一氧化氮调节癌细胞中钙离子动力学

一氧化氮(NO)既能促进又能抑制癌细胞的增殖与转移,但是NO在癌细胞增殖与转移过程中所起作用的分子机理尚未明确.采用微孔板荧光检测技术观察NO对癌细胞钙离子浓度的调节作用,实验结果显示,外源性NO能使细胞内钙离子荧光强度显著增强,且增强程度与NO质量分数呈正相关;此外,NO引起的细胞内钙离子浓度增大主要是源于细胞内钙库的钙释放.研究结果有助于在细胞分子层面认识NO在癌细胞增殖与转移中的作用机制.     

一氧化氮调节癌细胞中钙离子动力学

一氧化氮(NO)既能促进又能抑制癌细胞的增殖与转移,但是NO在癌细胞增殖与转移过程中所起作用的分子机理尚未明确.采用微孔板荧光检测技术观察NO对癌细胞钙离子浓度的调节作用,实验结果显示,外源性NO能使细胞内钙离子荧光强度显著增强,且增强程度与NO质量分数呈正相关;此外,NO引起的细胞内钙离子浓度增大主要是源于细胞内钙库的钙释放.研究结果有助于在细胞分子层面认识NO在癌细胞增殖与转移中的作用机制.     

肿瘤抑制因子PTEN上调曲妥珠单抗(Trastuzumab)对胃癌细胞BGC-823的杀伤作用

进展胃癌患者往往失去手术等根治性治疗的机会;但目前西妥昔单抗(Cetuximab)、贝伐单抗(Bevacizumab)等分子靶向药物对胃癌极不敏感,仅有少数患者能够从曲妥珠单抗(Trastuzumab)治疗获益。检测肿瘤抑制因子PTEN上调Trastuzumab杀伤胃癌细胞作用及其分子机制。在胃癌细胞系中使用PTEN的抗体检测其表达水平。在最为公认的胃癌研究模型BGC-823细胞中利用脂质体转染PTEN的表达载体,检测其对胃癌细胞增殖等生物学行为的影响;利用系列浓度梯度的Trastuzumab处理胃癌细胞;并计算抑制率和IC_(50)值。在此基础上,利用MTT和Transwell等技术检测转染PTEN的表达载体对Trastuzumab杀伤胃癌细胞的影响。使用蛋白印迹方法(Western Blot,WB)检测PTEN对HER2下游信号通路AKT磷酸化的影响。结果是PTEN在胃癌细胞中的表达水平极低,过表达PTEN能够抑制BGC-823细胞的增殖作用。PTEN能够上调Trastuzumab抑制BG-823细胞的增殖、锚定非依赖性生长、体外侵袭/转移作用。说明PTEN具有对Trastuzumab杀伤胃癌细胞有增敏作用。     

内源性一氧化氮的生物学效应

一氧化氮是细胞内生成的气体信息分子 ,它穿过细胞膜 ,产生细胞间作用 ,对中枢神经系统内的胞间信息传递、心血管活动和免疫调节有明显的生物学效应 .一氧化氮释放异常具有细胞毒性作用     

茶氯香酰胺脂质体对人肝癌细胞生长和迁移的抑制作用

以茶氯香酰胺脂质体(TClC-L)为研究对象,研究其对人肝癌细胞(SMMC7721)生长和迁移的影响,并且探索其作用的分子机制,为研发抗肝癌新药提供科学依据.应用MTT法检测TClC-L对SMMC7721细胞生长的影响;应用划痕法和细胞流式分别检测TClC-L对SMMC7721细胞迁移和死亡的影响;应用Hoechst 33258染色检测SMMC7721细胞凋亡形态学变化;应用Western blotting技术检测TClC-L对SMMC7721细胞生长、凋亡和迁移密切相关蛋白表达的影响和其可能作用的分子机制.结果显示,TClC-L对SMMC7721细胞生长有显著的抑制作用,显示出剂量和时间的依赖性关系; TClC-L能够显著地降低SMMC7721细胞的迁移能力,促进其凋亡; TClC-L显著上调抑制肝癌细胞生长和诱导癌细胞凋亡的相关蛋白因子Bax、Caspase-3、PARP和迁移抑制因子E-cadherin蛋白的表达水平,下调促进细胞生长和迁移以及抗凋亡的相关蛋白因子Bcl-2、HGF、cMet、NF-κB、MMP9、VEGFR2、c-Myc蛋白的表达水平. TClC-L抑制人肝癌细胞SMMC7721的生长和迁移作用的分子机制涉及到HGF/c-Met/VEGFR-NF-κB信号通路.     

