抗人肝癌单克隆抗体JHⅢ的制备及其生物学特性

用肝癌细胞株ＢＥＬ－７４０２脾内直接免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合，获得一株分泌肝癌单抗的杂交瘤细胞株ＪＨⅢ，其染色体众数为９０－１１０，单抗ＪＨⅢ系ＩｇＧ２ｂ亚类。杂交瘤细胞培养上清和腹水的效价分别为１：１０＾２～１０＾３和１：１０＾６以上。ＡＢＣ法证实它对肝癌组织有较好的相关性。ＩＦＡ法也证明它对肝癌细胞ＢＥＬ－７４０２有强的阳性反应，而对其他肿瘤细胞株和肿瘤组     

基于顺磁微粒的金黄色葡萄球菌肠毒素B免疫层析试纸条的制备

采用基于顺磁微粒标记抗体的免疫层析法,制备金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)快速定量检测的层析试纸条。利用EDC和NHS交联活化顺磁微粒,对顺磁微粒包被抗体的体系进行优化;根据双抗夹心法原理制备免疫层析试纸条,对制备的SEB免疫层析试纸条进行测试研究。优化的顺磁微粒偶联抗体的缓冲体系为p H 9.0,5mmol/L硼酸,0.05%Tween-20;磁珠包被抗体量为125μg/2mg磁珠,封闭剂为0.25%的脱脂牛奶,磁珠保存液为5mmol/L硼酸、0.05%Tween-20+0.05%Triton X-100,0.01%Na N3,0.5%BSA,p H9.0;建立的SEB顺磁微粒免疫层析试纸条T线抗体浓度为1mg/m L,最低检测限为1ng/m L,磁信号检测显示,该试纸条在SEB浓度0.1~1 000ng/m L范围内具有很好的线性关系。SEB顺磁微粒免疫层析法具有简单快速、灵敏度高、可定量的特点,可应用于SEB的快速检测。     

抗前列腺特异性抗原单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

通过杂交瘤技术制备抗前列腺特异性抗原(PSA)单抗细胞株,共获得68株稳定分泌PSA单克隆抗体的细胞株,并对其中与总PSA(t-PSA)反应的12株进行了详细的免疫特性鉴定.     

JH11Fab′片段的制备及其在人肝癌裸鼠模型的放射免疫显像

利用胃蛋白酶酶切单克隆抗体ＪＨ１１,经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０分离获得ＪＨ１１Ｆａｂ′,得率约１５％．用氯胺Ｔ碘标法制备１３１Ｉ－ＪＨ１１Ｆａｂ′,观测其在荷人肝细胞癌ＢＥＬ－７４０２裸鼠模型的定位显像作用,腹腔注射１３１Ｉ－ＪＨ１１Ｆａｂ′后２４～１２０ｈ,肿瘤部位放射性物质浓集,并清楚显像,其中尤以９６ｈ为佳．１３１Ｉ－ＪＨ１１Ｆａｂ′注射后９６ｈ,在１３种器官的Ｔ／ＮＴ比值均大于３．０,肿瘤的定位指数为３．８０．这表明ＪＨＦａｂ′片段在肝细胞癌的定位显像和导向治疗中有一个更好的应用前景．     

幽门螺杆菌鞭毛蛋白A单克隆抗体的制备与鉴定

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)鞭毛蛋白A(FlaA)可作为临床诊断标志物,但目前尚无识别FlaA蛋白的特异性抗体.该研究构建了HpflaA基因表达质粒,表达并纯化了HpFlaA重组蛋白,并以此重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术制备HpFlaA单克隆抗体,最后对抗体的亚型、效价、...     

