调控TAp73α介导的结直肠癌细胞HCT116对顺铂的敏感性

microRNA调控靶向基因的表达,影响其细胞周期进程、凋亡等过程的进行.采用双荧光素酶报告基因的方法, 发现miR 330可以降低结合P73 3′UTR的荧光活性, 同时在HCT116细胞中, 慢病毒过表达miR 330可以抑制内源性TAp73蛋白的表达, 在此基础上, 用cisplatin处理细胞后, 过表达miR 330的细胞加速凋亡, 而这一过程在恢复TAp73的表达后,细胞凋亡活动又被减弱. 另一方面, 包装慢病毒shRNA P73感染HCT116细胞所引起的生物学效应与miR 330一致. 而且这种作用不依赖于p53. 所以, 在结肠癌细胞HCT116中, 过表达miR 330可下调P73的表达并增强细胞对治疗药物顺铂的敏感性, 为治疗顺铂抗性的肿瘤细胞提供了一条新途径.     

miR-106b/miR-93降低了宫颈癌细胞对顺铂化疗的敏感性

宫颈癌是仅次于乳腺癌的第二大妇科癌症.顺铂是临床上最常用的化疗药物,治疗过程中引起的顺铂抗性会导致化疗失败.越来越多的报道证实miRNA介导了癌症对化疗药物的敏感性.尽管已经发现miR-106b/miR-93促进多种癌症的发生发展,但是miR-106b/miR-93在宫颈癌中的功能鲜为人知.本研究发现miR-106b/miR-93在宫颈癌组织以及宫颈癌细胞系的表达高于正常宫颈组织.在HPV(+)宫颈癌细胞系中,miR-106b/miR-93的表达水平与细胞系对顺铂敏感性的程度相关;高表达miR-106b/miR-93可以降低宫颈癌细胞系对顺铂的敏感性;反之,miR-106b/miR-93的干扰表达可以提高宫颈癌细胞系对顺铂的敏感性.此外,我们发现RAD1是miR-106b/miR-93共同调控的靶基因.研究结果提示了miR-106b/miR-93通过负调控RAD1降低了宫颈癌对顺铂化疗的敏感性.     

顺铂对Tca8113细胞线粒体以及内质网凋亡相关蛋白的影响

本文通过探讨顺铂对人舌鳞状细胞癌细胞Tca8113细胞线粒体与内质网凋亡蛋白的影响,探讨顺铂诱导Tca8113细胞发生凋亡的机制。体外培养Tca8113细胞,顺铂(CDDP)作用后,通过MTT检测Tca8113细胞增值率;Western Blotting检测顺铂对Tca811细胞线粒体凋亡以及内质网凋亡相关蛋白表达水平的影响。与对照组相比较,CDDP可以明显抑制Tca811细胞的存活率,差异有统计学意义(P﹤0.05);Western Blotting结果显示,顺铂可以明显的增加线凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3的表达水平。另外,CDDP可以增加线粒体凋亡相关蛋白Bax的表达,以及内质网凋亡相关蛋白CHOP的表达。顺铂可以诱导Tca8113细胞发生凋亡,其凋亡可能通过线粒体与内质网凋亡信号通路共同发挥作用。     

溶菌酶与顺铂联合应用对肝癌SMMC-7721细胞的协同抑制效应

目的: 探讨溶菌酶(lysozyme,Ly)和顺铂(cisplatin,Cis)对肝癌细胞SMMC-7721生长的协同抑制效应及其抑制机制,并分析Ly对正常肝细胞LO2的毒性作用.方法:分别用MTT比色法和RT-PCR 观察Ly与Cis联合应用对SMMC-7721细胞生长的抑制作用以及对PCNA、bcl-2的mRNA 表达水平的影响,同时测定Ly对LO2细胞生长的毒性作用.流式细胞仪观察Ly与Cis联合应用对SMMC-7721细胞诱导凋亡的作用. 结果:Ly能有效地协同Cis抑制SMMC-7721细胞生长,抑制率最低36%,最高82%,呈时间、剂量依赖性关系,但在同样浓度下对LO2细胞几乎没有抑制作用.联合用药组的PCNA、bcl-2的mRNA的表达水平均比对照组明显降低.流式细胞仪分析显示,Ly协同Cis作用可诱导SMMC-7721细胞凋亡,最高凋亡率为32.5%.结论:溶菌酶 (Ly)能有效地协同Cis抑制SMMC-7721细胞增生并促进其凋亡,其机制可能与Ly协同Cis降低PCNA和bcl-2的mRNA表达有关.     

顺铂对卵巢癌细胞几种生长和凋亡相关基因表达的影响

顺铂是治疗卵巢癌的一线药物,它与癌细胞内的DNA结合是产生细胞毒性的主要原因.在用基因表达谱芯片筛选顺铂处理IGROV-1细胞产生的差异表达基因基础上,选取其中与细胞生长、凋亡有关的部分重要基因,用实时定量PCR方法进行了差异表达验证.结果表明,顺铂可引起CEACAM1、KLF6、JUN、TP53INP1、MAP2K4...     