甲苯二异氰酸酯致支气管哮喘的机制研究

研究了甲苯二异氰酸酯(TDI)对小鼠肺内嗜酸性粒细胞(EOS)的影响和肺内一氧化氮(NO)及一氧化氮合成酶(NOS)含量的变化,结果显示,TDI可引起肺内EOS的浸润,导致肺内NO水平的升高,诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)活性增加,二者呈显著性正相关关系.     

一氧化氮：植物细胞次生代谢信号转导网络可能的关键节点

细胞内部的信号转导系统是介导真菌诱导子等外界因子诱发植物次生代谢产物合成的桥梁和纽带.一氧化氮是近年来发现的一种新型植物信号分子.近年来的研究表明,一氧化氮(NO)、水杨酸(SA)、茉莉酸(JA)、活性氧(ROS)等植物体内的主要信号分子(途径)不仅参与植物细胞次生代谢的信号调控,而且不同信号途径之间可以通过共催化、互抑制、共协调等作用相互交叉形成复杂的信号调控网络.文中简要介绍了国内外有关研究进展,重点结合本实验室的研究结果提出了以NO为关键节点的植物细胞次生代谢产物合成信号调控网络模型,提示了NO在植物细胞次生代谢信号调控网络中的潜在分子开关作用.     

黏着斑蛋白supervillin对胃癌细胞侵袭的促进作用

为了研究黏着斑蛋白supervillin(SVIL)在胃癌细胞(SGC)侵袭转移过程中所发挥的作用,利用脂质体转染的方法,将人源的p QCXIP-supervillin(pQCXIP-SVIL)质粒和pEGFP-C1质粒分别转入SGC细胞中,用G418或嘌呤霉素筛选得到稳定表达的GFP-SVIL(SGC-GFP-SVIL)和GFP(SGC-GFP-C1)细胞株,然后应用蛋白免疫印迹法(Western Blot)对这些细胞株进行鉴定,最后应用细胞侵袭实验对SGC、SGC-GFP-C1及SGC-GFP-SVIL细胞的侵袭能力进行比较,并对细胞SVIL、DNA以及皮层肌动蛋白进行免疫荧光染色.结果证实本研究成功构建了SGC-GFP-SVIL和SGC-GFP-C1细胞株.同SGC和SGC-GFP-C1细胞相比,过表达GFP-SVIL蛋白分子的SGC-GFP-SVIL细胞的侵袭能力更强.GFP-SVIL与皮层肌动蛋白在细胞中存在共定位,皮层肌动蛋白是侵袭性伪足的标志蛋白,与SGC及SGC-GFP-C1细胞相比,SGC-GFP-SVIL细胞中侵袭性伪足数量明显增加.根据这些结果认为,SVIL可能通过调节皮层肌动蛋白的表达和影响该蛋白分子在侵袭性伪足上的定位,从而影响胃癌细胞的侵袭能力.     

高糖和外源性硝化试剂导致人脐静脉内皮细胞蛋白质硝化的研究

采用细胞生物学及化学方法,检测了高浓度的糖和外源性硝化试剂作用于人脐静脉内皮细胞(ECV304)后所导致的细胞蛋白氧化损伤及硝化损伤.结果发现:高浓度的糖(30和40 mmol/L)可以导致细胞发生氧化损伤,主要包括降低细胞存活率、降低胞内还原型谷胱甘肽(GSH)的含量、增加胞内一氧化氮(NO)代谢产物亚硝酸盐和硝酸盐的含量;在细胞蛋白内也检测到蛋白质硝化的产物.研究发现:蛋白质硝化可以进一步加强细胞损伤的程度,而高浓度的糖和外源性硝化试剂导致的细胞蛋白硝化有所不同,其原因可能是在糖尿病血管并发症中蛋白质是有选择地发生硝化反应的.     

