3-羟基丁酸对HeLa癌细胞生长与凋亡的影响

研究3-羟基丁酸对HeLa癌细胞生长与凋亡的影响.采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活力;AO/EB荧光染色观察细胞凋亡与坏死的形态学变化;单细胞凝胶电泳检测细胞DNA的损伤;流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测凋亡蛋白的表达.结果表明:3-羟基丁酸能够抑制HeLa癌细胞增殖;使HeLa癌细胞DNA受到损伤;通过caspase依赖性细胞凋亡途径诱导HeLa癌细胞凋亡;在HeLa癌细胞与人脐带正常细胞共培养条件下,3-羟基丁酸诱导HeLa癌细胞先于人脐带正常细胞凋亡.实验为肿瘤的生酮饮食疗法和酮体疗法提供了理论依据.     

葡萄糖饥饿对HeLa细胞形态与结构的影响

为了探究葡萄糖饥饿对HeLa细胞形态与结构的影响,采用噻唑蓝法检测了细胞活力;用倒置显微镜、荧光显微镜和电子显微镜观察了细胞形态与结构的变化;采用激光共聚焦免疫荧光技术观察了细胞微丝与微管的分布.结果表明:葡萄糖饥饿能够抑制HeLa细胞增殖,破坏细胞骨架,改变细胞形态;使细胞皱缩、染色质凝集,出现凋亡小体,微丝微管解聚,表现出典型的凋亡特征,且细胞凋亡程度呈葡萄糖浓度依赖性和处理时间依赖性.总之,葡萄糖饥饿能抑制HeLa细胞活性,改变细胞形态,诱导细胞凋亡.     

龙葵碱对HepG2细胞磷脂酰丝氨酸及断裂DNA研究

研究龙葵碱对肝癌细胞HepG2的诱导凋亡作用.采用倒置显微镜观察形态学变化,Annexin V-FITC联合PI双染法和Tunel法检测龙葵碱诱导人肝癌HepG2细胞凋亡作用.结果发现龙葵碱作用24 h后,贴壁细胞数量减少、体积缩小,变圆等明显凋亡形态;在激光共聚焦显微镜下观察到AnnexinV-FITC阳性信号为绿色荧光,PI为红色荧光;Tunel阳性信号为绿色荧光.表明龙葵碱通过诱导HepG2细胞凋亡达到抗肿瘤的作用.     

龙葵碱对HepG2细胞内[Ca2+]i的影响

探讨龙葵碱对HepG2细胞形态及细胞内[Ca~(2 )]i的影响,揭示龙葵碱诱导细胞凋亡的机制.以人肝癌细胞HepG2为研究对象,采用AO/EB双染HepG2细胞,激光共聚焦扫描显微镜观察细胞形态学改变,Fluo-3/AM单染HepG2细胞,激光共聚焦扫描显微镜观察细胞内[Ca~(2 )]i的改变.结果发现龙葵碱作用于HepG2 48h后,细胞形态出现典型的细胞凋亡形态;细胞内[Ca~(2 )]i浓度明显升高.表明龙葵碱升高细胞内Ca~(2 )浓度启动细胞凋亡机制.     

香豆素衍生物通过抑制细胞凋亡保护谷氨酸诱导的PC12细胞损伤

为了研究香豆素衍生物对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的影响,以谷氨酸建立体外培养PC12细胞损伤模型,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率。AO/EB双染法经荧光显微镜观察细胞凋亡形态,Annexin V/PI染色后经流式细胞术检测细胞凋亡率。结果表明香豆素衍生物可显著抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,在2.5-15μM/L剂量呈一定的量效关系,香豆素衍生物对谷氨酸损伤的PC12细胞具有保护作用。     

