实验大鼠肺炎病毒ELISA检测试剂盒的研究

在小鼠肺炎病毒的抗原特性进行鉴定的基础上,将其毒种感染BHK_(21)细胞作为抗原,建立了检测大鼠PVM抗体的酶联免疫吸附试验的试剂盒。经过提纯PVM免疫血清结合辣根过氧化物酶,用于阻断试验、免疫荧光抗体(IFA)试验,考核了本试剂盒的特异性,对该试剂盒的灵敏性及重演性作了验证。并用本试剂盒对154只大鼠的PVM抗体水平进行调查,结果是开放大鼠PVM阳性率为38.2％,清洁大鼠为0。并对154只大鼠标本用光密度OD值定值的两种方法作了探讨。     

猴B病毒BVgD-多肽ELISA检测方法的建立

目的建立猴B病毒抗体BVgD-多肽ELISA检测方法。方法以Western-blot分析猴B病毒糖蛋白D(BVgD)上的多肽抗原决定簇(BVgD-多肽)的抗原性,采用方阵滴定法,确定ELISA法的最佳实验条件。用灭活BV全病毒、HSV-1和BVgD-多肽三种抗原系统对猴血清样品进行平行检测,比较分析了三种系统的抗原性特点。并且将检测结果与美国BV抗体检测试剂盒的检测结果进行了比较。结果建立了猴B病毒抗体的BVgD-多肽ELISA法,研究结果表明本方法与BV全病毒和以HSV-1病毒为抗原的试剂盒相比,敏感性较低、特异性较好,避免了制备BV抗原对实验室要求高和HSV-1抗原引起的非特异性问题。检测结果与美国实验室BV抗体检测结果的符合率达85%。     

传统抗原、重组抗原检测啮齿类动物病毒的ELISA法敏感性和特异性

酶联免疫吸附试验 (ELISA)是一种常用的检测啮齿动物血清病毒抗体的方法。用于检测血清抗体的抗原可是用常规方法制备的全病毒或是在原核或真核系统中表达的重组抗原蛋白。利用杆状病毒表达系统已获得细小病毒、沙粒样病毒和冠状病毒的带有His标记的重组病毒抗原。重组抗原在昆虫细胞中表达裂解后 ,可用色谱法提纯。提纯的抗原用来包被 96孔ELISA板。用细小病毒非结构蛋白 (NS 1) ELISA法检测啮齿动物血清 ,在检测的 345 7份样本中有 88份 (2 5 % )NS 1抗体阳性 ,9份 (0 3% )为非特异性反应。虽然NS 1ELISA检测NS 1抗体具有…     

脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体胶体金检测试纸条的研制

目的:为研制快速检测脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体的胶体金试纸条.方法:以辛酸-硫酸铵沉淀法纯化脊髓灰质炎病毒Ⅰ型单克隆抗体,用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,胶体金标记单抗,再结合脊灰病毒抗原形成复合物,固定于金标垫上,将鼠抗人IgG和羊抗鼠IgG分别包被于试纸条的T (检测线)处和C (质控线)处,应用该试纸条进行性能检测.结果:以已知的脊灰病毒Ⅰ型阳性血清作为检测样品,试纸条检测的灵敏度为1:80;特异性试验证明该试纸条与甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、麻疹病毒抗体阳性血清没有交叉反应;检测结果与脊灰病毒Ⅰ型疫苗抗体检测试剂盒(ELISA)试验的符合率为86.7%.结论:该试纸条检测脊灰病毒Ⅰ型的抗体水平具有较好的特异性与灵敏性,适用于大规模临床血清抗体水平检测,具有良好的应用前景.     

传染相关指标在受血者输血前检查中的临床意义

探究传染相关指标在受血者输血前检查中的临床意义。本次研究对象选取为高台县人民医院2016年3月~2016年10月期间收治的需要进行输血治疗的患者516例,进行输血操作前对患者输血史进行初步了解,然后进行输血前乙肝表面抗原(HBsAg)检查、丙肝病毒抗体(HCV抗体)检查、免疫缺陷病毒抗体(HIV抗体)检查和梅毒TRUST试验检查,记录并分析各项检查阳性率。516例患者传染指标检查结果中,82例患者为HBsAg阳性,54例患者为HCV抗体阳性,6例患者HIV抗体阳性,梅毒TRUST试验未存在阳性者,阳性率分别为15.89%、10.47%、1.16%、0.00%。其中,82例HBsAg阳性患者中63例(76.83%)患者存在过往输血史,54例HCV抗体阳性患者全部有过往输血史(100.00%),6例HIV抗体阳性患者中4例存在过往输血史(66.67%)。接受输血治疗的患者一部分在输血前传染相关指标已经显示为阳性,若其输血后发生感染,则不一定是由输血操作导致。因此在输血前应及时对患者进行检查,减少医疗纠纷的产生,同时应加强对输血操作及血液来源的监控,尽量减少感染发生。     