反义VEGF165基因对肝癌细胞生长的抑制作用

人肝癌细胞株SMMC-7721体外转染反义VEGR_(165)基因,观察反义VEGF_(165)基因对肝癌细胞生长的作用。用分子克隆的方法构建反义VEGF_(165)基因其核表达载体 pcDNA_3-as-VEGF_(165),用阳离子脂质体介导的基因转染技术,将反义基因转入SMMG-7721肝癌细胞株,观察反义VEGF_(165)基因抑制肝癌细胞 VEGF蛋白表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡的作用。RT-PCR结果显示转染反义VEGF_(165)基因后肝癌细胞内 VEG mRNA水平显著下降;ELISA方法显示转染反义基因 2 d后培养液上清 VEGF蛋白分泌显著下降((142.01±7.95)vs(1 625.52±64.46)pg/mL,n=4,P<0.01);免疫组织化学染色显示在培养板中转染及义VEGF_(165)基因的肝癌细胞细胞数显著减少,仅有少数细胞表达VEGF蛋白。流式细胞仪结果显示转染反义VEGF_(165)基因2 d后肝癌细胞的存活率下降了 12.53％(n=4,P<0.05),而凋亡率则上升了 13.12％(n=4,P<0.01)。MTT法显示反义VEGF_(165)基因能显著抑制肝癌细胞的增殖。反义VEGF_(165)基因能显著的抑制肝癌细胞VEGF蛋白的表达,抑制细胞的增殖,促进肝癌细胞凋亡。因此反义VEGF_(165)基因治疗有望成为一种新的治疗肝癌的方法。     

泽蛙(Rana limnocharis Boie)的核型及核仁组织者区(NORs)的研究

从染色体和分子水平上研究生物的系统发生是当今细胞遗传学的主要倾向之一.染色体的进化已成为生物进化的一个重要方面.众所周知,两栖类在生物进化的历程中占有特殊地位,它介于水生脊椎动物和陆生脊椎动物之间,对研究及认识动物界的演化有非常重要的意义.再加之它的染色体大,且数目少,因此是从染色体及分子水平上研究物种进化的好材料。本文报道泽蛙(R.limnocharis Boie)的核型及核仁组织者区(NORs)的研究,便是试图从这方面做些初浅的尝试。     

澳利用蜂毒开发抗癌药

澳大利亚一项利用蜂毒活性成分研制抗癌药物的研究计划最近获得阶段性成功.蜂蜜毒液中含有多种活性成分,其中最主要的是蜂毒肽,它可通过切开细胞壁杀死细胞的分子.研究人员须进一步解决的难题是.蜂毒肽的细胞杀灭活动只能以癌细胞而不能以正常健康的细胞为目标,研究人员打算通过把经过结构改造的蜂毒肽分子附着在一种抗体分子上的方法来解决这一难题.     

“一氧化氮养生法”让你远离心脑血管病

一氧化氮是生物学中最简单的分子之一。尽管它的结构及其简单,但目前一氧化氮被认为是体内最重要的信号分子,对机体健康至关重要。一氧化氮是一种很强的信号分子,存在于心血管系统、神经系统乃至全身。在一氧化氮的诸多作用中,以血管舒张作用最为重要。一氧化氮可舒张和扩张血管以确保心脏的足够血供。一氧化氮的另一个重要作用就是减慢动脉粥样硬化斑块在血管壁的沉积。我的研究强烈提示利用一氧化氮可以拮抗动脉粥样硬化斑块的形成。     

英合成有助控制癌症扩散的分子

英国研究人员最近合成了一种可以干扰细胞之间通信的分子,有望用于控制癌细胞扩散和细菌感染。新合成的这种分子是一种名为“UDP半乳糖”的天然物质的衍生物。它可以抑制细胞中的糖基转移酶发挥作用。     

果糖1,6-二磷酸酯酶研究进展

果糖1,6-二磷酸酯酶(FBPase)是糖异生途径中的关键酶,广泛分布于植物、动物及微生物中,研究其功能调控的分子机制具有重要的生物学意义.酵母细胞中只有一种FBPase,它会通过液泡途径或蛋白酶体途径等不同方式降解;高等植物及动物中则有不同亚型的FBPase,分别在植物光合作用及蔗糖和淀粉的合成以及人类血糖调控等过程...     

不同恶化程度胃癌细胞系的细胞间隙连接通讯功能及Cx43表达的差异

以人正常胃黏膜上皮细胞系GES-1和不同恶化程度的人胃癌细胞系(低恶化AGS细胞系、中恶化SGC-7901细胞系、高恶化BGC-823细胞系)为研究对象,采用激光共聚焦显微镜的荧光漂白恢复技术及划痕标记荧光染料示踪技术研究不同恶化程度的胃癌细胞系细胞间隙连接通讯(Gap junctional intercellular communication,GJIC)功能的差异;采用荧光定量PCR技术和间接免疫荧光技术检测间隙连接蛋白(Connexin43,Cx43)基因在mRNA和蛋白水平的表达差异,探求其与胃癌恶性程度的相关性.结果表明,在正常胃细胞系和低、中及高恶化胃腺癌细胞系中,细胞间的GJIC功能随着恶性程度的升高而减弱(AGS、SGC-7901)或消失(BGC-823),且Cx43蛋白及mRNA的表达量随着恶性程度的升高而下调(AGS、SGC-7901)或缺失(BGC-823).这提示胃癌恶性程度与胃癌细胞的GJIC功能显著相关(P<0.05),GJIC在胃癌发生中起重要作用.     