重组人骨形态发生蛋白-2和-6对人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的作用

为研究重组人骨形态发生蛋白rhBMP-2和rhBMP-6对人骨肉瘤细胞株MG63和U20S的作用,分别用含rhBMP-2和rhBMP-6及重组绿色荧光蛋白的条件培养液干预人骨肉瘤细胞MG63和U2OS,利用台盼蓝拒染法、TUNEL法、吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光双染法、Transwell小窒和碱性磷酸酶活性测定法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移以及成骨分化能力的变化.结果显示与未实施任何千预的空白对照组和用rGFP干预实验对照组相比.rhBMP-2和rhBMP-6的干预致两种骨肉瘤细胞株:细胞存活率均随时间逐渐降低;凋亡率呈时间依赖性增加;穿膜数明显减低;碱性磷酸酶(ALP)活性逐渐增加.以上差异均有统计学意义(P＜0.01).表明rhBMP-2和rhBMP-6可抑制人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的增殖和迁移、诱导其凋亡和向成骨细胞分化.     

葡萄籽提取物诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的实验研究

该文研究葡萄籽提取物(GSE)对前列腺癌PC-3细胞的生长抑制及凋亡作用,分析GSE诱导PC-3细胞凋亡的途径.采用四唑盐(MTT)比色法测定GSE对PC-3细胞的毒性作用;利用倒置显微镜、透射电镜观察GSE对PC-3细胞引起的形态学改变;碘化丙啶(PI)、吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双染法观察GSE诱导PC-3细胞凋亡的作用;Western blot探索细胞凋亡途径.结果表明,MTT法测定GSE能显著抑制PC-3细胞生长.倒置显微镜、透射电镜下可见细胞形态改变.PI染色显示,GSE将PC-3细胞周期阻滞在G0/G1期;GSE诱导PC-3细胞凋亡,AO/EB染色,荧光显微镜下可明显看到凋亡细胞、死亡细胞.Western blot显示GSE通过caspase途径诱导细胞凋亡.从细胞和亚细胞水平研究证实了GSE对人雄激素非依赖性PCaPC-3细胞具有毒性作用,GSE可通过线粒体途径诱导PC-3细胞凋亡和坏死,抑制细胞生长.     

佛手叶挥发油对HeLa细胞形态与结构的影响

探讨了佛手叶挥发油对HeLa细胞形态与结构的影响.采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,倒置显微镜、荧光显微镜和电子显微镜观察细胞形态与结构的变化,免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察微管的分布.结果表明:佛手叶挥发油能够抑制HeLa癌细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;不同浓度的佛手叶挥发油处理HeLa癌细胞24 h后,低剂量(200μg/mL)佛手叶挥发油使HeLa细胞皱缩,染色质凝集,出现凋亡小体,微管解聚,表现为典型的凋亡特征;中、高剂量(400和800μg/mL)佛手叶挥发油使HeLa细胞膜裂解,内容物外泄,细胞碎片增多,表明细胞已坏死.     

高糖高胆固醇诱导EA.hy926细胞凋亡中对HSPD1基因表达的影响

用高糖（25mmol/L葡萄糖）和胆固醇（0.8, 1.6, 3.2mmol/L）处理EA.分析高糖高胆固醇诱导EA.hy926细胞凋亡中对HSPD1基因表达的影响,研究表明随胆固醇浓度的增加,EA.hy926细胞活性下降,呈浓度依赖性.0.8mmol/L胆固醇低糖培养液培养12h的细胞活性与正常对照组无显著差异（P>0.05）,而0.8mmol/L胆固醇高糖培养液培养12h的细胞活性与正常对照组（高糖培养液+0mmol/L胆固醇）具显著性差异(P<0.01).低糖或高糖培养液+0.8mmol/L胆固醇处理EA.hy926细胞不同时间后,细胞活性呈时间依赖性下调,48h后细胞大部分变圆,脱落.高糖高胆固醇处理的细胞大部分发生凋亡（50%）,HSPD1基因表达显著上调.     