小剂量干扰素治疗HCV.RNA阳性丙肝肝硬化疗效观察

观察小剂量干扰素治疗HCV.RNA阳性丙肝肝硬化患者临床疗效。随机将80例HCV.RNA阳性丙肝肝硬化患者（肝功ChildA-B级）分为两组：治疗组36例,肝功ChildA级24例,肝功Child B级12例,给予小剂量干扰素100～300万单位、肌肉或皮下注射、每周2～3次、疗程6～12月,配合内科综合治疗;对照组44例,肝功ChildA级24例,肝功ChildB级20例,仅用内科综合治疗,检测两组患者治疗前后血清肝功能、HCV.RNA等指标。两组经治疗6月后,治疗组肝功能基本稳定,3例HCV.RNA阴转;对照组所有病例HCV.RNA滴度无变化;治疗12月后治疗组29例患者肝功能稳定,8例HCV.RNA阴转,11例HCV.RNA滴度下降;对照组12例肝功能基本稳定,所有病例HCV.RNA滴度无变化,26例患者病情出现反复,6例病情加重。小剂量干扰素治疗HCV.RNA阳性丙肝肝硬化患者,通过HCV.RNA被有效抑制,肝功能改善,病程减缓,提高生存率,改善预后,值得临床进一步研究。     

丙肝病毒持续感染有了动物模型

中国科学院武汉病毒所和生物物理所唐宏、陈新文研究组利用免疫系统完整的小鼠，成功研制出世界上首个丙肝病毒（HCV）持续感染、完整反映丙肝病毒感染自然史和慢性病毒性肝炎进展的动物模型。该模型不仅为揭示丙肝的致病机制提供了迄今最先进的材料，还将从根本上推动丙肝防治的疫苗和药物研发，相关研究成果8月27日以封面论文的形式在线发表于《细胞研究》杂志上。     

地高辛掺入法检测HCV RNA含量在肝病诊断中的应用

目的：研究血清HCVRNA含量与HCV感染者肝病程度的关系。方法：应用地高辛掺入法检测血清HCVRNA含量。在PCR过程中将DIG－dUTP掺入到PCR产物中去，再用PCRELISA法检测PCR产物，结合标准参考样本而达定量目的。结果：丙肝后肝硬化组血清HCVRNA含量显著高于丙型肝炎组。结论：地高辛掺入法检测血清HCVRNA含量可以为HCV感染者的病情判断提供科学依据。     

夹心ELISA检测新冠病毒及其抗原方法的建立和验证

研究制备了快速检测新冠病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2）及其表面刺突糖蛋白受体结合域（receptor-binding domain,RBD）的ELISA试剂盒.该试剂盒由一对RBD单克隆抗体作为捕获抗体与检测抗体，其中检测抗体进行辣根过氧化物酶（HRP）偶联，通过方阵滴定法确定双抗夹心ELISA的最适工作条件.另外，对检测试剂盒进行线性、特异性、准确度、精密度等进行了验证.结果表明，双抗夹心ELISA方法中捕获抗体和酶标检测抗体的效价分别为1∶160 000和1∶320 000，试剂盒的定量检测下限为31 ng/mL.经验证，组装的试剂盒精密度为0.71%～1.59%，平均准确度为96.53%，与其他的同种属灭活病毒无交叉反应.试剂盒各项参数均符合《中国药典》（三部）2020版标准，表明该试剂盒适用于新冠病毒以及RBD抗原的快速检测.     

