雷公藤红素对人肺癌细胞增殖与凋亡的影响

雷公藤红素是从传统中药雷公藤中提取分离得到的一种醌甲基三萜,具有抗炎、免疫抑制及抗肿瘤等药理活性.本实验研究雷公藤红素对肺癌细胞的增殖和凋亡的影响.用MTT法测定不同浓度雷公藤红素对肺癌细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测肺癌细胞的凋亡率;用DAPI染色测定雷公藤红素对肺癌细胞的细胞核的影响.实验显示,雷公藤红素以时间和剂量依赖性的方式抑制肺癌细胞的增殖,并且晚期凋亡细胞和死亡细胞增多,细胞核逐渐破裂.实验结果表明,雷公藤红素具有抗肺癌的作用.     

雷公藤红素抑制大鼠胰岛细胞功能损伤研究

研究雷公藤红素(Celastrol)对大鼠胰岛细胞(INS-1)在炎症通路中功能损伤的恢复作用,并探索其分子药理学机制.通过MTT检测不同浓度Celastrol对炎症侵润下INS-1细胞的活性影响,利用免疫荧光技术观察INS-1细胞凋亡变化.采用钾离子刺激的胰岛素分泌(KSIS)来检验INS-1细胞分泌胰岛素的功能.ELISA检测INS-1细胞处理前后NO的分泌情况.结果发现,低浓度状态下Celastrol(100~300nmol/L)对有IL-1β引起的INS-1细胞凋亡有一定的保护作用,并且能显著改善INS-1的功能,INS-1细胞内NO分泌降低.研究结果表明Celastrol对INS-1细胞中NO分泌的抑制可能是其抑制INS-1细胞炎症状态下功能损伤的机制之一.     

EVn-50抑制人宫颈癌Hela细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的探讨EVn-50对体外培养的人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞,台盼蓝拒染法检测EVn-50对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响;平皿克隆形成法、软琼脂克隆形成法测定EV-n50对人宫颈癌Hela细胞锚定依赖性生长和锚定非依赖性生长作用的影响;AO／EB染色荧光显微镜观察EVn-50诱导Hela细胞凋亡的形态学改变;DNA凝胶电泳确证EVn-50诱导Hela细胞凋亡作用。结果EVn-50对体外培养人宫颈癌Hela细胞的增殖具有显著抑制作用,呈浓度依赖性。EVn-50可诱导Hela细胞凋亡,AO／EB染色可见典型凋亡小体;DNA凝胶电泳在EVn-50浓度100μg／mL作用48h出现典型“梯形”DNA条带。结论EVn-50具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并诱导细胞凋亡作用。     

雷公藤红素的抗肿瘤作用及结构改造研究进展

雷公藤红素是从中药雷公藤中分离得到的五环三萜类化合物,具有广泛的生物学活性,特别是抗肿瘤作用比较显著,但因其毒副作用大、水溶性差,受限于临床应用.笔者查阅了2009年-2018年以来国内外文献,对雷公藤红素抗肿瘤作用及其结构改造工作进行综述,旨在为进一步开展结构改造工作和抗肿瘤新药研发奠定基础.     

合欢花水提物对大鼠脑胶质瘤C6细胞株的增殖抑制与凋亡诱导作用

采用MTT法检测合欢花水提物对C6细胞增殖活力的影响,流式细胞术检测该水提物对C6细胞的诱导凋亡作用.结果表明:合欢花水提物能抑制C6细胞的增殖,且具有剂量和时间依赖性,其在24 h、48 h、72 h时对C6细胞的半数抑制率(LD50)分别为:305 μg/mL、50 μg/mL、15 μg/mL.流式细胞术结果显示:200 tμg/mL、300μg/mL合欢花水提物均可诱导C6细胞发生早期凋亡,与对照组细胞相比,早期凋亡率分别由对照组的0.7％增加到了4.3％、14.3％.提示合欢花水提物抑制C6细胞增殖机理与诱导细胞凋亡途径有关.     

对香豆酸抑制肺癌细胞增殖、迁移并诱导其凋亡的机制研究

探究了对香豆酸（p-coumaric acid,p-CA）对人肺癌细胞细胞A549和H1299增殖、凋亡和迁移的影响及作用机制.结果显示,添加0～10 mM p-CA能显著抑制两种肺癌细胞的生长和迁移,并呈剂量和时间依赖性（P<0.001）. p-CA显著抑制了细胞周期发生,并将细胞周期阻滞在G1期,且细胞凋亡发生明显增加（P<0.05）. p-CA显著抑制了CDK2、CDK6、Cyclin D1等周期正调控因子表达,并诱导细胞周期负调控因子p21、p27等基因的表达上调;与此同时,p-CA还诱导了促凋亡因子Bax表达上升和抗凋亡因子Bcl-2表达水平的降低且caspase-3和caspase-9的表达上调,而对迁移相关基因表达的检测结果也显示p-CA抑制了β-连环蛋白（β-catenin）的表达并促进钙粘附蛋白E(E-cadherin)表达上升.上述结果表明,p-CA具有抑制肺癌细胞生长、诱导凋亡并抑制其迁移的作用,它主要是通过促进Bax、caspase-3、caspase-9、p21、p27、E-cadherin等蛋白的表达而抑制Bcl-2、Cyclin D1、β-ca...     