顺铂与白藜芦醇对体外人胃癌细胞的影响

目的:观察顺铂(DDP)、白藜芦醇合并用药前后对人胃癌细胞影响的实验研究.方法:用MTT法观察其对体外培养的人胃癌细胞SGC-7901,在DDP与白藜芦醇合并用药前后对细胞存活率的影响,并通过流式细胞仪检测细胞周期变化,透射电镜观察细胞超微结构变化.结果:DDP与白藜芦醇合用与单独应用化疗药相比细胞存活率明显下降,其增效倍数为单独用药的2.61~4.21倍(P<0.01),细胞生长停止在S期,S期数分数为0.52,抑制细胞有丝分裂及DNA合成,细胞超微结构显示:细胞核固缩、空泡形成、微绒毛减少、线粒体及内质网肿胀.结论:研究表明顺铂与普通中药合用,可获得化疗药单独用药相同疗效,白藜芦醇能增加化疗药对肿瘤细胞的细胞毒作用,增加敏感性,减少药物副作用.     

顺铂与丝裂霉素对体外人胃癌细胞的影响

进行了顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)合用对人胃癌细胞影响的实验研究.用MTT法观察其对体外培养的人胃癌细胞SGC7901,在DDP与MMC合并用药前后对细胞存活率的影响,并通过流式细胞仪检测细胞周期变化,透射电镜观察细胞超微结构变化.DDP与MMC合用与单独应用化疗药相比细胞存活率明显下降,其增效倍数为单独用药的2.52～4.36倍(P＜0.01),细胞生长停止在S期,S期数分数为0.49,抑制细胞有丝分裂及DNA合成,细胞超微结构显示细胞核固缩、空泡形成、微绒毛减少、线粒体及内质网肿胀.结果显示,顺铂与小剂量化疗药物合用,可获得化疗药物单独用药相同疗效,丝裂霉素增加化疗药对肿瘤细胞的细胞毒作用,增加敏感性,减少药物副作用.     

肝癌患者顺铂治疗后癌细胞凋亡情况的观察

【目的】通过对肝癌患者使用顺铂治疗后,观察肝脏癌细胞凋亡情况,探讨对肝癌患者手术治疗前实施化疗的必要性.【方法】对手术切下的肝脏肿瘤组织制成细胞悬液进行荧光染色,用流式细胞仪进行细胞凋亡检测,运用统计学方法Satterthwaite近似法对这两组标本进行t检验.【结果】经顺铂治疗的病人较对照组的癌细胞细胞增殖指数显著降低,癌细胞凋亡率显著提高,而细胞增殖指数显著降低,提示诱导细胞凋亡发生是顺铂对肿瘤细胞抑制作用的主要方式.【结论】小剂量CDDP诱导治疗肝癌,作为综合治疗肝癌方法的一种是可行的,特别是在外科治疗（肿瘤切除或减低肿瘤负荷）前,作为辅助治疗能防治肿瘤的复发和转移.     

吉西他滨联合奈达铂或顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的：观察晚期非小细胞肺癌应用吉西他滨联合奈达铂及吉西他滨联合顺铂治疗疗效及不良反应。方法：选择经病理组织学或细胞形态学检查确诊为非小细胞肺癌的晚期患者60例,随机分组,吉西他滨联合奈迭铂组31例：给予吉西他滨1000mg／m^2,加入生理盐水100ml静脉滴注约30分钟,dl、8,奈达铂80mg／m^2,加入生理盐水500ml静脉滴注,滴注时间不少于2小时dl;每21天重复1次,连用2-6周期,吉西他滨联合顺铂组29例：给予吉西他滨1000mg／m^2,dl、8,顺铂25mg／m^2,dl-3,水化;每21天重复1次,连用2-6周期。两组均给予常规止吐治疗。每2周期评价疗效及不良反应。结果：两组有效率分别为38．71％和44．82％,中位生存期分别为9．1个月和104个月,差异均无显著性（P〉0.05）。GN方案组骨髓抑制尤其是血小板减少略高于GP方案组,但无显著性差异（P〉0．05）;GN方案组消化道反应为5484％％,GP方案组为82．76％,有显著性差异（P〈0．05）。结论：吉西他滨联合奈达铂治疗晚期肺癌有较好的疗效,并且毒性反应可以控制。值得临床推广使用。     

