人生长激素诱导体外培养的大肠癌细胞株细胞周期动力学变化

研究人生长激素(Hgh)对大肠癌细胞增殖和分化的影响,收集人大肠癌细胞株Lovo和LS-174-T(简称174),以顺铂和/或不同浓度的Hgh体外培养细胞,24h后以流式细胞仪测定细胞增殖周期等指标.结果显示Hgh能诱导174细胞S期数率非常显著地增高(P<0.01);Lovo细胞100ng/Ml组Go-G1期参数下降(P<0.05),S期参数增加(P<0.01),200ng/Ml组G2-M期百分数增高,同时用顺铂和Hgh处理后,两株细胞S期数率均显著下降或无明显上升,并显著抑制了Lovo细胞的增殖指数(P<0.05),提高了对174细胞的DNA抑制率(P<0.01),并且导致174细胞大量凋亡和死亡.提示Hgh在体外应用于人大肠癌细胞能够使处于DNA合成期的细胞增加,为提高肿瘤对周期时相特异性化疗药物的敏感性提供了基础,顺铂能够抑制Hgh促DNA合成和细胞增殖的作用,并且导致细胞大量凋亡.     

抗人生长激素单克隆抗体的制备及鉴定

本文运用B淋巴细胞杂交瘤技术得到了4株稳定分泌抗hGH羊克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对其特性进行了鉴定。其腹水滴度高达0.6～10×10~5,亲和常数在0.53～9×10~9 M~(-1)之间。4种单克隆抗体的相应抗原决定簇分属于 hGH 分子表面3个不同区域;除1种单克隆抗体与 hPL 有交叉反应外,其余与hPL和hPRL皆无交叉反应。另外,本文采用的微量免疫法也有一定的实用价值。     

TPA增强gsp癌基因阳性人垂体生长激素腺瘤GHRP促生长？…

目的：探讨细胞内ＰＫＣ信号传导系统在人垂体生长激素腺癌ＧＨ分泌中的作用。方法：采用ＰＣＲ和直接序列分析法评价１０例肢端肥大症患肿瘤组织的ｇｓｐ癌基因的表达。肿瘤组织取自手术切除标本，作细胞培养，进行体外生长激素释放激素（ＧＨＲＨ）和蛋白激酶Ｃ激活剂ＴＰＡ对ＧＨ释放效应研究。结果：１０例病人中有３例（３０％）为ｇｓｐ癌基因是阳性，ＧＨＲＨ对ＧＨ刺激效应在本组中有２例表现出有这意义，ｇｓｐ阴性组７例     

人脐带静脉血管内皮细胞的体外培养及其凋亡的研究

本文从提取生长因子入手，建立人脐带静脉血管内皮细胞系，用电镜进行了细胞鉴定，然后用去除生长因子（FGF和胎牛血清）的方法诱导细胞凋亡，利用荧光显微技术、DNA凝胶电泳、电镜技术和流式细胞分光光度技术，研究了血管内皮细胞凋亡过程中超微结构和细胞周期的变化。发现去除生长因子3h后，在细胞发生明显的DNA片段化和形成凋亡小体的同时，细胞核与细胞质的超微结构发生了明显的变化，S期细胞显著减少，G1期无明显变化，G2细胞显著增多，说明用去除生长因子的方法诱导血管内皮细胞凋亡时，细胞从G2期脱离细胞周期进入凋亡程序，本文的人血管内皮细胞在体外的成功培养和对该细胞凋记的研究对深入研究其凋亡的分子调控机制具有重要的参考价值。     

金克诱导肿瘤细胞凋亡的细胞周期特异性定性

体外培养的Molt 4细胞与不同浓度的金克孵育,通过Sub G1法和PA法分析细胞凋亡率及细胞凋亡的周期时相性。发现浓度为1.5g/L的金克诱导G1期Molt 4细胞18h后细胞发生明显凋亡,36h后凋亡达到最高峰。金克诱导肿瘤细胞凋亡的周期时相性的阐明有助于揭示金克的抗肿瘤机制。     