三七叶皂苷抗炎作用机理的实验研究

目的:研究三七叶皂苷(PnGL)对大鼠气囊滑膜炎的抗炎作用机理.方法:皮下注射角叉菜胶(Car)25mg/kg复制大鼠气囊滑膜炎模型,气囊灌洗液中白细胞数、蛋白含量、NO及TNF含量分别用试管稀释法、Lowry法、Rivanol法及酶联免疫吸附分析法进行.采用放免分析法进行气囊灌洗液中性粒细胞(Neu)内环磷酸腺苷(cAMP)含量的测定.结果:PnGL60,120,240mg.kg-1能剂量依赖性地升高中性粒细胞(Neu)内cAMP含量,抑制炎症介质肿瘤坏死因子(TNF)及一氧化氮(NO)水平的升高,显著降低灌洗液中白细胞数量及蛋白含量.相关分析显示,PnGL升高Neu内cAMP水平的作用与其降低TNF、NO含量的能力呈显著负相关.结论:升高Neu内cAMP水平及其抑制NO及TNF含量升高是PnGL发挥抗炎作用的重要分子机制.     

科学家研发出新型糖荧光分子探针

源性气体信号分子硫化氢可广泛参与调控机体多种生理病理过程,被认为是继一氧化氮、一氧化碳后第三种重要的气体信号分子。肝脏是产生硫化氢的主要组织,研究表明后者可能与肝损伤、肝炎、肝纤维化及肝硬化等病程发展直接相关。于是,发展可特异性检测肝细胞内硫化氢的分子探针,无论是对细胞生物学研究还是疾病诊断均有重要意义。基于荧光化学探针领域的前期工作基础     

黄连素调节eNOS/NO保护软脂酸诱导的HUVECs损伤作用机制研究

目的研究黄连素对软脂酸诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制.方法采用500μmol/L软脂酸培养HUVECs 24 h,建立内皮细胞损伤模型,MTT法观察黄连素对细胞存活率的影响;检测细胞培养上清液中一氧化氮(NO)含量;RT-PCR法检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)mRNA水平;Western blot方法检测e NOS和磷酸化e NOS蛋白的表达.结果与对照组比较,软脂酸组细胞存活率降低(P0.05),培养液中NO含量下降(P0.05),细胞内e NOS mRNA水平、e NOS及磷酸化e NOS蛋白表达水平均显著下降(P0.01,P0.05).与软脂酸组比较,黄连素组细胞存活率增加,培养液中NO含量明显提高(P0.05),细胞内e NOS mRNA水平和磷酸化蛋白表达水平均显著提高(P0.01,P0.05).结论黄连素对软脂酸引起的血管内皮细胞损伤有显著的保护作用,并可能与上调e NOS、促进NO生成有关.     

AgNOR定量分析在气管镜刷片及痰涂片细胞学辅助诊断中的意义

目的:利用核仁组成区技术(AgNOR)区分良性、中～重度不典型增生及恶性细胞;并探讨AgNOR分型与癌细胞类型的关系.方法:应用胶银染色技术检测259例气管镜刷片及痰涂片.结果:良性细胞均数(2.94±0.74)与恶性细胞均数(9.96±2.46),差异极显著(P<0.001),说明产生假阳性的机会很小.良性细胞与中度不典型增生细胞均数(3.85±0.65)和重度不典型增生细胞均数(5.36±0.95)差异极显著(P<0.001),有助于识别可疑癌细胞,鳞状细胞癌与腺癌和小细胞癌,腺癌与小细胞癌间差异显著(P<0.05),提示癌细胞的类型不同,AgNOR类型也有差异.AgNOR在腺癌细胞中颗粒粗大,色深;在鳞癌和小细胞癌中颗粒多为弥散型,细小,色浅.用AgNOR计数标准判断良恶性,其敏感性为97.1%,特异性为95.4%.结论:细胞学普通染色诊断困难时,AgNOR银染技术可以辅助诊断.AgNOR分型与癌细胞类型有显著相关性(P<0.05).