显微操作方法捕获精子细胞及对其DNA分型结果研究

目的:研究显微操作方法捕获精子细胞的可行性,及精子细胞的分型结果。方法:用显微操作方法捕获精子细胞,并用QIAampDNAMicro-kit提取DNA,应用Identifiler试剂盒,采用二次扩增和添加酶量、增加循环数的方法进行扩增,最后用ABI3100遗传分析仪检测分型结果。结果:用显微操作方法成功提取到了细胞数目为100、50、10、5个的精子细胞样品并得到其分型结果。     

激光显微切割技术在植物细胞和分子生物学研究中的应用进展

激光显微切割技术是20世纪90年代后期发展,由现代物理学和生物学相结合的精确取材技术.该技术可以在显微镜下利用微激光束直接从不同的组织(包括活体组织)快速切割、分离和纯化生物体的目标组织、细胞及其组分,用于细胞和分子生物学的研究.笔者结合开展激光显微切割技术研究遇到的问题,从制片技术的改进、基因表达、DNA和蛋白质分析等方面,对激光显徽切割技术在植物细胞和分子生物学研究中的应用进行了综述.     

激光切割植物染色体的研究

文章探索了短脉冲激光与微细玻璃针相结合对黑麦染色体进行切割、分离的技术。该技术具有操作简便,节省经费,容易掌握,能减少染色体DNA的损伤,且可对整个细胞进行分离的优点,有利于促进染色体或染色体片段分离技术在进行DNA扩增,建立相应的DNA文库方面的普及和应用。     

基于Chelex-100和蛋白酶K的蚊虫足样本DNA提取技术

【目的】探索出一种蚊虫附肢(如单只足)微量DNA的提取方法,用于蚊虫分子鉴定和基因型研究。【方法】采用Chelex-100溶液和蛋白酶K结合的方法用于单只蚊虫足的微量DNA的提取。基于该方法,将不同方法保存的不同蚊种的足作为实验材料,从中提取蚊虫基因组DNA;以之为模板,扩增核糖体DNA的D2,D3,ITS2区以及线粒体COI和COII基因,并对PCR扩增产物进行测序。【结果】提取到了高质量的基因组DNA,PCR扩增获得了高质量的DNA扩增片段,进一步测序获得了高质量的序列。【结论】该方法价格便宜,操作简单方便,减少了对蚊虫样本的依赖。单只足用于DNA提取不影响对剩下的部分开展形态学等研究,可以作为蚊虫分子生物学研究中微量DNA样本提取的重要方法,也为其他昆虫微量DNA的提取提供理论依据。     

基于Chelex-100和蛋白酶K的蚊虫足样本DNA提取技术

【目的】探索出一种蚊虫附肢(如单只足)微量DNA的提取方法,用于蚊虫分子鉴定和基因型研究。【方法】采用Chelex-100溶液和蛋白酶 K 结合的方法用于单只蚊虫足的微量 DNA 的提取。基于该方法,将不同方法保存的不同蚊种的足作为实验材料,从中提取蚊虫基因组 DNA ;以之为模板,扩增核糖体 DNA 的 D2 , D3 , ITS2 区以及线粒体 COI 和COII 基因,并对 PCR 扩增产物进行测序。【结果】提取到了高质量的基因组DNA,PCR扩增获得了高质量的 DNA 扩增片段,进一步测序获得了高质量的序列。【结论】该方法价格便宜,操作简单方便,减少了对蚊虫样本的依赖。单只足用于DNA 提取不影响对剩下的部分开展形态学等研究,可以作为蚊虫分子生物学研究中微量 DNA 样本提取的重要方法,也为其他昆虫微量 DNA 的提取提供理论依据。
     

SLuCUT-A全自动激光显微切割系统植物染色体切割的研究

SLuCUT-A全自动激光显微切割是目前比较先进高效的染色体微切割、微分离和微收集系统。为使高精尖仪器设备在植物染色体遗传分析中广泛应用,此研究利用SLuCUT-A全自动激光显微切割系统对普通小麦"中国春"和中间偃麦草染色体进行了微切割、微收集和微克隆,并且以回收到的切割染色体(或染色体片段)为模板进行了DOP-PCRDNA扩增。     

食管鳞癌淋巴结转移的蛋白质组分析

分析食管鳞癌转移淋巴结中鳞癌细胞与食管鳞癌组织中鳞癌细胞的蛋白质的表达差异,获取鉴别两者的分子标志物。用激光捕获显微切割技术分离出食管鳞癌转移淋巴结和食管鳞癌组织中较纯的鳞癌细胞,运用双向电泳和质谱的方法检测两者表达的差异蛋白,并用免疫印迹技术对差异候选蛋白进行分析、验证。发现29个差异蛋白点,通过质谱鉴定出6种有意义的蛋白,转移淋巴结中的鳞癌细胞中如peroxiredoxin 1等5种蛋白表达明显增高,1种蛋白MTCBP-1表达下调。因此激光捕获显微切割可以有效地解决组织异质性的问题;食管鳞癌组织中的鳞癌细胞与转移淋巴结中的鳞癌细胞的2-DE蛋白质图谱具有明显的差异表达,提示食管鳞癌的淋巴结转移过程的发生是多种蛋白质功能共同作用的结果,从而造成肿瘤细胞迁移性和侵袭性的进一步增强。     