昆虫细胞杆状病毒表达人生长激素的纯化及性质研究

在昆虫细胞杆状病毒中表达的人生长激素，经CM－52离子交换柱层析和Phenyl-Sepharose CL-4B疏水柱层析后，去除了93％杂蛋白。再用CNBr-activated Sepharose 4B亲和柱层析的方法，获得高纯度的生长激素样品。SDS－PAGE结果表明，纯化样品在SDS－PAGE图谱呈现一条带，分子量为22kD。Western杂交结果表明，纯化样品与生长激素标准品有相似的免疫活性。胰肽图谱分析结果显示纯化样品和标准品具有相同的一级结构。DNS－CL测N末端表明，纯化样品的N末端为苯丙氨酸，所有这些性质均与天然人生长激素相同。     

X连锁凋亡抑制蛋白对肺癌细胞生长和细胞周期的影响

为了研究靶向X连锁凋亡抑制蛋白的发夹状RNA对肺癌细胞中抗肿瘤作用,构建XIAP基因的shRNA表达载体,并设计阴性对照(psiRNA-Con)质粒,分别转染A549细胞;实时定量PCR和免疫印记法分别检测XIAP的mR-NA和蛋白的表达;四甲基偶氮唑盐试验(MTT)检测A549细胞的增殖;流式细胞术检测细胞周期分布。实验结果表明:转染psiRNA-XIAP组细胞XIAP mRNA和蛋白水平均低于正常对照组,生长慢于正常组(t=16.82和t=12.13,均P<0.01),G2/M期细胞所占比例增高(t=3.78,P<0.05),并出现亚G1峰。而阴性对照质粒psiRNA-Con未能下调XIAP的表达水平,对A549细胞增殖和细胞周期亦无明显影响。结论:针对XIAP的RNA干扰质粒特异性地抑制了其RNA和蛋白水平,使肺癌细胞A549生长减慢,诱导凋亡,并使其发生G2/M期阻滞,有望发展为新的抗肿瘤药物。     

人生长激素基因转化的小鼠胚胎干细胞特性的研究

报道了携带人生长激素基因（ｈＧＨ）的逆转录病毒载体ｐＩＮＳ－ＧＨ导入小鼠胚胎干细胞（ＥＳ细胞）ＣＣＥ后，虽然用放射免疫法未检测到ｈＧＨ基因的表达，但是，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交的结果表明，ｈＧＨ基因的确已经整合到细胞基因组中。对转化的ＥＳ细胞克隆进行了体内外分化能力及嵌合能力的检验，结果表明，经过一系列体外操作的ＥＳ细胞，仍具有分化成多种细胞类型的能力。转化的ＥＳ细胞通过显微注射注入囊胚后，能参与受体     

重组人生长激素脂质体的处方和制备工艺研究

目的:优化筛选rhGH脂质体的处方和制备工艺。方法:建立制备rhGH脂质体的乙醇注入法,以包封率为指标,通过单因素试验考察制备工艺,并用正交设计实验优化处方。结果:最佳制备工艺条件为膜材乙醇溶液注入速度2m.lmin-1,磁力搅拌速度60 r.min-1,水浴温度45℃,最优处方为脂药比的用量8:1,磷脂与胆固醇质量比为2:1,磷酸盐缓冲液的浓度为0.02mol/L。采用该工艺条件制备rhGH脂质体三批,平均包封率为64.9%,平均粒径为211.4nm。结论:乙醇注入法制备工艺简单,易于掌握,优选得到的脂质体处方和制备工艺稳定可行。     

化疗药环磷酰胺对癌细胞的细胞周期影响和诱导凋亡作用的研究

目的　研究化疗药环磷酰胺对癌细胞的细胞周期、DI值、PI值等某些生物学特性的影响及其诱导癌细胞凋亡的作用。方法　用BALB/c小鼠 ,荷腹水性肝癌 ,经腹腔给药CTX后 ,抽取腹水癌细胞进行形态学观察和流式细胞光度分析研究。结果　在环磷酰胺的作用下 ,癌细胞发生了凋亡 ,形态上观察到了许多凋亡细胞和凋亡小体 ;流式细胞光度分析发现 ,药物作用后 ,细胞周期发生了巨大变化 ,大多数癌细胞被阻断在G2M期 ,而G1期癌细胞明显减少 (P <0 0 5～P <0 0 1) ;同时 ,给药组癌细胞的DNA值和PI值亦明显增高 (P <0 0 5～P <0 0 1)。结论　环磷酰胺能够诱导癌细胞凋亡 ,而且对癌细胞的细胞周期一般规律有较大的干扰。分析认为这对癌症临床治疗会有一定启示。     

