.结果表明,HQ的线性范围为1.0×10-10~1.0×10-7mol·L-1,检出限为3.0×10-11mol·L-1,对5.0×10-9mol·L-1的HQ溶液平行测定11次的RSD为1.4%.将提出的方法分别用于河水和自来水中HQ含量的测定,加标回收率分别为98.0%~100.8%和99.1%~100.4%.结合化学发光光谱,对银纳米增强luminol-K3Fe(CN)6化学发光体系以及HQ对该体系的抑制作用机理进行了探讨.     

基于反应体系的表面增强拉曼光谱快速检测乙基麦芽酚

以铁离子(Fe~(3+))为媒介,鞣酸还原氯金酸制备的金纳米粒子(Au NPs)作为表面增强拉曼散射(SERS)基底,实现比色-散射光谱双响应,快速鉴别食品中的乙基麦芽酚.其中比色法中,对乙基麦芽酚的检测限为0.50 mg·mL~(-1).SERS检测中,利用Fe~(3+)和乙基麦芽酚的络合作用,乙基麦芽酚的最低检测限降低到0.01 mg·mL~(-1),线性范围为0.05～1.00 mg·mL~(-1).该方法使用的仪器简单,操作方便,可对样品中的乙基麦芽酚进行现场直接测定.     

LC_MS_MS法测定木通皂苷D大鼠灌胃给药的生物利用度

建立高效液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)测定大鼠灌胃给药的生物利用度.大鼠随机分为2组,分别尾静脉和灌胃给予100mg·kg-1木通皂苷D,于不同时间点眼眶取血,用LC-MS/MS法检测血浆中药物质量浓度,计算大鼠灌胃给药的生物利用度.结果表明:木通皂苷D线性范围为10~1 000ng·mL-1,最低定量限为10ng·mL-1.准确度与精密度试验结果显示方法日间、日内变异均小于15%,相对偏差为-2.8%~4.6%,低、中、高3个质量浓度提取回收率为95.3%~108.1%.静脉组和口服组的药时曲线下面积AUC0-INF分别为(231 725.98±46 527.21)和(383.63±54.62)ng·h·mL-1,灌胃给药的绝对生物利用度为0.13%.表明木通皂苷D大鼠灌胃给药生物利用度很低.     

东方蜜蜂微孢子虫环介导恒温扩增检测方法的建立

以从重庆酉阳分离到的东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)为研究对象,以该物种16SrDNA作为靶标,设计引物并采用环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术检测东方蜜蜂微孢子虫。实验结果显示,LAMP检测的最佳条件为内引物浓度5μmol·L~(-1),聚合酶用量800U;以研究对象16SrDNA质粒为模板,LAMP检测的最低质量浓度为1.735×10~(-2)ng·μL~(-1),PCR检测的最低质量浓度为1.735×10~(-1)ng·μL~(-1);以研究对象基因组DNA为模板,LAMP检测的最低质量浓度为1.475×10~(-3)ng·μL~(-1),PCR检测的最低质量浓度为1.475×10~(-1)ng·μL~(-1);以研究对象基因组DNA、正常中蜂(Apis cerana)中肠基因组DNA、正常意蜂(Apis mellifera ligustica)中肠基因组DNA、正常家蚕(Bombyx mori)中肠基因组DNA、蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)孢子基因组DNA和中蜂囊状幼虫病毒cDNA作为模板进行检测,其中只有以研究对象基因组DNA为模板时,LAMP扩增才有条带。以上研究提示具有高灵敏度和高特异性的LAMP检测方法是东方蜜蜂微孢子虫检测的一个有效工具,可为后期在养蜂场建立快速有效的检测工具奠定基础。     

高效液相色谱-串联质谱法对贯叶连翘中4种黄酮醇类化合物抗氧化活性的定量研究*

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-ESI/MS)法对芦丁、金丝桃苷、槲皮素和槲皮苷的抗氧化活性进行定量研究。样品用甲醇溶解,采用Hewlett Packard ODS Hypersil C_(18)色谱柱(100 mm×4.6 mm,5μm)、0.1%甲酸水-甲醇为流动相梯度洗脱,流速0.6 m L·min~(-1),柱温25℃;电喷雾源,负离子模式多反应选择离子检测(MRM),用于定性、定量的母离子和子离子分别为m/z 609→300(芦丁)、m/z 463→300(金丝桃苷)、m/z 301→151(槲皮素)、m/z 447→300(槲皮苷),采用外标法进行定量分析。结果表明:芦丁、金丝桃苷、槲皮素和槲皮苷在0.5~1 600 ng·mL~(-1)范围内线性关系良好(R0.998),定量限为0.5 ng·m L~(-1),仪器精密度良好(RSD3.0%),样品反应液在24 h内稳定性良好。本方法具有灵敏度高,分析时间短等特点,相对于其他检测方法,提高了检测的准确性,适用于对贯叶连翘中黄酮醇类化合物抗氧化活性的定量研究。经计算,芦丁、金丝桃苷、槲皮素和槲皮苷对ABTS~(.+)的清除率分别为18.35%、36.28%、41.50%和37.18%。     

废电池中微量铬的检测方法及回收工艺的研究

利用C~(r3 )与二甲酚橙定量显色分光光度法测定废电池中微量铬,通过解剖、酸溶、过滤、沉淀、灼烧等步骤,制备得绿色的产品三氧化二铬,并检测产品三氧化二铬的产率.结果表明,Cr~(3 )工作曲线在0～60μg·25mL~(-1)范围内呈良好的线性关系,表观摩尔吸光系数为2.7394×10~4L·mol~(-1)·cm~(-1),加标回收率为94%～103%.每节电池铬含量为242.2μg,铬的回收率为96.03%,三氧化二铬产率为0.52%.