血管内皮生长因子基因反义核酸设计及其对HL60细胞生长的影响

目的:用计算机设计筛选出血管内皮生长因子(VEGF)的高效反义核酸;用实验方法研究VEGF反义核酸对HL60细胞生长的影响。方法:用RNAstructure(version3 7)软件,选择总自由能(Overall△G37)的相对低的反义核酸,共计7条,长度18～20核苷酸,全硫代修饰;细胞培养72h,采用胎盼蓝拒染法观察存活细胞,用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白水平,分析反义核酸对HL60细胞的作用。结果:筛选出6条反义药物对HL60细胞生长有明显抑制作用,其中4条优于阳性对照组(A2);A7组细胞生长抑制率达41 74%。培养液中VEGF蛋白表达抑制率达47 81%。Overall△G37与反义核酸活性密切相关(r=-0 842,P<0 01)。结论:计算机辅助设计有助于获得更好的反义药物,VEGF反义核酸可抑制HL60细胞生长及VEGF蛋白表达,VEGF可能成为白血病治疗的新靶点。     

反义技术—生物技术的第二次浪潮

反义技术是应用反义寡核苷酸来选择性地封闭基因表达的一项新兴的生物技术。它的出现掀起了基础、临床及药物开发领域新一轮的技术革命。简述了反义技术的理论机制、反义核酸的种类、应具备的特性及在相关领域中的应用。     

靶向Livin反义核酸诱导肝癌HepG2细胞凋亡并提高其对卡铂、表柔比星敏感性

目的:探讨靶向livin反义核酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)诱导人肝癌HepG2细胞凋亡并提高卡铂、表柔比星的敏感性。方法:用靶向livin基因反义寡核苷酸(ASODN),随机寡核苷酸(random oligodeoxy-nucleotide,RODN)分别转HepG2细胞,流式细胞术碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期和凋亡情况;Hoechst 33258染色法检测靶向livin反义核酸作用于人肝癌HepG2细胞后其细胞核形态的改变;采用靶向livin反义核酸联合卡铂(CBP)、表柔比星(EPI),观察对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用。结果:PI单染检测显示靶向livin反义核酸处理组S期细胞百分率明显增加,400 nmol/L浓度组为(37.2±1.6)%,存在S期细胞阻滞;不同浓度的livinASODN均可诱导HepG2细胞凋亡,并随着其浓度的增大而凋亡率增高,100 nmol/L、200 nmol/L、400 nmol/L凋亡细胞百分率分别为(13.2±1.7)%,(13.9±2.1)%和(18.9±1.4)%;靶向livin反义核酸作用后出现细胞核固缩、边聚、裂解等细胞凋亡形态学变化;100 nmol/L的靶向livin反义核酸与不同质量浓度的化疗药物(CBP,EPI)联合作用于HepG2细胞48 h,可提高HepG2细胞对这些化疗药物的敏感性,增敏倍数分别为3.61和9.57倍。结论:靶向livin反义核酸可诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,并提高HepG2细胞对CBP,EPI的敏感性。     

分子生物学新技术—反义技术

反义技术是近年发展起来的一种分子生物学新技术。它根据核酸杂交原理设计针对特定靶序列的反义核酸,从而抑制特定基因的表达,目前包括反义RNA、反义DNA和核酶三大技术。该技术的研究具有重要的理论意义和实际意义。     

bcl-2基因反义核酸对HL-60和K562白血病细胞生存的影响

目的：探索ｂｃｌ－２基因反义核酸对白血病细胞生存的影响。方法：主要应用细胞培养和细胞克隆的方法,检测了ｂｃｌ－２基因反义核酸对ＨＬ－６０和Ｋ５６２白血病细胞系生存的影响。结果：ｂｃｌ－２基因反义核酸浓度在２～８μｍｏｌ／Ｌ和６～１２μｍｏｌ／Ｌ分别对ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞的生存有明显的抑制效应,呈剂量－效应关系,二者起效应时间均为第３ｄ;ｂｃｌ－２基因反义核酸浓度为４μｍｏｌ／Ｌ时,对ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞集落形成都有明显抑制效应。结论：ｂｃｌ－２基因反义核酸对白血病细胞生存有明显的影响。     

