利用谷氨酸棒状杆菌高效表达枯草芽孢杆菌的谷氨酰胺合成酶发酵生产L-谷氨酰胺

谷氨酰胺合成酶(GS)是用于合成L-谷氨酰胺(L-Gln)过程中的关键酶,然而GS的酶活受到多种因素的影响,导致其酶活不强,产物L-Gln偏低.本研究以GS的基因为研究对象,构建谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)的高效表达系统.利用C.glutamicum中的两种强启动子:tac启动子(Ptac)和麦芽糖启动子(Pmal),比较不同启动子的作用下GS的酶活力;其次,为了避免腺苷酰化对C.glutamicum的GS的抑制作用,将GS的腺苷酰化位点突变成苯丙氨酸(Tyr405Phe);同时由于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的GS不受腺苷酰化作用的影响,故将Bacillus subtilis的GS基因导入到C.glutamicum的表达系统中,比较两种基因来源不同GS的酶活高低,以期达到高产L-Gln的目的.本研究第一次应用Bacillus subtilis来源的GS在C.glutamicum的系统中表达.最终的结果表明,在C.glutamicum的表达系统中,Ptac比Pmal的效果更好,来自Bacillus subtilis的GS比来自C.glutamicum的GS酶活力更高.重组菌BJ2有最高的酶活力和产量,L-Gln的最终产量达到32.5 g/L.     

植物谷氨酰胺合成酶研究进展

谷氨酰胺合成酶(GS)是参与高等植物氨同化过程的关键酶．介绍了高等植物谷氨酰胺合成酶及其同工酶的种类、性质、生理作用和分子生物学等方面的研究进展及在植物抗盐性方面的作用。     

水稻根谷氨酰胺合成酶同工酶某些性质研究

对水稻根两种不同形式的胺合成酶进行了动力学性质研究，ＧＳｍ对热比较稳定，而ＧＳｂ比较敏感，ＧＳ２ａ的最适温度为５５℃，ＧＳｒｂ为４３℃，ＧＳｒｃ的最适ＰＨ都为７．５ＧＳｒａ对Ｌ－谷氨酸，经胺和ＡＴＰ的表观Ｋｉａ分别为４．１６，０．６０和０．３４，而ＧＳ分别为５１．７３，０．６０和０．５８，ＭＳＯ对两均表现为竞争性抑制作用。     

一株高产谷氨酰胺合成酶的LNU 0165菌的鉴定

谷氨酰胺合成酶是应用广泛的生物酶类,以LNU0165为实验出发菌株,对不同pH、温度条件下产谷氨酰胺合成酶的最佳发酵条件进行了研究,通过测定其谷氨酰胺合成酶酶活力,确定LNU0165为高产菌株.从分子水平上对该菌株进行16S rRNA序列分析及同源性比较,以及生理生化的鉴定．根据LNU0165菌株16SrRNA与GenBank数据库中Arthrobacter globiformis的16S rRNA的序列具有99％的同源性,确定LNU0165为球形节杆菌（Arthrobacter globiformis）．     

一株谷氨酰胺合成酶高产菌株的酶学分析及其基因的克隆分析

对谷氨酰胺合成酶菌球形节杆菌(Arthrobacter globiformis)突变菌株Y3进行分析.其谷氨酰胺合成酶摇瓶发酵单位是原始菌株的2.81倍;最适反应温度为40℃;最适pH为6.5.以突变菌株和原始菌株基因组为模板,通过同源克隆策略,成功地获得了球形节杆菌谷氨酰胺合成酶基因gln片段.通过序列比对,突变菌株gln基因在第409 bp处产生T→C的碱基的突变,该处突变使酪氨酸(Tyr409)被组氨酸(His409)取代,该突变解决了谷氨酰胺合成酶腺苷酰基化问题,保证了其在高浓度铵盐条件下保持酶活性.     

黄色短杆菌ATCC14067生物合成L-谷氨酰胺的条件

本文报道黄色短菌(Brevibacterium flavum)ATCC 14067生物合成L-谷氨酰胺条件的研究结果。试验表明:培养基中的氮源种类,碳、氮浓度以及pH和通气量对L-谷氨酰胺的生物合成均有较大影响;所试金属离子亦有作用。在合适的培养条件下,该菌株可在发酵液中积累L-谷氨酰胺达26.83mg/ml。     

补充谷氨酰胺对运动小鼠谷氨酰胺代谢的观察

文章研究大强度长时间运动情况下,补充谷氨酰胺(Glutamine ,Gln)对血浆Gln、骨骼肌Gln合成酶和谷氨酰胺酶活性变化的影响,证明大强度运动时,经补充Gln能有效地提高血浆、骨骼肌Gln浓度,维持小鼠在运动中的Gln正常水平。     