抗人FXYD3单克隆抗体的制备与初步鉴定

【摘要】目的 制备抗人FXYD3单克隆抗体（McAb）并鉴定其生物学特性。方法 以固相合成法获得的FXYD3合成多肽与载体蛋白KLH偶联后免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗人FXYD3 McAb。用ELISA 、Western Blot、免疫组化技术对抗人FXYD3 McAb的亚型、效价、亲和力及特异性进行鉴定。结果 筛选出两段较好的优势抗原表位,分别为NDLEDKNSPFY和KFGQKSGHHPGETPPLITPGSA获得四株可稳定分泌抗人FXYD3 McAb的杂交瘤细胞株02A12C4、02F1E8、02E6B10与03A10E11,亚型鉴定重链均为IgG1,轻链为kappa链。间接ELISA法测定效价均在为1∶104以上。其中02F1E8效价为1∶105以上,亲和常数为3.11?08 L / mol。免疫组化分析显示了FXYD3均匀分布于肝癌细胞与人胰腺癌Bxpc-3细胞系细胞的胞膜上。结论 成功制备了四株抗人FXYD3 McAb,其中02F1E8纯度好、效价高及特异性强。为进一步研究FXYD3在肿瘤组织及细胞系中的表达及临床意义奠定了基础。     

抗Y-box结合蛋白冷休克域单克隆抗体的制备及其初步应用

固相法合成Y -box结合蛋白冷休克域部分片段“14肽”(H2 N NGYGFINRNDTKED COOH ,简称ND) ,用不同载体蛋白经戊二醛一步法偶联得到免疫抗原 (BSA ND)和检测抗原 (OVA ND) .用免疫抗原免疫BLAB c小鼠 ,经间接法ELISA检测 ,得到对ND有足够免疫应答的小鼠 .采用常规单克隆抗体制备的方法 ,得到 3株能稳定产生和分泌抗ND单抗的克隆细胞株 ,单抗的亚型均为IgM .WesternBlotting结果显示 :该单抗能识别中华大蟾蜍 (Bufobufogar garizans)Ⅰ、Ⅱ期卵母细胞中的热稳定Y box结合蛋白p5 4 ,并能识别中华大蟾蜍高、低温卵中一种分子量约为 80kD的蛋白 (简称p80 ) .由于p80在低温卵中含量高于高温卵中 ,推测可能是高温卵和低温卵中差异表达的Y box结合蛋白之一 .     

抗土霉素单克隆抗体的制备及其在虾中土霉素残留的检测应用

研究目的：抗土霉素单克隆抗体的制备和特性分析,并用于间接竞争酶联免疫吸附测定法（icELISA）分析虾样品中土霉素的残留。创新要点：本研究建立分泌抗土霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,筛选出对虾中土霉素残留检测具有较高灵敏度的单克隆抗体2．4F。研究方法：重要结论：用细胞杂交技术使土霉素．牛血清白蛋白偶联物免疫的BALC／c雌性小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,建立三株分泌抗土霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株（2—4F、7-3G和11-11A）,并制备它们的单克隆抗体。通过ieELISA法分析单克隆抗体对土霉素的半抑制质量浓度（IC-50）和交叉反应率,明确其灵敏度和特异性。实验结果发现单克隆抗体2—4F具有最高的灵敏度,对土霉素的IC50为7．01ng／ml,且该单抗特异性强,仅与罗利环素之间有强烈的交叉反应,而与非相关抗生素不发生交叉反应。当利用单克隆抗体2-4F检测虾样品中的土霉素含量时,其批内和批间回收率分别为82％～118％和96％～113％,变异系数分别为3．9％～13．9％和5．5％～14．9％。因此,单克隆抗体2．4F可用于虾产品中土霉素残留分析试剂盒的开发。     

抗人骨桥蛋白单克隆抗体制备及其特异性研究

利用RT-PCR技术克隆人骨桥蛋白(hOPN)基因,构建OPN原核表达质粒pET-32a(+)-hOPN,转化BL21菌株,经IPTG诱导表达重组人骨桥蛋白(rhOPN).以纯化的rhOPN为免疫原,免疫BABL/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS1融合.通过有限稀释法进行克隆和间接ELISA筛选,获得抗人OPN蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株,以ELISA、Western blot对抗体特异性进行鉴定.通过竞争抑制试验对单克隆抗体识别抗原位点进行分析.结果共获得2株抗人OPN单克隆抗体,分别命名为8F1和2B5,亚型测定皆为IgG1.通过细胞侵袭抑制试验检测,2株抗人OPN mAb皆能很好地抑制细胞迁移.本研究成功获得了抗人骨桥蛋白的特异性单克隆抗体,为进一步研究OPN蛋白在自身免疫病和肿瘤中的功能提供了重要的工具.     

