石刁柏雄性连锁的AFLP及SCAR标记的建立

目的:对石刁柏雌雄株基因组差异进行分析,筛选雄性或雌性连锁的分子标记.方法:利用限制性片段长度多态性技术,设计了多个引物组合,分别对石刁柏雌雄株基因组进行扩增.结果:在使用的72个引物组合中,引物组合E-AAG+M-CAT从雄性基因组中扩增出了一个雄性连锁的标记(MLDA555),该序列长度为555bp,AT含量为59%.Blast检索未发现相似序列.根据该片段序列设计的引物将该标记转化为雄性连锁的大小为523bp的稳定的SCAR标记,经过不同基因型雄性个体的验证证明该标记广泛存在于不同基因型石刁柏雄性个体中.结论:通过AFLP扩增筛选得到了石刁柏雄性连锁的AFLP和SCAR标记,为石刁柏性别决定机制的理解及石刁柏的分子标记辅助育种提供理论资料和技术支持.     

高粱抗丝黑穗病SCAR标记的建立

选用高粱丝黑穗病感病恢复系矮四、抗病恢复系2381R以及二者F2代抗感个体为试验试材,采用CTAB法提取高粱基因组DNA,并应用RAPD筛选技术对高粱基因进行分子标记,选取了100对RAPD随机引物对其进行扩增,有88对引物扩增出条带。分析结果表明:88对引物中S_(405)在抗感品种间扩增出差异谱带。进一步对抗感群体进行分离分析,得出抗丝黑穗病基因重组率为11.7%。将S_(405)扩增出的差异片段进行克隆测序,差异谱带的片段长度为320bp。根据差异谱带的碱基排列顺序,设计特异性引物,然后进行序列扩增,将RAPD分子标记转化为SCAR分子标记,并将该标记命名为S_(405-320),为高粱优良品种的筛选和培育奠定一定的基础。     

与SMV抗性基因Rsa连锁的一个共显性SCAR标记

将ＲＡＰＤ标记转换为ＳＣＡＲ标记是更到更为可靠而有有标记的有效方法,应用集群分离体分析（ＢＳＡ）方法,筛选了９００个１００个碱基随机引物,得到了２个与单显性大豆花叶病毒抗性基因Ｒｓａ连锁的显性ＲＡＰＤ标记ＯＰＡＳ－０６１８００和ＯＰＷ－０５６００,将与Ｒｓａ连锁距离较近的ＯＰＷ－０５６６０克隆并测定ＤＮＡ序列,根据这个序列的两端设计了１对特异的寡聚核苷酸引物,用这对引物进行扩增,在抗感亲本间观察到     

分子标记及AFLP技术

分子标记类型可以基因表达的结果为基础,对基因的间接反映;分子标记则是DNA分子碱基序列变异的直接反映.早期利用限制性内切酶,酶切生物体DNA后来检测不同遗传位点等位变异(RFLP)和以一个碱基顺序随机排列的寡核苷酸序列为引物,利用对基因组DNA随机扩增来鉴别DNA多态性(RAPDs).真核生物基因组中普遍存在的重复序列产生了微卫星(microsatellites)标记技术.而RFLP与RAPDs有机结合形成了有着更为广阔的应用前景的AFLP技术.SNP标记利用大多数基因位点上都会有若干个等位型(alleles)为DNA芯片技术应用于遗传作图提供了基础.     

朝天椒遗传多样性的AFLP标记分析

利用AFLP技术对22份朝天椒材料进行遗传多样性分析.结果显示,9对AFLP引物共扩增出724条谱带,其中97条为多态性条带,占总条带数的13.40%.聚类分析表明,材料间遗传距离GD变幅为0.028～0.677,平均值为0.306;位点多态性信息含量PIC变幅为0.157～0.399,平均值为0.263;在遗传距离GD值0.360水平上,22份朝天椒材料可聚成三大类.AFLP标记揭示出这22份朝天椒材料遗传变异较小,遗传基础比较狭窄.     