L-谷氨酰胺发酵与分析

用钝齿棒状杆菌(Corynebacterium crenetum)Hu7251进行了L-谷氨酰胺发酵实验,探讨了一些影响L-谷氨酰胺生成的因素,并确定了发酵液中所含的氨基酸种类。该菌株在适宜的条件下,发酵72小时,生成L-谷氨酰胺达26.47mg/ml。     

林肯链霉菌林肯变种谷氨酰胺合成酶的研究

林肯链霉菌林肯变种是林可霉素的产生菌,研究中发现其菌丝体中谷氨酰胺合成酶的比活力与林可霉素的生物合成存在正相关性。在此基础上,报道了ＧＳ的分离纯化,分子特征,酶学性质和活力调节特性,采用硫酸铵分级沉淀,ＤＥ－５２离子交换层析,Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６Ｂ凝胶过滤等方法,从林肯链霉菌林肯变种中分离纯化了ＧＳ,用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一组分。     

重组枯草芽孢杆菌谷氨酰胺合成酶蛋白在改良M9培养基中的诱导表达

以重组枯草芽孢杆菌谷氨酰胺合成酶(L-谷氨酸:氨连接酶,Glutamine Synthetase, GS EC 6.3.1.2)蛋白表达宿主菌株BL21(DE3) (pET3C/谷氨酰胺合成酶)作为研究对象,借助SDS PAGE分析方法,对于用乳糖诱导由T7lac启动子控制的重组目的产物蛋白的各种基本参数进行了初步的研究.研究了最佳本底培养基、最佳碳源及其最佳添加比例、碳源与诱导物的最适组合,并探索了适用于改良型培养基的诱导参数.实验结果表明,对于重组目的产物蛋白,改良型M9培养基完全可以替代LB培养基;以甘油为碳源,可以避免葡萄糖对T7lac启动子的屏蔽作用.以乳糖为诱导物,目的蛋白的表达量、可溶性及酶活与以IPTG为诱导物基本接近.研究结果为酶法合成谷氨酰胺的工业化生产提供了一定的参考.     

嗜酸乳杆菌和青春双歧杆菌的最佳酸奶发酵条件的微量量热法研究

利用微量量热仪研究了嗜酸乳杆菌和青春双歧杆菌的发酵条件.首先绘制了各菌的热功率-时间曲线,计算出各菌的生长速率常数,确定了嗜酸乳杆菌、青春双歧杆菌及它们的混合菌生长的最佳pH和最佳温度.最后对发酵酸奶的质量进行了评价.     

木聚糖酶液体发酵条件的试验

研究了利用黑曲霉C3486液体发酵生产木聚糖酶的最佳条件:3%玉米芯木聚糖为碳源,3%的蛋白胨为氮源,培养基起始pH值为7.0,250mL三角瓶中装培养基50mL,培养时间为72h,温度为35℃。在上述最适条件下木聚糖酶的最高产量为14240U/mL,平均为14230U/mL。     

木聚糖酶固体发酵条件的试验

对采用黑曲霉C3486固态发酵生产木聚糖酶的条件进行了研究.确定了所试因素的最佳组合：麸皮与玉米芯的比例为7∶3,氮源是1.0%硫酸铵,培养基起始pH值为自然pH值,250mL三角瓶中装培养基15g,培养时间为72h,温度为40℃,接种量为5%.在上述条件下木聚糖酶的平均产量可达14kU/g.     

纤维素酶固体发酵条件的优化

对以稻草—麸皮为原料、以诱变后的黑曲霉LH2446为菌种固态发酵生产纤维素酶的条件进行了研究。试验确定所试因素的最佳组合为:稻草、麸皮比3∶2,硫酸铵2.0%,培养基起始pH值为自然pH,250mL三角瓶中装培养基10g,培养时间3d,温度35℃,表面活性剂Tween20 0.5%。在此条件下产纤维素酶的最高酶活为20100U/g,平均为19920U/g。     

茁霉多糖发酵工艺条件研究

以出芽短梗霉为生产菌株，蔗糖为碳源进行发酵生产茁霉多糖．通过摇瓶实验，确定了该菌株的发酵条件，并对发酵条件进行了优化，在此条件下，获得了较高的多糖产量．实验表明，摇瓶转速和发酵初始pH值是多糖发酵的重要影响因素，它们与多糖的合成密切相关．     

补充谷氨酰胺与运动能力的研究进展

谷氨酰胺是人体内非常重要的条件性必需氨基酸,其补充对于机体的运动能力有着重要的影响.本文在介绍谷氨酰胺的代谢过程及其作用的基础上,阐述了国内外关于补充谷氨酰胺对提高机体的运动能力的影响,及其改善运动机体的免疫能力,促进运动创伤后的恢复等方面的研究进展.