甲肝病毒单克隆抗体的研制与应用

本研究成功制备了抗甲肝病毒 (HAV)McAb ,为甲肝研究和诊断提供了大量高效价标准化抗体 .用细胞培养的NJ 3株HAV免疫Balb/c小鼠 ,经细胞融合技术、IFA筛选和有限稀释克隆 ,建立了 5株能稳定分泌抗HAVMcAb的杂交瘤细胞 .经鉴定 ,其上清和腹水的抗体效价分别为 0 5× 10 2 ～ 1× 10 3及 1× 10 3～ 2× 10 5.用免疫印迹法和间接ELISA分析 ,这 5株抗体分别能与HAV的 3个抗原位点结合 .在HAAg检测中 ,McAb的应用简化了操作步骤     

Smurf2单克隆抗体的制备与鉴定

Smad泛素调节因子家族的两个E3泛素连接酶成员Smurf1和Smurf2 (Smad ubiquitin regulatory factor 1 and 2)具有至少80％的同源性.为了更好地研究它们的功能,需要获得一个能区分Smurf1和Smurf2的单克隆抗体.选取Smurf2与Smurf1蛋白序列中仅有的非同源区域序列作为抗原免疫Bal b/C小鼠,成功制备若干株能稳定分泌抗Smurf2抗体的杂交瘤细胞株.对所获得的单克隆抗体的效价和特异性等进行一系列检测,结果表明该抗体能特异性地识别过表达及细胞内源Smurf2蛋白.此外该抗体能被应用于Western blot和免疫荧光实验,从而为深入研究Smurf2的细胞生物学功能提供了良好的实验基础.     

镉螯合物特异性单克隆抗体的制备与鉴定

为了获得镉螯合物特异性单克隆抗体, 以异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸为双功能螯合剂连接镉离子与钥孔戚血蓝素,牛血清白蛋白合成了免疫原与包被抗原. 经过抗原鉴定,免疫Balb/c小鼠, 取小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤, 经筛选和2次克隆化, 从制备的腹水中获取单克隆抗体. 用酶联免疫吸附测定法鉴定单克隆抗体3A9D9G7的特性,腹水效价为4×10-4, 单抗亚类为IgM, 轻链为κ型, 亲和常数为1.44×1010 mol/L, 其他金属螯合物的交叉反应低于0.9%, 表明该单克隆抗体能特异性识别Cd-EDTA, 为环境样品与食品中镉残留的快速检测提供了工具.     

脊髓灰质炎病毒I型单克隆抗体的制备

目的: 为建立脊灰病毒Sabin株I型特异的单克隆抗体．方法:以Vero细胞增殖病毒并用蔗糖密度梯度离心法纯化后,用病毒免疫SPF级Balb/c小鼠．取小鼠免疫脾淋巴细胞与SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞进行细胞融合,通过间接 ELISA 法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞,并用有限稀释法克隆化．用细胞培养法制备脊灰病毒单抗,并以中和试验测定单抗效价．结果:获得了8株分泌抗脊灰病毒Sabin株I型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中1株G8G7能够稳定分泌抗体．间接ELISA 法测得单抗的效价为1∶8,中和试验测得中和抗体的效价为1∶58．结论:G8G7分泌的抗体为抗脊灰病毒Sabin株I型特异的单克隆抗体.     