BDNF参与保护葡萄糖饥饿引起的微血管内皮细胞凋亡

目的:探讨脑源性神经营养因子(BDNF)是否参与葡萄糖缺乏状态下微血管内皮细胞的保护。方法:使用小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3细胞株构建葡萄糖饥饿模型，分别使用BDNF的siRNA及BDNF-TrkB通路阻断剂对经建模的微血管内皮细胞进行处理，使用流式细胞技术检测细胞凋亡，使用Western blot和qRT-PCR分别对BDNF及其他调控基因的表达进行研究。结果:葡萄糖饥饿会导致微血管内皮细胞凋亡，晚期凋亡水平随着缺糖时间增加而升高，且微血管内皮细胞BDNF表达量上调。在葡萄糖饥饿状态下，使用BDNF受体TrkB的抑制剂K252a阻断BDNF-TrkB通路能增加微血管内皮细胞的早期凋亡；抑制BDNF表达使微血管内皮细胞的凋亡升高。结论:BDNF参与保护葡萄糖饥饿引起的微血管内皮细胞凋亡，并参与非葡萄糖饥饿和葡萄糖饥饿状态下糖酵解关键调控基因PFKM表达水平的维持，从而在维持血管内皮细胞的存活及通过糖酵解供能中发挥重要的调控作用。     

佛手水煎剂对RAW264.7癌细胞增殖的影响

为了观察佛手水煎剂对RAW 264.7癌细胞增殖的影响,用生药量0.625,1.250,2.500和5.000 mg/mL的佛手水煎剂处理RAW 264.7癌细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞活力、台盼蓝排斥法测定细胞存活率、吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光染色法检测细胞凋亡与坏死.结果表明:与对照组比较,0.625,1.250和2.500 mg/mL佛手水煎剂处理后,RAW 264.7癌细胞固缩,细胞核染色质凝聚、片断化,有凋亡小体出现,表现出典型的细胞凋亡特征;5.000 mg/mL佛手水煎剂处理后,RAW 264.7癌细胞肿胀,细胞膜破裂,呈现坏死症状,RAW 264.7癌细胞的增殖明显受到抑制(P＜0.01),半数抑制浓度(IC50)为2.073 mg/mL.说明佛手水煎剂能诱导癌细胞凋亡,抑制癌细胞增殖.     

电穿孔诱发细胞凋亡和提高抗癌药物细胞毒性的研究

作者报道了电穿孔可以诱发HeLa细胞凋亡 ,采用Giemsa染料、吖啶橙染色及Hoechst33342 ,PI双染的荧光染色 ,研究了电穿孔对HeLa细胞凋亡的影响 .以HeLa细胞和胎儿脐带血淋巴细胞为材料 ,进行了电穿孔提高抗癌药物细胞毒性的研究 ,为电化学疗法在体内实验的可行性提供了依据 .     

龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的观察

观察龙葵碱对3种消化系统肿瘤细胞株人肝癌细胞HepG2、人胃癌细胞SGC-7901、人大肠癌细胞Ls-174的细胞毒作用.并从细胞凋亡角度揭示龙葵碱对敏感细胞株的作用机制.采用MTT法观察龙葵碱对3种肿瘤细胞株的细胞毒作用;采用AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微术(confocal)观察龙葵碱对HepG2肿瘤细胞形态的影响;PI单染,流式细胞仪测定龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的凋亡率及对细胞周期的影响.龙葵碱作用于HepG2、SGC-7901、LS-174的IC50分别为14.47μg/mL、(50μg/mL、(50μg/mL;在形态学观察实验中,阴性对照组细胞形态正常,0.003 2μg/mL、0.016μg/mL龙葵碱使细胞外周呈微弱皱缩状改变,0.08、0.4、2μg/mL龙葵碱使HepG2细胞出现大量碎片及凋亡小体等典型的细胞凋亡形态.凋亡率测定结果表明5个剂量龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡率分别为6.0%、14.4%、17.3%、18.9%、32.2%,0.08μg/mL喜树碱诱导HepG2细胞的凋亡率为21.9%.细胞周期观察发现龙葵碱各组G2/M期均消失,S期明显升高.龙葵碱对HepG2人肝癌细胞株比较敏感,能够诱导HepG2细胞凋亡,并将HepG2细胞阻止在S期,影响肿瘤细胞DNA合成.     