显微共焦拉曼光谱仪分析黑色圆珠笔油墨

目的对不同品牌的黑色圆珠笔油墨进行无损检验,以区分不同品牌的黑色圆珠笔油墨。方法结合激光散焦技术,用显微共焦拉曼光谱仪对不同品牌的黑色圆珠笔油墨进行比对分析。结果运用激光散焦技术,显微共焦拉曼光谱仪能有效地增强黑色圆珠笔墨迹的拉曼信号,区分不同品牌的黑色圆珠笔墨迹。结论该方法快速、简便、无需对样品预处理,为微量黑色圆珠笔油墨的比对检验提供简单而有效的检验方法。     

Identifiler与Identifiler Plus扩增试剂盒检验结果的比较

该文通过对Identifiler与Identifiler Plus扩增试剂盒对于含有PCR抑制物、DNA降解检材样本扩增结果的比较,结果表明:Identifiler Plus扩增试剂盒相比于Identifiler具有更好的抗PCR抑制物作用,对于低模板降解DNA样本具有更高的灵敏度。     

6个短片段STR基因座复合扩增的法医学初步研究

构建包括6个短片段STR基因座的复合扩增体系,应用于法医学DNA检验。采用荧光标记短片段引物建立复合扩增体系,对DNA样本进行检测,分型结果与DNATyper^TM15试剂盒及AmpFLSTR^S Identifiler试剂盒进行比较。利用该复合扩增体系可从高度降解检材中获得较好的DNA分型,大大提高高度降解检材的检出率。     

犬3个STR基因座遗传多态性研究

目的:研究犬的3个STR基因座PEZ12、VWFX、FH2054的遗传多态性,探讨其法医学应用价值。方法:应用自行建立的犬STR基因座复合扩增荧光检测系统,对90个无关个体犬唾液DNA样本进行复合扩增,用ABI310型遗传分析仪对扩增产物进行检测,并进行统计学分析。结果:90头犬的3个STR基因座遗传多态性研究结果表明,各基因座基因型分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡法则。各基因座杂合度均大于0.7,个体识别率在0.9291以上,非父排除率在0.5776以上,3个STR基因座联合识别率大于0.9999,联合非父排除率为0.9369,具有较高的个体识别率和非父排除率。结论:3个犬STR基因座复合扩增体系具有较强的个体识别能力,在法医学犬的个体识别和亲权鉴定中具有较高的应用价值。     

水稻染色体的显微分离与克隆

对水稻染色体识别、显微分离与切割、PCR体外扩增和微克隆进行了研究 .利用改进的显微切割装置 ,可以在 1 0 0×油镜下进行染色体分离与微切割 ,不仅解决了水稻染色体的识别和显微分离的困难 ,而且可使染色体特定区微切片段缩小到 7Mb级 ;利用 SUP-PCR可使 fg级水稻染色体 DNA扩增到 μg级 .电泳检测结果表明 ,扩增片断在 80～ 60 0 bp左右 ,经与 p UC1 9连接 ,转化大肠杆菌 DH5a,一次分离的单条水稻染色体可以获得 9×1 0 4克隆 ,一个 7Mb级片段可以获得 3× 1 0 4克隆 ,经分析 ,插入片段大小在 80～ 50 0 bp范围 .该方法为直接从水稻单条染色体或染色体特定区 DNA文库中筛选分子标记奠定了基础 .     

充分挖掘低拷贝检材在案件侦破中的价值

低拷贝检材常无法进行针对性提取,得到理想分型的难度较大.该文分别采用增加循环数、细胞富集、低模板试剂盒扩增等方法,提高该类检材的检出率.联合应用新技术、新方法,正确应用低拷贝检材检验结果,可提高低拷贝检材在案件侦破中的应用价值.     