辛伐他汀对C2C12细胞中utrophin基因表达的影响

本文采用MTT法,观察不同浓度辛伐他汀(0,1,3,10,30 and 100μmol/L)对C2C12细胞活力的影响,并通过定量RT-PCR方法对utrophin和TNF-α基因的mRNA的表达进行了研究.随着辛伐他汀浓度和作用时间的增加,C2C12细胞的活力在降低;不同浓度辛伐他汀对utrophin和TNF-α的mRNA表达具有影响作用,为阐明辛伐他汀的肌毒性作用机理提供了新的思路.     

雷公藤甲素与雷公藤红素对小胶质细胞炎症反应的影响机制

雷公藤甲素与雷公藤红素是雷公藤的主要生物活性成分，具有多种潜在的药理作用与毒性。神经炎症是各种神经退行性疾病的共同特征，小胶质细胞的激活是中枢神经系统神经炎症的主要组成部分。本文用雷公藤甲素与雷公藤红素处理小胶质细胞（HMO6），探究其对小胶质细胞增殖、细胞膜完整性的影响，以及雷公藤甲素对小胶质细胞M1、M2极化的影响。结果表明：与对照组相比，雷公藤红素（10^-4 mol/L）处理HMO6后，细胞增殖抑制率可高达（71.91±16.28）%（P<0.01，n=3），当浓度为10^-5 mol/L时，乳酸脱氢酶（LDH）释放量明显增加（8.58±1.56）%（P<0.01，n=4）；与对照组相比，雷公藤甲素处理HMO6后，对细胞膜完整性无显著影响，但当浓度为10^-5 mol/L时，细胞增殖抑制率可高达（94.31±0.62）%（P<0.01，n=5），与脂多糖（LPS）组相比，雷公藤甲素浓度为10^-7 mol/L时人肿瘤坏死因子-α（TNF-α）释放量显著减少至（264.83±64.25）pg/mL（P<0.01，n=3），人白细胞介素-10（IL-10）释放量减少至（63.48±16.79）pg/mL（P<0.05，n=3）。     

人线粒体蛋白编码基因C2ORF47在细胞增殖与凋亡中的作用初探

线粒体在真核细胞中扮演着重要的角色,其功能障碍与许多疾病的发生密切相关.在这项研究中,我们鉴定了一个有Tim44样结构域(Tim44-like domain)的人类线粒体蛋白编码基因C2ORF47(chromosome 2openreading frame 47).该基因是从人的睾丸组织中克隆出来的,在人体各种组织中广泛表达.序列比对和进化分析表明,该蛋白质和其同系物在脊椎动物中是保守的.采用免疫荧光技术,我们发现该基因产物定位于线粒体.过表达C2ORF47可以抑制细胞增殖.使用siRNA敲减内源的C2ORF47能促进细胞增殖.此外,敲减C2ORF47会导致糖和血清饥饿引发的细胞凋亡大幅减少.总之,在细胞增殖和由饥饿引发的细胞凋亡的调控中,该基因可能发挥重要作用.     

酒精对PC12细胞凋亡的诱导作用

采用不同浓度酒精处理PC12细胞,观察酒精诱导细胞凋亡作用及其与线粒体凋亡途径的关系.结果显示,采用50、100、200、400和800mmol/L浓度的酒精处理去血清培养的PC12细胞24h后,细胞存活率分别是单纯去血清培养细胞存活率的85.66%、74.28%、62.47%、54.14%和50.35%,呈浓度依赖性,与对照组比较差异显著(P0.05).Hoechst 33342/PI染色法观察到典型凋亡现象,如核型固缩、染色质凝集等.DNA琼脂糖凝胶电泳可见100~400mmol/L浓度酒精处理组呈现凋亡细胞典型梯状DNA.酒精能使PC12细胞线粒体膜电位下降并呈浓度依赖性.酒精致PC12细胞凋亡过程中,凋亡关键蛋白Caspase-3、Caspase-9表达量升高.上述结果表明,酒精能够诱导PC12细胞凋亡,诱导作用随浓度升高而增强且酒精诱导PC12细胞凋亡与线粒体凋亡途径有关.     