最近几年无偿献血者的抗-HCV的结果分析

丙型肝炎是全球性严重的卫生问题，据世界卫生组织估计，约有1亿的人为慢性丙肝病毒携带者。HCV大多数感染者起病隐匿，病毒持续感染率高。而且这种疾病的发展进程人多数呈隐匿性，我国已列入法定传染病之一。     

慢性肝炎患者91例庚型肝炎病毒抗体测定

目的：阐明HGV在慢性乙肝和慢性丙肝病人中的感染情况。方法：甩ELISA法检测上述二类对象的度型肝炎病毒抗体（抗—HGV）。结果：35例慢性丙肝中有13例阳性,阳性率为37．1％。56例慢性乙肝中有5例阳性,阳性率为8．9％。结论：侵性肝炎合并HGV感染率较高,尤其是慢性丙肝。可能是HBV和HCV感染易慢性化的原因之一,但较单一HBV和HCV感染的临床表现无明显加重趋势。     

两种方法检测汉坦病毒滴度的比较研究

【摘要】 目的：比较双抗体夹心ELISA法与直接免疫荧光(DFA）法在检测汉坦病毒灵敏度方面的差别。方法：用汉坦病毒76-118株感染Vero-E6细胞,取不同时间点的病毒感染细胞制备细胞爬片或细胞培养物冻融上清,分别用本室制备的抗汉坦病毒单克隆抗体标记荧光素或辣根过氧化物酶（HRP）建立直接免疫荧光法和双抗体夹心ELISA法检测上述细胞中的病毒抗原,并比较两者的检测灵敏度,用空斑形成实验结果作为金标准,以评价两种方法在检测病毒抗原灵敏度方面的差异。结果: 用两种检测方法测定不同时间点的汉坦病毒培养物抗原,双抗体夹心ELISA法不仅检出的时间早,而且其病毒滴度均较IFA法高（P＜0.01）。结论：ELISA法检测汉坦病毒滴度的灵敏度较IFA法更高,并且操作简单,可重复性好,便于大批量规模化检测,因此更适用于汉坦病毒的检测。     

基于酶联免疫斑点技术的丙型肝炎病毒中和抗体检测平台的建立

为建立血清中丙型肝炎病毒(HCV)中和抗体检测及评价手段,运用HCV核心区特异性抗体17H11及链霉亲和素-生物素放大系统,建立了基于酶联免疫斑点(ELISPOT)技术的HCV中和抗体检测平台.结果显示,该平台计数点清晰,可实现阴阳性分开,并能有效地检测并评价HCV抗体阳性病人血清的中和作用,表明该平台可实现HCV中和抗体的检测,将有利于HCV疫苗研制中的免疫效果评价.     

两种国产与一种进口小鼠肝炎病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较研究

目的 本研究拟对比小鼠肝炎病毒(MHV)抗体ELISA检测试剂盒的敏感性、特异性、精密性和可信度,以筛选出既经济又可靠的检测试剂盒.方法 选择两种国产与一种进口的ELISA试剂盒检测MHV抗体和以下5种病毒阳性血清:小鼠仙台病毒(SV)、小鼠肺炎病毒(PVM)、小鼠细小病毒(MVM)、小鼠鼠痘病毒(MPV)及小鼠呼肠孤...     

实验大鼠和小鼠多种病毒的血清学检测结果分析

摘要:目的　评估近期大鼠和小鼠的病毒感染情况,为我国大、小鼠质量控制和标准化提供参考。 方法　应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对2012年至2013年国内36家单位送检的小鼠和大鼠血清进行病毒抗体检测,检测出现阳性的样品再用免疫荧光试验(IFA)进行复检。 结果　检测小鼠病毒抗体18项,出现阳性结果的有9项,小鼠诺如病毒和小鼠肝炎病毒阳性率最高,分别是42.2％和19.9％,检测大鼠病毒抗体14项,出现阳性结果的有8项,大鼠细小病毒有5项,阳性率最高达13.6％—34.4％。 结论　我国大、小鼠病毒监测、净化和控制工作仍需加强。     

丙型肝炎病毒抗体免疫酶快速检测试剂的评价

对丙型肝炎病毒抗体免疫酶快速检测试剂(IEA)检测丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)的性能、结果等技术参数进行评价,为实验室的选用提供参考.采用IEA法、ELISA法和胶体金法对中国生物制品检定所“第三代ELISAHCV-Ab诊断试剂国家参考品”和3297份血清或血浆标本同时测定,对IEA的敏感性、特异性、重复性和检测时间等结果进行评价.结果表明:IEA可通过中国生物制品检定所“第三代ELISAHCV-Ab诊断试剂国家参考品”检验;与ELISA法比较,IEA的检出率为99.06%,灵敏度与ELISA相当,胶体金的检出率为86.01%,灵敏度比ELISA低;IEA检测所需时间15～25min.IEA既有ELISA的敏感性、特异性,又有胶体金简便、快速的特点.适用于献血员及高危人群中HCV抗体的筛查和临床诊断HCV感染,以及门诊、急诊和基层医疗单位的现场检测.     