DNA分析技术鉴别乌头初探

该文尝试建立一种利用DNA检验技术鉴别乌头的方法。通过提取50份乌头类及25份其他植物样本的DNA,用荧光特异性引物对乌头ITS2序列进行扩增,产物经3130XL测序仪进行检测分析,并进行测序入库比对。结果发现,试验中所有乌头类植物得到168bp的扩增产物,而其他对照植物均无扩增产物。由此表明,DNA分析技术对于鉴别乌头类与其他植物有一定的参考借鉴价值。     

PCR-RFLP中Chelex-100制备DNA模板的方法建立及其条件优化

目的:建立一种快速、可靠、经济的DNA纯化技术用于分子流行病学调查及群体遗传学的研究.方法:根据MMP3基因外显子2中rs679620的SNP区域(-Lys45Glu-)设计引物,采用Chelex-100法从微量全血中提取人基因组DNA,利用PCR-RFLP对其进行检测,观察基因分型结果.结果表明:取10μL全血,加入200μL 5%Chehx-100溶液,56℃水浴保温30 min后,100℃水浴8 min,离心取上清为最佳用于PCR的DNA模板提取条件.经PCR扩增及酶切验证,其DNA条带特异、清晰,适用于基因分型.结论:提取人基因组DNA的Chelex-100法所需血样微量、操作简单,快速、可靠、经济,特别适合于大量样本的DNA提取,可用于人群分子流行病学调查及群体遗传学的研究.     

琼脂糖电泳凝胶中回收微量DNA片段的新方法

对现有的DNA片段回收方法进行了改进.琼脂糖凝胶中目的DNA片段条带切割后,浸入适量的TE溶液(0.2～0.4 mL/g 琼脂糖胶),在37 ℃水浴保温15 min,以溶出凝胶中的DNA,利用相应的引物对浸出的微量DNA样品进行与原PCR反应相同条件下的PCR扩增,直接用75 %乙醇沉淀后,适量TE溶解得到回收的目的DNA样品.此法回收的DNA片段可用于分子克隆,特别是适用于TA载体的克隆与测序,适合大批量微量样品的准确回收,防止了因试剂盒回收造成的微量DNA片段的丢失.     

非伤害性取样在无尾两栖类保护遗传学研究中的应用

为了改变传统的将两栖类动物处死后再从肌肉提取DNA的取样方法,采用非伤害性取样方法分别采集了虎纹蛙的血液和趾提取DNA,并与从其肌肉中提取的DNA进行了比较,结果显示:使用血液和趾提取的DNA产量与肌肉样本的DNA产量相当;随后,分别对3种方法取样的样本进行了线粒体16S rRNA和核DNA的微卫星PCR分析,结果表明:3种取样方法所获得的扩增效果相当,均能满足虎纹蛙的保护遗传学研究.因此认为,用非伤害性取样技术替代传统的肌肉取样的方法在无尾两栖类的保护遗传学研究中是切实可行的.     

荧光定量PCR联合噬菌体生物扩增技术对检验结核性脑膜炎病原菌的价值评估

评估荧光定量PCR联合噬菌体生物扩增技术对检验结核性脑膜炎病原菌的临床价值。选取2013年7月至2017年7月,兰州市西固区人民医院感染科收治的102例的化脓性脑膜炎患者,随机分为对照组50例,研究组52例。经过腰穿之后取样本脑脊液,对照组患者样本应用传统的抗酸染色镜下观察法。研究组患者标本则应用荧光定量PCR联合噬菌体生物扩增技术进行分析。观察两组研究对象的病原菌阳性检出情况。对照组患者的结核分支杆菌检出阳性率为22.00%。研究组的结核分支杆菌检出阳性率为53.85%。研究组的阳性检出率明显高于对照组(P0.05,χ2=10.9467),差异有统计学意义。证明应用荧光定量PCR联合噬菌体生物扩增技术对检验结核性脑膜炎病原菌的检出率更高。应用荧光定量PCR联合噬菌体生物扩增技术检验结核性脑膜炎病原菌更佳敏感,操作简单易行,且噬菌斑培养周期极短。可在第一时间内给出较为准确的诊断,效果肯定,值得临床检验工作中推广应用。     

直接扩增法提取脱落细胞DNA

随着社会的发展,法医DNA检验的检材除了常见的血痕、精斑、唾液斑外,越来越呈现出微量化的趋势,比如盗窃案件中常常遗留的汗潜指纹、工具、手套等。这些现场的生物学检材,大多需要进行纯化提取,提取过程耗时、繁琐并伴有DNA模板的损失,特别对于微量检材,往往得不到STR分型。该文采用直接扩增法来检验,并同时采用M48核酸纯化试剂盒进行平行对比提取,结果表明直接扩增法对于微量检材的提取具有很好的效果。     

激光在林业中的应用

激光在各个领域里已广泛应用,在林业上的应用主要有以下几方面:一、激光切割木材这是一种高效的无锯屑切割技术.它是将聚焦的具有极高密度的激光束,射向木材表面,使木材产生强烈的热解和质变.当木材受到高热源作用时,其分子结构发生化学反应,结晶降解而达到切割的目的.在激光切割中.由于热应力和水汽蒸发等原因,最初木材表面发生微小裂隙,木材密度明显降低,开始熔融,当木材细胞完全被破坏变成碳化层时,木材即切割完毕.激光照射木材所引起的热解和质变现象不同于一般的木材碳化现象.目前应用激光切割木材的切割方式有瞬时气化法和灼烧法,它具有切缝窄,无燥音,能切割复杂工件等特点.二、采用激光技术调查森林