基于SCAR标记的20个樱花品种的分子鉴别

以20个广泛栽培与应用的樱花品种为试材,基于特异SCAR分子标记的开发鉴别樱花品种。结果表明:4条SAPD引物和96对SRAP引物分别在20个樱花品种中的扩增得到了33条n SAPD多态片段和13条SRAP多态性片段,其中10条n SAPD和4条SRAP多态片段被成功转化为14个稳定可靠的特异SCAR标记。这14个SCAR标记在20个樱花品种中的分布不同,其中,‘普贤象’、‘松月’、‘御衣黄’、‘关山’、‘大提灯’和‘旭山樱’只有1个SCAR标记,‘郁金’、‘红丰’、‘咲耶姬’、‘朱雀’和‘菊垂樱’有2个SCAR标记,‘市原虎之尾’和‘平野妹背’有3个SCAR标记,‘八重红枝垂’和‘雨情枝垂’有4个SCAR标记,‘红笠’、‘红华’、‘一叶’、‘福禄寿’和‘杨贵妃’则没有SCAR标记。这些SCAR标记可作为品种特异性的DNA指纹,辅助用于20个樱花品种的鉴别,也可用于分子水平建立樱花品种分类鉴定系统。     

石刁柏大孢子发生和发育的细胞学观察

石刁柏的大孢子母细胞发生于花蕾直径约1～2mm时期。大孢子母细胞体积为15×16×21μ。后经减数分裂形成四分孢子,呈直线排列,具极性,合点端的大孢子为功能大孢子,其他三个大孢子退化。由功能性大孢子发育为胚囊。其发育途径为典型的单子叶植物类型——蓼形。石刁柏大孢子发生和发育的细胞学观察是取戮破珠被的胚珠,用果胶酶和纤维素酶混合液处理,分离胚囊,在光学显微镜下附加IF550绿色干涉荧光滤片,进行观察和摄影。     

向日葵Pst Ⅰ和Mse Ⅰ内切酶组合AFLP标记体系的建立及引物筛选

 为建立并优化适合向日葵的Pst Ⅰ 和Mse Ⅰ 组合的AFLP 技术体系, 为下一步构建遗传连锁图谱及开展分子标记辅助育种奠定基础, 对向日葵基因组DNA 提取方法、酶切连接体系和选择性扩增程序的影响因素进行优化, 并对适合向日葵AFLP 分析的引物组合进行筛选。结果表明, 模板DNA 的提取采用改进CTAB 法, 酶切连接采用一步法反应14 h, 在选择性扩增体系20 μL中, Mg²⁺和dNTP 浓度分别为2 mmol/L 和0.3 mmol/L, 选扩引物的浓度为0.6 mmol/L, 预扩增产物最适稀释倍数为30 倍。同时筛选出了稳定且多态性丰富的48 对适合向日葵AFLP 分析的引物组合。     

重楼属植物AFLP实验体系的建立

通过对影响重楼AFLP-银染技术体系的关键因素作对比研究,建立了一套优化的重楼AFLP分子标记体系.优化的关键因素为:1)DNA采用CTAB法提取更适于重楼的AFLP分析,且从幼叶中提取的DNA纯度和质量最高;2)酶切时间为9h时效果最佳;3)选择性扩增时退火温度为56℃;4)从15对引物中筛选出4对进行选择性扩增,得到扩增条带276条,其中多态性带201条(占72.83%).     

芦笋叶中氨基酸含量的测定

利用高效液相色谱法测定了芦笋叶中15种氨基酸含量,结果表明芦笋叶含有多种氨基酸,作为茶饮,芦笋叶是一种很好的保健饮品。     

离体繁殖石刁柏Asparagus officinalis的培养基改良试验

本试验表明,石刁柏(芦笋)的离体繁殖与培养基中激素的种类和用量有密切关系.若在培养基中添加一定量的榔子汁,人参.蜂皇精.效果很好.采用此方法.既提高繁殖效率,又降低成本.方法简便可靠,但应注意掌握离体繁殖的其他条件.     

芦笋汁的抗突变作用

用微核（MN）试验、姐妹染色单体交换（SCE）及精子畸形试验探讨芦笋汁对环磷酰胺（CTX）致突变作用的影响,结果表明,单纯芦笋汁对小鼠骨髓细胞MN和SCE及精子畸形均无明显影响,但一定剂量芦笋汁可使CTX诱发的MN率（6．00％）降低（5．03％－2．66％）,SCE（29．22次／细胞）减少（26．40－13．37次／细胞）,精子畸形率（6．10％）下降（5．12％－2．86％）,均呈现剂量－效应关系。     

盐碱胁迫对芦笋抗氧化酶活性的影响

利用NaCl、Na2CO3、混和盐（NaCl、Na2CO3、NaHCO3、Na2SO4等物质量混合）三种盐,分别以0.1 mol/L、0.2 mol/L、0.3 mol/L三种不同的浓度对芦笋进行胁迫处理,检测其伤害程度和抗氧化酶活性.结果表明,中性盐对芦笋伤害较轻,碱性盐伤害严重,混合盐碱对芦笋的伤害介于中性盐和碱性盐之间;POD、CAT两种抗氧化酶活性的变化规律与胁迫伤害程度相一致,SOD酶活性增加不显著.     