雷公藤红素脂质体的制备及其对脑胶质瘤U87MG细胞增殖的抑制作用

建立雷公藤红素的高效液相色谱分析方法,采用薄膜分散法制备雷公藤红素脂质体,并通过正交试验优化处方,对雷公藤红素脂质体的粒径、Zeta电位、形态、体外释放度和体外对脑胶质瘤U87 MG细胞增殖的抑制作用进行考察.结果显示雷公藤红素脂质体的体外分析方法简单可行,制备雷公藤红素脂质体的最佳处方为:药脂质量比1∶40,磷脂与胆固醇质量比6∶1,水化介质为10%(质量分数)海藻糖溶液.按最佳处方制备的脂质体粒径约160nm,Zeta电位为-35mV,包封率达到80%以上.所制备的雷公藤红素脂质体呈类球形,在体外释放实验中表现出良好的缓释作用,且其抑制U87MG细胞增殖的作用强于雷公藤红素溶液,半数抑制浓度(IC₅₀)为7.93μmol/L.综上,制备雷公藤红素脂质体的方法稳定可行,所制备的脂质体理化性质良好并可有效抑制U87MG细胞增殖.     

Sorafenib联合重组人可溶性TRAIL蛋白对K562细胞增殖抑制和凋亡诱导的研究

目的观察比较联合应用重组人可溶性TRAIL蛋白及Sorafenib于人慢性髓系白血病细胞株K562与单独应用时细胞增殖抑制及诱导凋亡的差异。方法通过CCK-8法检测两者对K562细胞的增殖抑制作用;Western-Blot分析TRAIL或与Sorafenib联用对K562细胞的凋亡诱导作用。结果 Sorafenib与TRAIL联合作用于K562细胞时,其细胞的增殖抑制率及凋亡率均显著高于二者单独应用。结论 Sorafenib与TRAIL对K562细胞的增殖抑制及凋亡诱导有增敏及协同作用。     

熊果酸抑制脂肪酸合酶及诱导HepG2细胞凋亡机制研究

采用MTT法检测发现熊果酸引起肝癌细胞HepG2活性下降的半抑制浓度IC50为68.23μmol.L-1,通过Hoechst 33258染色法检测得出熊果酸诱导HepG2细胞的凋亡,其作用强度呈药物浓度依赖性.在HepG2细胞培养过程中,加入熊果酸后细胞内脂肪酸合成酶（FAS）的表达量及活性降低.在培养基中添加棕榈酸钠可以在一定程度上补救熊果酸引起的HepG2细胞凋亡.推论熊果酸下调FAS的表达影响了脂肪酸合成,肿瘤细胞缺乏正常代谢所需要的能量及原料,导致肿瘤细胞凋亡.     

雷公藤红素缓解刀豆蛋白A诱导的小鼠急性肝损伤作用及其机制

将36只同一批次体重无明显差异的7周龄C57雄鼠随机分为6组,每组6只,即对照组,模型组,地塞米松(dexamethasone, DXM)组及雷公藤红素(celastrol, Cel)低、中、高剂量组(1.5、3、6 mg/kg),连续灌胃7 d后尾静脉注射20 mg/kg刀豆蛋白A(concanavalin A, ConA),地塞米松(0.5 mg/kg)于刀豆蛋白给药前1 h腹腔注射.注射8 h后处死小鼠,取其血清分别检测白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天冬氨酸转移酶(AST)的含量.取小鼠肝脾称重计算脏器系数,苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理改变,用实时定量PCR法(RT-qPCR法)检测肝组织中相关基因mRNA的表达水平,流式细胞术检测脾脏中巨噬细胞的极化方向,从而研究雷公藤红素对刀豆蛋白A诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制.结果显示:相较于正常组,模型组小鼠的肝组织明显发生急性肝炎,其小叶结构紊乱,肝细胞结构破坏,汇管区炎症细胞浸润,雷公藤...     

白介素12诱导T细胞凋亡的作用

目的：探讨白介素12（IL-12）对T细胞凋亡的作用。方法：用dUTP缺口末端标记（TUNEL）和Annexin V的方法测定IL-12诱导后T细胞凋亡率。结果：IL-12诱导人的白血病T细胞株TIB-152和人的淋巴瘤T细胞株HTB-176的凋亡。以50ng/mL的质量浓度作用效果最佳,作用时间在3和6d内达到最高峰。结论：IL-12能诱导T细胞的凋亡,其诱导作用从细胞早期质膜的改变开始,并与IL-12的浓度和T细胞成熟状态及作用时间有关。     

雷公藤红素治疗类风湿关节炎的组学联合分析

用雷公藤红素处理成纤维样滑膜细胞,通过RNA测序、定量蛋白质组学、分子对接、qPCR和Western blot检测和验证,筛选到差异基因和蛋白质,获得7 803个基因和3 372个蛋白质,雷公藤红素作用机制与氧化应激和氧气水平高低相关,也涉及细胞组分和细胞外基质蛋白的稳定和合成通路.结果显示,雷公藤红素可通过这些机制来...     