蛇床子素对人乳腺癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响

蛇床子素是从传统的中药蛇床子的果实中提取的香豆素类衍生物.在发达国家以及发展中国家,乳腺癌是发病率和致死率较高的女性肿瘤之一.本研究的目的是调查蛇床子素对人乳腺癌细胞的增殖、细胞周期以及凋亡的影响.蛇床子素的抗细胞增殖活性用MTF法测定.细胞周期的分布以及细胞凋亡用流式细胞术测定.本研究结果表明,蛇床子素对抑制乳腺癌细胞的增殖、促进G1期阻滞以及诱导细胞凋亡有明显作用.该结果提示有必要进一步研究和评估蛇床子素在乳腺癌治疗中的作用.     

可溶性人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞的凋亡

为研究可溶性人TRAIL蛋白（sTRAIL）对肝癌细胞株SMMC7721的生长抑制效应及凋亡诱导作用．采用显微镜、台盼蓝排斥试验、MTT比色试验、TUNEL法和DNA断裂实验等方法检测细胞增殖和细胞凋亡．通过显微镜观察到核染色质凝集等凋亡的形态学变化,台盼蓝排斥试验、MTT比色试验结果显示,sTRAIL蛋白可显著抑制SMMC7721细胞的生长和增殖,并且TUNEL法检测到经sTRAIL处理后的细胞凋亡指数与对照比较有显著差异,DNA断裂实验亦观察到典型的DNA梯形条带,这些结果提示sTRAIL可诱导肝癌细胞株SMMC7721发生凋亡,具有抗肝癌的作用．     

血清饥饿法诱导人角质细胞HaCaT细胞周期同步化的研究

探讨血清饥饿法对人表皮细胞HacaT细胞周期的影响．采用无血清和低血清浓度的DMEM培养基饥饿HaCaT细胞,分别培养6h,12h,22h时,用倒置显微镜观察细胞形态,并且收集各组细胞,用流式细胞仪分析细胞周期各个时相细胞百分比．结果发现HaCaT细胞系在含0．2％FBS的DMEM培养基中培养12h,细胞仍然贴壁生长,并且可以使G0／G1期细胞百分率达到66．5％．因此,血清饥饿法可以应用于人表皮细胞HaCaT同步于G0／G1期,从而为后期药物筛选打下基础．     

黄芩苷诱导Jurkat T细胞凋亡的体外研究

目的:研究黄芩苷(BA)抑制Jurkat T细胞(人T淋巴细胞白血病细胞株)的生长和诱导其凋亡的作用及机制。方法:以噻唑兰(MTT)比色法测定BA对细胞生长的抑制率;胞内[Ca2 ]i和线粒体跨膜电势(ΔΨm)分别用F luo-4/AM和D iOC6(3)荧光探针标记,流式细胞仪检测;PI染色流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率;凋亡细胞形态以Hoechst33342/PI染色后荧光显微镜观察。结果:BA明显抑制Jurkat细胞增殖(P<0.01),并呈时间、浓度依赖性;BA可浓度依赖的诱导Jurkat细胞[Ca2 ]i浓度上升、线粒体膜电势ΔΨm降低,将细胞周期阻滞在S期,凋亡率增加,荧光显微镜下可见经BA(100 mg/L)作用的细胞呈现典型的凋亡核固缩表现,胞核呈致密浓染的颗粒状荧光。结论:BA体外显著抑制Jurkat T细胞增殖及诱导其凋亡,其机制可能与胞内[Ca2 ]i及线粒体依赖的凋亡通路有关。     