免疫鸡群新城疫病毒检测和分离的研究

以ＳＰＦ鸡抗新城疫病毒（ＮＤＶ）ＩｇＧ为包被抗体（５μｇ／ｍＬ）,兔抗ＮＤＶＶｅｒｏ细胞培养纯化毒ＩｇＧ为第二抗体（１∶２００～６００）,酶标记羊抗兔ＩｇＧ（１∶５０００）为指示抗体建立间接夹心ＥＬＩＳＡ,检测实验免疫鸡、攻毒鸡及现地免疫鸡口腔或泄殖腔外分泌物。结果表明：新城疫无毒力Ｖ４疫苗免疫后２ｄ,口腔内病毒抗原随机检出率为４／１０,第１０天为１０／１０;泄殖腔为０～１／１０,并持续１８ｄ以上。滴鼻攻毒后１ｄ,口腔和泄殖腔内病毒抗原检出率分别是８／１０和６／１０;第１３天,泄殖腔内病毒抗原检出阴性。ＮＤＶ灭活疫苗免疫６０ｄ后攻毒,第２天有７／２０口腔和８／２０泄殖腔检出阳性,并一直到攻毒后第１４天。非免疫对照鸡攻毒后第３天直到死亡时,口腔和泄殖腔均可检出病毒抗原。对各地临床上无任何症状的ＮＤＶ免疫鸡群检测发现,泄殖腔ＮＤＶ抗原阳性率０％～９．３％,分离到８株ＮＤＶ流行毒株,生物学试验证实这些毒株的毒力属中等毒力偏强或强毒。     

庆阳市献血者梅毒螺旋体感染现状与趋势分析

了解庆阳市无偿献血者中梅毒螺旋体的感染情况和流行人群属性特征。研究近7年庆阳市献血人群梅毒螺旋体(TP)抗体的检测结果和流行病学趋势分析,并对献血者归队意愿进行调查问卷。2012-2018年从126218人份献血者中筛查出TP抗体阳性样本1193人份,献血者TP抗体阳性率为9.45‰,TP抗体合并感染状况中TP抗体分别与HCV和HBsAg合并阳性的样本数量相对较多。开展献血者梅毒螺旋体检测结果和流行病学趋势分析,为逐步完善献血者的归队机制,预防梅毒螺旋体经血传播的风险,提供血液筛查和防控策略科学依据。     

新型肾综合征出血热EIA诊断试剂盒的研制

用多肽合仪合成汉坦病毒核衣壳蛋白（NP）(aa17－66）50个氨基酸残基的核心序列,以此为抗原,建立特羿性检测抗汉坦病毒IgG和IgM的酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）,通过实验发现这一序列具有较强的抗原性,研制出了以合成肽为抗原的新型牧场异性检测抗汉坦病毒IgG和IgM的诊断试剂盒,通过对肾综合征出血热抗体阳性血清的检测,效果良好。     

同时检测小鼠微小病毒(MVM)和小鼠细小病毒(MPV)的荧光定量PCR的建立及应用

目的 建立同时检测小鼠微小病毒(MVM)和小鼠细小病毒(MPV)的荧光定量PCR方法,并进行初步应用。方法 比对NCBI上发表的MVM和MPV基因组序列,设计1对引物和探针,可同时检测MVM和MPV。考察MVM-MPV引物探针的特异性和灵敏度,并对178份清洁级小鼠粪便DNA样本进行检测。结果 MVM-MPV荧光定量PCR方法最佳线性范围为109～104拷贝/μL,标准曲线的线性关系良好,R2值可达0.99,灵敏度为101拷贝/μL,特异性强。应用MVM-MPV探针对178份小鼠粪便DNA检测,结果为2份阳性样本,经MVM、MPV特异性探针鉴定,2份阳性样本均为MPV感染。阳性样本经全基因组测序后与NCBI网站上MPV(NC_001630.1)序列比对,一致率为96%。结论 建立的MVM-MPV荧光定量PCR方法,能够有效快速地同时检出小鼠细小病毒和小鼠微小病毒。