血管内皮生长因子反义核酸增强HL60和K562细胞对As_2O_3的敏感性

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义核酸能否提高HL60和K562细胞对三氧化二砷(As2O3)的敏感性。方法:采用经筛选所得的最优反义核酸(A7),20个碱基经过全硫代修饰;以脂质体介导转染细胞,反义核酸和As2O3联合作用72h以后,用MTT法检测细胞生长情况,求IC50值;用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白的浓度,用流式细胞仪检测细胞凋亡百分数。结果:VEGF反义核酸可显著降低HL60、K562细胞对As2O3的IC50值,下调VEGF蛋白的表达,增加As2O3诱导的HL60、K562细胞凋亡作用。结论:VEGF反义核酸具有增强HL60和K562细胞对As2O3的敏感性,增强As2O3诱导的HL60和K562细胞凋亡作用;提示内源性VEGF蛋白具有使细胞产生耐药性的作用。     

bcl-2基因反义核酸对 HL-60和K 562白血病细胞生存的影响

目的：探索ｂｃｌ－２基因反义核酸对白血病细胞生存的影响。方法：主要应用细胞培养和细胞克隆的方法,检测了ｂｃｌ－２基因反义核酸对ＨＬ－６０和Ｋ５６２白血病细胞系生存的影响。结果：ｂｃｌ－２基因反义核酸浓度在２￣８μｍｏｌ／Ｌ和６￣１２μｍｏｌ／Ｌ分别对ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞的生存有明显的抑制效应,呈剂量－效应关系,二者起效应时间均为第３ｄ;ｂｃｌ－２基因反义核酸浓度为４μｍｏｌ／Ｌ时,对ＨＬ－６０     

血管内皮生长因子反义核酸增强HL60和K562细胞对As2O3的敏感性细胞对As2O3的敏感性

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义核酸能否提高HL60和K562细胞对三氧化二砷(As2O3)的敏感性.方法:采用经筛选所得的最优反义核酸(A7),20个碱基经过全硫代修饰;以脂质体介导转染细胞,反义核酸和As2O3联合作用72 h以后,用MTT法检测细胞生长情况,求IC50值;用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白的浓度,用流式细胞仪检测细胞凋亡百分数.结果:VEGF反义核酸可显著降低HL60、K562细胞对As2O3的IC50值,下调VEGF蛋白的表达,增加As2O3诱导的HL60、K562细胞凋亡作用.结论:VEGF反义核酸具有增强HL60和K562细胞对As2O3的敏感性,增强As2O3诱导的HL60和K562细胞凋亡作用;提示内源性VEGF蛋白具有使细胞产生耐药性的作用.     

血管内皮生长因子反义核酸增强HL60和K562细胞对As2O3的敏感性

目的：探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义核酸能否提高HL60和K562细胞对三氧化二砷(As2O3)的敏感性。方法：采用经筛选所得的最优反义核酸(A7)，20个碱基经过全硫代修饰；以脂质体介导转染细胞，反义核酸和AsO3联合作用72h以后，用MTT法检测细胞生长情况，求IC50值；用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白的浓度，用流式细胞仪检测细胞凋亡百分数。结果：VEGF反义核酸可显降低HL60、K562细胞对As2O3的IC50值，下调VEGF蛋白的表达，增加As2O3诱导的HL60、K562细胞凋亡作用。结论：VEGF反义核酸具有增强HL60和K562细胞对As2O3的敏感性，增强As2O3诱导的HL60和K562细胞凋亡作用；提示内源性VEGF蛋白具有使细胞产生耐药性的作用。     

反义核酸Ⅷ C真核表达载体的构建及其对转化血管内皮细胞的影响

利用人工合成的部分反义核酸ⅧC(以pⅧC表示)用以构建含有部分反义凝血因子基因片段的真核表达质粒pXJ41-neo/pⅧC,再用磷酸钙介导转染血管内皮细胞,筛选出阳性克隆血管内皮细胞,扩大培养转基因细胞,用金黄色葡萄球菌凝集试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测转基因细胞ⅧC蛋白质的表达水平.结果表明所构件人工合成的部分反义核酸pⅧC真核表达载体能有效抑制人的凝血因子ⅧC的表达,因此建立了有效表达反义核酸pⅧC的血管内皮细胞模型.     

反义核酸技术对人血管内皮细胞的改造作用

为降低在血栓形成早期血管内皮细胞分泌的血管性血友病因子(vWF)对凝血级联反应的触发效应,利用反义核酸技术构建降低vWF表达量的血管内皮细胞.人工合成vWF部分反义核酸(pvWF),构建重组的真核表达载体pcDNA3.1( )/pvWF.测序正确后用脂质体介导的方法转染血管内皮细胞,硫酸新霉素加压筛选后扩大培养转基因细胞,RT-PCR法检测转基因细胞中vWF mRNA的表达水平.结果表明,构建的vWF反义核酸真核表达载体能有效抑制细胞中vWF mRNA的表达,为新型抗凝血材料的研究提供一种基因改造的内皮细胞.     