芦笋组培快繁技术优化的研究

利用芦笋杂交F1代种子获得无菌植株,取无菌植株的茎尖、茎段作为外植体,在不同培养基上诱导、增殖和生根,筛选出适宜的诱导培养基为MS 6-BA1.0 mg·mL-1 NAA0.1 mg·mL-1,增殖培养基为MS 6-BA0.5 mg·mL-1 NAA0.1 mg·mL-1,生根培养基为1/2MS IBA1.0 mg.mL-1 KT0.02 mg·mL-1.利用3～5 mm长的芽进行生根培养,生根率最高达到91.7%,炼苗成活率达到90%以上.     

芦笋雌雄性别间同工酶酶谱的比较分析

采用聚丙烯酰胺不连续垂直平板凝胶电泳(PAGE)技术,对芦笋雌雄株叶片中的过氧化物酶(POD)、酯酶(EST)、谷氨酸脱氢酶(GDH)和淀粉酶(AMY)同工酶进行了比较分析.结果表明,芦笋雌株与雄株之间的过氧化物酶及酯酶同工酶酶谱存在显著差异,过氧化物酶在雄株中比在雌株中多了Rf值为0.86的一条酶带;酯酶在雄株中多了Rf值为0.18和0.30的两条酶带.谷氨酸脱氢酶和淀粉酶在雌雄株间具有相同的酶谱带,没有表现出性别差异.     

AFLP分子标记在鉴定海滨锦葵杂交后代上的应用

海滨锦葵是较好的食用和工业利用的盐生经济植物。用 AFLP分子标记对海滨锦葵两对杂交亲本的36个F1 代个体的真伪进行了鉴定。18个AFLP引物对在亲本Hy103×Hh182间扩增出1 100条AFLP带,其中108条是多态带(多态率为9.82%);在亲本Slhy353×Blho301间扩增出1 181个AFLP条带,其中148条是多态带(多态率为12.51%)。实验结果表明:(1)引物对E AAC / M CTC在亲本Hy103×Hh182间扩增出5条父本特征带:401 bp,390 bp,156 bp,137 bp和108 bp,引物对 E AAG/M CTG则产生了7条:457 bp,356 bp,312 bp,251 bp,240 bp,190 bp和76 bp。父本特征带从Hy103×Hh182的8个F1 代个体均扩增出,表明其为真杂种;(2)引物对E AAC/M CTT在亲本 Slhy353×Blho301 间扩增出 5 条父本特征带:440 bp,393 bp,289 bp,162 bp和67 bp,引物对 E ACA/M CAT 则产生了 4 条: 448 bp, 360 bp, 217 bp和 145 bp;父本特征带从Slhy353×Blho301 28个F1 代个体中的26个个体上扩增出,表明其为真杂种,另外2个为假杂种。     

Discovery of a male-biased mutant family and identification of a male-specific SCAR marker in gynogenetic gibel carp Carassius auratus gibelio

Gibel carp (Carassius auratus gibelio) is a uniquely gynogenetic species with a minor ratio of males in natural habitats, but its male origin and sex determination mechanisms have been unknown. In this study, a male-biased mutant family was discovered from the gynogenetic gibel carp, and a male-specific SCAR marker was identified from the mutant family. Normal spermatogenesis was observed in the male testes by immunofluorescence histochemistry. Nearly identical AFLP profiles were observed between males and females, but a male-specific 86 bp AFLP fragment was screened by sex-pool bulked segregant analysis and individual screening. Based on the male-specific AFLP fragment, a total of 579 bp sequences were cloned by genome walking. Subsequently, a male-specific SCAR marker was designed, and the male-specific DNA fragment was confirmed to be steadily transmitted to the next generation and consistently detected only in males.     

芦笋与5种蔬菜品质分析

以通辽地区种植的芦笋与其它5种蔬菜营养品质进行比较,结果表明：芦笋干物质含量显著高于黄瓜、茄子、青椒、芹菜、番茄;可溶性固形物含量与番茄相近,显著高于黄瓜、茄子、青椒、芹菜;可溶性糖含量与黄瓜、青椒、番茄差异不显著,而显著高于黄瓜、芹菜;可溶性蛋白含量低于芹菜,显著高于黄瓜、茄子、青椒、番茄;氨基酸含量显著高于黄瓜、茄子、青椒、芹菜、番茄;Vc含量显著低于青椒,与黄瓜、茄子、芹菜、番茄差异不显著;硝酸盐含量显著低于芹菜,与黄瓜、茄子、青椒、番茄差异不显著.表明芦笋是营养价值极高的无公害绿色蔬菜.