PKCθ-EGFP融合蛋白在HeLa细胞中的表达及其对细胞形态的影响

目的:分析增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与蛋白激酶C-θ(PKCθ)的融合蛋白(PKCθ-EGFP)在HeLa细胞中的表达、亚细胞定位及其对细胞形态的影响。方法:用脂质转染胺(Lipofec-tAMINE 2000)为载体分别以pPKCθ-EGFP和pEGFP-N1转染HeLa细胞,流式细胞仪分析其表达率,激光共聚焦显微镜分析其亚细胞定位,同时分析二丁酸佛波醇酯(PDB)和小檗碱对其亚细胞定位和细胞形态的影响。结果:转染pEGFP-N1或pPKCθ-EGFP的HeLa细胞48 h后,表达绿色荧光的细胞百分率分别为(70.9±4.4)%和(45.8±2.3)%(P<0.05)。表达的PKCθ-EGFP融合蛋白均匀分布于细胞内,与EGFP蛋白在细胞内的分布相似。PDB刺激30 min后,表达PKCθ-EGFP的HeLa细胞的形态发生显著变化,即由原来的梭形变成圆形,荧光强度增强。但表达EGFP的HeLa细胞的形态及荧光分布均不受影响。小檗碱对PDB诱导的HeLa细胞的形态和EGFP-PKCθ融合蛋白的分布无明显影响。结论:表达PKCθ-EGFP融合蛋白的HeLa细胞在PDB作用下细胞形态发生显著变化。     

加拿大蓬挥发油对Hela细胞的体外抗肿瘤活性初探

为了探讨加拿大蓬挥发油的体外抗肿瘤活性,采用MTT比色法探究挥发油对人宫颈癌Hela细胞的抑制作用,并采用AO/EB染色法观察Hela细胞在挥发油作用下的形态变化.结果表明:加拿大蓬挥发油对Hela细胞生长具有抑制作用,细胞活力随着处理浓度的升高和处理时间的延长而降低,其中处理8、24和48 h的IC50分别是22.72、18.06和6.78 mg/L,在加入泛caspase抑制剂(Z-VAD-FMK)后,这种抑制作用得到缓解,24 h的IC50上升至29.9 mg/L,表明该挥发油可能激活了Hela细胞中的caspase蛋白酶活性.AO/EB染色观察发现,加拿大蓬挥发油处理Hela细胞后使其呈现典型凋亡形态的特征.由此推断,加拿大蓬挥发油可能是通过诱导Hela细胞的凋亡来抑制细胞增殖.     

沙蚕活性物质的分离提取及对HeLa细胞的毒性分析

将采集于中国福建海岸的海洋环节动物沙蚕(Nereis virens)冷冻干燥后用不同极性的有机溶剂进行提取,提取物A2经硅胶柱梯度洗脱分离,发现石油醚/乙酸乙酯(体积分数1∶1)的洗脱组分B3有抗肿瘤活性.采用葡聚糖柱Sephadex LH-20对B3进一步等度洗脱分离,发现洗脱的组分C2有较高抗肿瘤活性.采用噻唑蓝(MTT)法测定组分C2对HeLa细胞的毒性,结果显示:该组分具显著的体外抗HeLa细胞活性,其IC50(48 h)达47.30μg·mL-1;AO/EB染色法观察细胞凋亡,结果显示药物处理48 h后细胞明显出现凋亡现象;流式细胞术探讨其抗癌机制,结果提示组分C2可能是通过诱导HeLa细胞发生G0/G1期和(或)S期阻滞而诱导细胞凋亡的.     