雷公藤甲素促进人鼻咽癌CNE-1细胞凋亡及机制

目的探讨雷公藤甲素促进人类鼻咽癌CNE-1细胞凋亡的机制。方法 MTT法检测雷公藤甲素对CNE-1的细胞毒作用;Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态学改变;Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白的变化。结果雷公藤甲素对CNE-1有强大的细胞毒作用,IC50为0.029±0.007μmoL/L;该化合物可浓度依赖性地诱导CNE-1细胞发生凋亡,出现典型的凋亡小体及细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的裂解活化。结论雷公藤甲素可浓度依赖性地诱导人鼻咽癌CNE-1细胞发生凋亡,且与Caspase-3的裂解活化有关。     

CPUY013对胰腺癌Capan2的生长抑制与诱导凋亡作用

探讨CPUY013对体外培养人胰腺癌细胞Capan2生长抑制及诱导凋亡作用.采用MTT法、克隆原形成法检测CPUY013对Capan2细胞生长的抑制作用,采用流式细胞仪分析CPUY013对细胞周期的影响,Western Blot法检测TopoⅠ、野生型p53、caspase-3、bcl-2和bax蛋白表达的变化.MTT法、集落形成试验结果显示,CPUY013对体外培养的人胰腺癌细胞Capan2有明显的生长抑制作用,处理72 h的IC50值为7.3×10^-7mol/L（MTT法）,CPUY013在8.0×10^-8mol/L浓度可以明显抑制Ca-pan2细胞的集落形成,抑制率为69.6%.同时,CPUY013可剂量依赖地降低Capan2细胞G1期细胞的比例,升高S期细胞的比例,呈现明显的S期阻滞.CPUY013可下调TopoⅠ蛋白的表达,上调细胞中p53、caspase-3、bax蛋白表达,下调bcl-2蛋白表达,并呈剂量依赖性.CPUY013对Capan2细胞具有明显的生长抑制作用,阻滞细胞周期进程,诱导Capan2细胞凋亡,其可能与降低细胞内TopoⅠ蛋白表达,增加p53、caspase-3、bax蛋白表达,降低bcl-2蛋白表达有关.     

PGC-1α对C2C12成肌细胞增殖的影响

PGC-1α(Peroxisome Proliferators Activated Receptor gamma coactivator 1 alpha)是一种核受体转录辅助激活因子,广泛参与机体的生物氧化和能量代谢活动.本实验以小鼠C2C12成肌细胞为材料,通过转染pc DNA3.1-flag-PGC-1α真核表达载体,并且与转染空载体的实验对照组比较,利用荧光定量PCR检测转染效果,利用MTT比色法检测PGC-1α对成肌细胞增殖的影响;结果显示,PGC-1α在C2C12成肌细胞中被成功超表达,在转染后的2-5 d,转染真核表达载体组与转染空载体组相比,显著抑制细胞增殖(P0.05),但在第6 d差异不显著.     

胃癌组织中细胞凋亡及细胞增殖的原位观察

应用bcl-2蛋白及增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组织化学技术和原癌基因 bcl-2原位杂交技术对50例胃癌、20例胃溃疡及20例胃正常粘膜中PCNA、bcl-2的表达进行原位观察，采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP末端标记（TUNEL）技术对12例胃癌、8例胃溃疡及10例胃正常粘膜中凋亡细胞进行原位观察，探讨胃癌细胞的增殖与凋亡之间的关系。发现PCNA和bcl-2免疫组化染色阳性物质及bcl-2原位杂交阳性物质在胃癌中的表达显高于正常胃粘膜及胃溃疡中的表达；TUNEL染色阳性物质在胃癌中的表达密度显低于胃溃疡及正常胃粘膜，在有淋巴结转移的病例中PCNA的表达显高于无淋巴结转移的病例，而bcl-2的表达无显差异；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级胃腺癌及不同临床病理分期（pT1、pT2、pT3）中PCNA及bcl-2的表达无显差异。因此，PCNA、bcl-2的高表达及凋亡细胞的减少与胃癌的发生密切相关；bcl-2与胃癌的发生有关，但与其发展及预后关系不大；PCNA与胃癌的发生、发展及预后均有一定关系。