肽核酸研究的现状与未来

肽核酸 (PNA)是DNA的类似物 ,具有由氨乙基甘氨酸单位组成的假肽骨架 ,能以高亲和性和高生物稳定性与DNA和RNA特异性杂交 .PNA以链侵占方式与DNA结合 ,抑制转录或提供人工强启动子促进转录 ;与mRNA结合 ,阻止蛋白质的合成 ;此外 ,PNA还能导向核糖核蛋白的RNA部分 ,抑制其酶活性 .肽核酸的其它特点如抗核酸酶和蛋白酶作用、方便而灵活的固相合成法 (SPS)等 ,使其有望成为一个基因靶向药物 .该文综述了近年有关肽核酸研究的生物化学特性及其应用前景     

遗传信息从核酸到蛋白质构象的传输效率

从密码学的观点研究了遗传信息从核酸流各氨基酸和从蛋白质一级结构流向三级结构的信息传输问题，引入了信息传输效率的概念，其对数负正丝 系统的抗干扰能力。导出了信息传输效率与序列长度的关系。发现了信息从核酸流向氨基酸（第一遗传密码）的传输效率和从氨基酸序列流向蛋白质三级结构（第二遗传密码）的传输效率大体相等，这说明了遗传信息的传输效率和抗干扰能力在以上两步传输过程中的匹配性。     

病毒学对分子生物学发展的贡献

本文通过回顾病毒学发展史上的重大事件，尝试从以下几个方面说明病毒学的新发现对分子生物学发展所做出的贡献：①噬菌体感染实验和植物病毒重建实验证明了核酸是遗传信息的载体；②逆转录病毒的发现使人们认识到遗传信息的流动不是单向的；③逆转录酶已经成为基因克隆中重要的工具酶；④朊病毒的发现使人们认识到蛋白质很有可能成为核酸之外遗传信息的载体，扩展了人们对中心法则的认识；⑤各种野生型病毒被改造成为基因工程载体，广泛应用于基因工程．     

脱氧核酶在基因治疗上的应用

长期以来,DNA一直被认为是一种被动分子,仅仅适合于携带遗传信息.但通过体外筛选技术得到脱氧核酶后,发现DNA作为具有催化活性的核酸,理论上能够对任意序列的 RNA分子进行特异性切割,因此具有潜在的治疗应用价值.     

基因治疗及其研究进展

基因治疗作为一种新型的疾病治疗手段 ,正在广泛用于血友病、糖尿病、癌症、心血管病、爱滋病等多种疾病的治疗领域 .基因治疗的一般步骤包括 :目的基因的转移和目的基因的表达两个方面 .其中目的基因的导入和目的基因表达的精确调控是两个关键步骤 .新发展的还有反义疗法以及应用核酶进行基因治疗等 .本文就基因治疗的基本步骤、基因治疗的对象、方式及基因治疗的现状和前景作一个简单介绍     

基于随机 SEIR 模型比较不同筛查频率的核酸筛查效果

为了比较西安疫情期间两种核酸筛查频率的清零效果,提出了改进的随机 SEIR 模型,使用这种模型模拟疫 情的变化过程,然后分析比较一天一次核酸和三天一次核酸两者的清零效果;该模型加入了核酸筛查效果,建立了 考虑核酸筛查的随机 SEIR 模型,然后根据每日社区(不含隔离管控区域)新增患者人数使用线性回归对参数进行 求解,利用小批量随机梯度下降法和余弦调节器对参数的求解过程优化,最后利用参数和模型模拟疫情的发展变 化;对比模型一天一次核酸筛查阳性数量和实际数量,发现两者数量基本一致,所以该随机 SEIR 模型能够较好地 模拟疫情的变化;使用该随机 SEIR 模型模拟一天一次核酸筛查和三天一次核酸筛查,并且计算一天一次核酸筛查 和三天一次核酸筛查的核酸检测成本以及患者(仅计算核酸筛查发现和发病人群)的治疗费用,结果发现社区一天 一次核酸筛查比三天一次核酸筛查拥有更好的清零效果,而且一天一次核酸筛查的成本更低。     

In vitro genetic analysis of the Tetrahymena self-splicing intron

The availability of methods for the amplification of nucleic acid sequences allows the genetic analysis in vitro of the structural and functional properties of many nucleic acids. We have now developed an in vitro selection and amplification system, and used it to analyse the self-splicing Tetrahymena ribozyme. A much wider range of selective conditions can be used in vitro than is possible with standard in vivo methods, and many more variants can be handled in vitro than in vivo. This method can be used to isolate the wild-type ribozyme, and structural variants that are as active as the wild type, from a pool of over 250,000 variants in only three cycles of selection and amplification.     

核酸探针的固定化方法现状

近年来核酸研究日益活跃,核酸修饰电极的提出,使电化学方法显示出其简单、快速、灵敏、无污染等优点。文章主要介绍了核酸修饰电极的制备和特点,并对多种固定方法进行了评述。     

生物大分子核酸分析法的研究

核酸的定量测定是研究核酸的基础，在生命科学、临床医学、和食品检验的研究中有着重要的意义。在综述定量测定核酸的分析方法的基础上，着重阐述了染料、染料一金属配合物作探针的吸光光度法、荧光光度法以及近来兴起的共振光散射法在核酸中的应用和发展动态。同时为了便于读者参考，还将许多重要的化学反应体系及其分析特性归列成表。