人脐带间充质干细胞在肝部分切除模型大鼠体内向肝样细胞的分化

目的:探讨人脐带间充质干细胞(MSCs)移植到肝部分切除模型大鼠体内能否存活并分化为肝样细胞.方法:用胶原酶消化法从人的脐带分离出MSCs,培养并检测人脐带来源的MSCs的细胞表面标志.取第5代人脐带MSCs用PKH26标记,制作大鼠肝部分切除模型,将标记的细胞经门静脉植入大鼠体内,观察移植后第1、2、3周细胞能否存活,以及移植细胞能否向肝样细胞分化,表达肝细胞的标记物白蛋白.结果:人脐带MSCs能在体外大量扩增,移植到肝部分切除模型大鼠肝脏后细胞能存活,并表达肝细胞标记物白蛋白,PKH26标记后细胞在荧光显微镜下发红色荧光,荧光显微镜下可见肝脏冰冻切片中散在分布的标记细胞,免疫荧光染色大多数标记细胞白蛋白染色阳性,并发绿色荧光.结论:人脐带间充质干细胞移植至大鼠体内能够存活并分化为肝样细胞,人脐带间充质干细胞可能作为肝细胞移植的重要来源.     

吖啶橙/溴工锭双荧光染色检测肿瘤细胞凋亡的方法与应用

近年来,肿瘤细胞的凋亡研究成了世界血液/肿瘤科医师研究热点,其中检测细胞凋亡的手段和方法是研究的关键之一.项目研究组在消化吸收国外先进技术的基础上,肯定了AO/EB双荧光染色不仅能清楚地鉴别被检细胞群体中早、晚期凋亡,还能定量分析凋亡细胞的百分率.该方法操作简单、费用极低,既能定性又能定量,有一定的创造性.     

异甘草素诱导小鼠黑色素瘤B16F0细胞凋亡的研究

为探讨异甘草素对小鼠黑色素瘤B16F0细胞诱导凋亡的影响。采用SRB法检测异甘草素对B16F0细胞增殖的影响;台盼蓝拒染法检测细胞致死率;吖啶橙/溴乙啶荧光染色法观察细胞凋亡形态;AO/EB和Hoechst 33258染色观察药物处理后细胞形态的变化;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染发检测细胞凋亡率;caspase-9/3试剂盒检测半胱氨酸蛋白酶-9和半胱氨酸蛋白酶-3的活性;QPCR法检测细胞凋亡相关基因B淋巴细胞-2,Bcl-2相关X蛋白的m RNA表达。结果显示,异甘草素能有效抑制B16F0细胞增殖,呈现浓度依赖性和时间依赖性,作用于B16F0细胞后呈现出明显的凋亡形态,同时随着异甘草素浓度的增加(0、24、45、65μg/m L),细胞凋亡率增加;caspase-9,caspase-3活性逐渐升高;Bax/Bcl-2比率上调(P0.05或P0.01)。由此可知,异甘草素能够显著诱导小鼠黑色素瘤B16F0细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。     

甘草查尔酮A抑制小鼠黑色素瘤B16F10细胞糖酵解表型和诱导凋亡

为探讨甘草查尔酮A对小鼠黑色素瘤B16F10细胞糖酵解表型和凋亡的影响。采用磺酰罗丹明B法检测甘草查尔酮A对B16F10细胞增殖影响的方法,比色法检测B16F10细胞外葡萄糖和乳酸含量,生物发光法检测细胞内ATP含量,Giemsa和Hoechst33258染色法观察细胞形态变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率。结果显示,甘草查尔酮A能有效抑制B16F10细胞增殖,呈现浓度依赖性和时间依赖性。随药物浓度的增加,B16F10细胞摄取葡萄糖能力减弱,细胞外乳酸含量和细胞内ATP含量明显降低。同时,细胞出现典型凋亡形态,细胞体积逐渐缩小,胞核皱缩,碎裂,呈现致密颗粒状荧光,且细胞凋亡率明显增加。由此可知,甘草查尔酮A能抑制B16F10细胞糖酵解表型和诱导细胞凋亡。