齐墩果酸联合放疗对HepG2细胞周期和凋亡作用的体外研究

目的体外观察齐墩果酸(oleanolic acid,OA)联合放疗对肝癌HepG2细胞周期和凋亡的影响,探讨OA的放射增敏作用及其机制.方法对数生长期HepG2细胞分为对照组、单纯给药组(OA组)、单纯照射组(IR组)、照射与药物联合作用组(IR+OA组).MTT法检测细胞活力,Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学变化,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,Western blotting检测细胞周期相关蛋白表达.结果 OA显著增加射线的杀伤作用,联合组细胞的活力明显下降,凋亡率增高,细胞周期蛋白CyclinB1和Cdk1的降低,p-Cdk1表达量上升更明显,细胞G2/M期阻滞明显高于对照组(P0.05).结论 OA显著增加射线对肝癌细胞的杀伤作用,其机制可能与CyclinB1-Cdk1复合物的表达量减少和活性抑制、诱导细胞阻滞G2/M期有关.     

人胚肺二倍体细胞株KMB17在培养过程中的自然凋亡

用延长培养周期方法诱导人二倍体胚肺细胞株ＫＭＢ１７自然凋亡,经光学显微镜、荧光显微镜、细胞流式仪、电子显微镜,证明ＫＭＢ１７细胞出现典型的凋亡特征：细胞圆缩、细胞核浓缩破裂、核染色质凝缩后分布于核膜边缘呈新月状和典型的凋亡峰．研究表明人胚肺二倍体细胞（ＫＭＢ１７）在培养过程中易出现自然凋亡．提示可望通过提高细胞对环境压力的耐受能力,预防或延缓细胞培养过程中的自然凋亡,提高操作单元细胞产品的生产效率．     

维甲酸诱发人食管癌细胞分化与凋亡的分子基础…

利用１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸人食管癌细胞系ＥＣ１０９与ＥＣ８７１２细胞，以探讨维甲酸秀发人食管癌细胞终末分化与凋亡过程中的分子事伯上。对这些基因表达的变化在细胞终末分化与凋亡过程中的作用以及维甲酸作用的分子机制进行了分析。     

海洋生物提取物“KEMH”研究：对57例体外培养不同人癌细胞…

报导一种海洋生物提取物“ＫＥＭＨ”对５７例体外培养的不同人癌细胞杀伤作用的实验。结果表明：“ＫＥＭＨ”对体外培养的人癌细胞有很强的杀伤作用，癌细胞对“ＫＥＭＨ”的敏感度总有效率达５５．４％。本文以１０例以上者按不同癌细胞对“ＫＥＭＨ”的敏感度进行分组统计，指出“ＫＥＭＨ”对肺癌细胞的杀伤率最高，与９４％；对乳癌细胞为６８％；对胃癌细胞为５３．１％。与对照组比较，Ｐ值差异性显著。与常规较有效的抗癌药     

KA2012HRS复合提取液对K562细胞凋亡的诱导作用和细胞周期的阻滞作用相关研究

KA2012HRS复合提取液是以新鲜海参为主料的口服生物制剂,具有良好的抗疲劳、提高免疫力的功效.研究发现KA2012HRS复合提取液具有良好的体外抗肿瘤活性,同时可有效克服P-gp介导的肿瘤多药耐药,并且具有一定的肿瘤细胞选择性.对KA2012HRS复合提取液抗肿瘤机理进行了初步研究,结果表明:KA2012HRS复合提取液与K562/S细胞相互作用后,可将其细胞周期阻滞在S期,并使其线粒体膜电位显著降低,从而诱导该细胞发生凋亡.本研究提示,KA2012HRS复合提取液将具有良好的开发前景.     

红曲橙色素对人胃腺癌细胞AGS诱导凋亡的作用

经分离纯化获得红曲霉发酵产品中的一种橙色素,通过HPLC-MS和NMR检测,确认为Monascorubrin,分子组成为C23H26O5.体外实验表明,该色素组分能有效抑制人胃癌细胞AGS的增殖,IC50值为7.98±0.71μmol·L-1.5μmol·L-1药物处理24h,93.70%AGS细胞进入凋亡前期.细胞凋亡程度与药物浓度呈正相关关系.该色素组分对AGS细胞生长抑制效果显著优于紫杉醇(P0.01),且对人正常胃上皮细胞(GES-1)的毒性作用较紫杉醇小(P0.05).