重组人源抗血管内皮生长因子单克隆抗体的制备及鉴定

通过优化密码子获得带有信号肽的人源抗血管内皮生长因子（VEGF）抗体的重链和轻链DNA序列, 分别构建表达载体pcDNA VEGFH和pcDNA VEGFV, 将表达载体共转染HEK 293细胞后, 与C6胶质瘤细胞共培养, 并将所得蛋白进行分离纯化. 实验结果表明: pcDNA VEGFH和pcDNA VEGFV共转染HEK 293F细胞, 可显著抑制C6细胞增殖（P<0.01）; 转染24~144 h后的细胞培养上清液中均有蛋白表达; 所得纯化蛋白和标准品一致; 纯化所得抗体蛋白能明显抑制C6细胞增殖（P<005~001）, 与标准品抑制效果相似.     

重组人源抗血管内皮生长因子单克隆抗体的制备及鉴定

通过优化密码子获得带有信号肽的人源抗血管内皮生长因子（VEGF）抗体的重链和轻链DNA序列, 分别构建表达载体pcDNA VEGFH和pcDNA VEGFV, 将表达载体共转染HEK 293细胞后, 与C6胶质瘤细胞共培养, 并将所得蛋白进行分离纯化. 实验结果表明: pcDNA VEGFH和pcDNA VEGFV共转染HEK 293F细胞, 可显著抑制C6细胞增殖（P<0.01）; 转染24~144 h后的细胞培养上清液中均有蛋白表达; 所得纯化蛋白和标准品一致; 纯化所得抗体蛋白能明显抑制C6细胞增殖（P<005~001）, 与标准品抑制效果相似.     

抑制羧肽酶A催化活性的单克隆抗体的制备及性质测定

以羧肽酶Ａ为抗原，经动物免疫、细胞融合、筛选及３次克隆化培养，获得了一株稳定分泌对羧肽酶Ａ肽酶活性有抑制作用的单克隆抗体的杂交瘤细胞株１Ｇ１０。染色体数目为８０～９０；ＥＬＩＳＡ测定腹水效价为１０６；亲和常数为１．５９×１０９（ｍｏｌ／Ｌ）－１；免疫球蛋白属ＩｇＧ１型；分子量为１５０Ｋｄ。羧肽酶Ａ与该抗体反应后测定肽酶活性，显示出该抗体能抑制羧肽酶Ａ的肽酶活性，Ｄｉｘｏｎ法作图表明类似竞争性抑制反应，测得其表观抑制常数为１．１７×１０－７ｍｏｌ／Ｌ。该抗体可能针对羧肽酶Ａ的活性中心部位，为制备具有抗原内影像作用的抗独特型抗体酶打下了基础     

抗人胃腺癌细胞株AGS单克隆抗体的制备和初步鉴定

用人胃癌细胞株AGS作为抗原免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备抗人胃癌细胞mAb,应用间接ELISA法进行筛选,显微操作法进行亚克隆并用琼脂糖双向免疫扩散法鉴定亚类,免疫化学法检测特异性,获得l株分泌抗AGS细胞株的mAb的杂交瘤(命名为1B4).该杂瘤分泌的mAb与人宫颈癌细胞株Hela、肝癌细胞株HepG2和正常胎儿肺细胞均为阴性反应,而与AGS细胞呈阳性反应.结果表明,该mAb对AGS细胞株具有一定的特异性,可为胃癌相关抗原的筛选研究提供一定的帮助.     

雌三醇单克隆抗体的制备与表征

活化雌三醇 (E3 )C3处的酚—OH ,与牛血清白蛋白 (BSA)偶联 ,制备得E3 的完全抗原。利用完全抗原免疫动物 ,采用单克隆抗体技术 ,经过细胞融合、克隆筛选、扩大培养、动物体内诱生等过程 ,最后获得了E3 的单克隆抗体。对纯化的单克隆抗体的性质进行表征 ,结果表明 :抗体的效价为 6 0× 10 -10 mol L ,抗体属于IgG1型 ,分子量为 16 80 0 0u ,单克隆抗体与固定化抗原亲和常数为4 7× 10 7L mol。