miR-9-5p靶向调控ZAK对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:阐明miR-9-5p通过靶向调控ZAK表达从而影响结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的分子机制。方法:通过qPCR、Western blot检测结直肠癌细胞系(HCT116、SW260、HT29及LoVo)及结直肠癌患者组织样本中miR-9-5p表达水平及ZAK的mRNA和蛋白表达水平。生物信息学方法分析miR-9-5p与ZAK结合的靶向序列。双荧光素酶基因报告实验检测miR-9-5p对ZAK的靶向调控关系。脂质体法将miR-9-5p mimic或/和ZAK质粒共转染结直肠癌细胞系HCT116及SW620,通过CCK-8及克隆形成实验观察miR-9-5p/ZAK信号轴对细胞增殖的影响,通过Transwell观察对细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:与人正常上皮细胞系相比,在结直肠癌细胞系中ZAK的mRNA及蛋白水平显著上调(P<0.05);在结直肠癌临床组织样本中,ZAK蛋白水平亦显著上调(P<0.05);miR-9-5p的表达水平在癌细胞系及组织样本中下调(P<0.05)。双荧光素酶报道基因实验显示miR-9-5p能显著影响ZAK 3’UTR野生型表达载体的荧光素酶...     

rh—bFGF抑制顺铂诱导的人胃腺癌BGC—823细胞凋亡

目的：评价外源加入的rh-bFGF对抗肿瘤药物顺铂所致人胃腺癌细胞凋亡的影响。方法：利用顺铂诱导人胃腺癌BGC-823细胞产生的凋亡作模型,体外培养时在顺铂作用前或作用后加入不同浓度的rh-bFGF,观察细胞形态的变化和细胞凋亡经率的变化。结果：预培养的rh-bFGF质量浓度为10ng/mL及1ng/mL时抑制细胞凋亡的发生,共培养时则在质量浓度为1ng/mL时产生抑制调亡的作用。结论：外源加入的rh-bFGF在一定的浓度范围内,不信纸预培养还是与顺铂的共培养12h,均可不同程度的抑制顺铂胃腺癌BGC-823细胞的凋亡,并且这种剂量效应与rh-bFGF影响BGC-823细胞的细胞周期相关。     

长链非编码RNA LINC00478抑制微小RNA-214对口腔鳞癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨长链非编码RNA LINC00478对口腔鳞癌细胞顺铂耐药性的影响及其对微小RNA-214(miR-214)的靶向调控作用.方法:采用qRT-PCR法检测口腔鳞癌组织、癌旁组织中LINC00478、miR-214的表达量;体外培养口腔鳞癌细胞CAL-27,建立顺铂耐药性细胞CAL-27/DDP,分别将pcDN...     

国产吉西他滨联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的:观察国产吉西他滨(GEM,泽菲)联合顺铂(PDD)治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效及毒性反应.方法:34例NSCLC患者采用GP方案(GEM 1 000mg/m2,第1、8天静脉滴注,PDD40mg/m2,第8、9天静脉滴注),21d为1周期,全组病例均接受2个或2个周期以上治疗.结果:34例患者共化疗87个周期.总有效率(CR PR)44.1%(15/34).毒副作用以白细胞和血小板下降为常见,但均可耐受.结论:吉西他滨联合顺铂对晚期非小细胞肺癌有较好的疗效,且毒副反应可耐受,值得进一步研究及推广应用.     

多西他赛单药与多西他赛联合顺铂二线治疗晚期非小细胞肺癌的疗效观察

[目的]比较多西他赛单药与多西他赛联合顺铂二线治疗晚期非小细胞肺癌(NSLCL)的临床疗效及毒副作用.[方法]2007年10月～2009年5月间,经一线治疗后进展的晚期非小细胞肺癌(ⅢB/Ⅳ期)患者共81例,随机分为多西他赛单药组(D组,n=40)与多西他赛联合顺铂组(DP组,n=41),单药组给予多西他赛75 mg/m2,d1;联合组给予多西他赛75 mg/m2,d1;顺铂80 mg/m2,分3 d给药,每21 d重复1次.[结果]两组均无CR患者,疾病控制率(DCR)分别为35%、46.3%(35%vs 46.3%,P=0.208).联合组PFS较单药组延长1.2个月(3.0月vs 4.2月,P=0.002),差异有统计学意义.在毒副作用方面,联合组血液学毒性发生率明显高于单药组,Ⅲ/Ⅳ度自细胞下降在单药组2例,联合组为12例(15%vs 29.2%12,P=0.032);Ⅲ/Ⅳ度血小板减少分别为2例和7例(5%vs19.5%,P=0.035);非血液学毒性最常见的是消化道反应,Ⅲ/Ⅳ度发生率在单药组和联合组分别为2.5%和14.6%(2.5%vs14.6%,P=0.122),差异无统计学意义.[结论]多西他赛联合顺铂用于晚期非小细胞肺癌二线治疗可以明显延长无进展生存,但毒副作用尤其是骨髓抑制较为明显,不能显著提高疾病控制率,因此多西他赛联合顺铂在晚期NSCLC二线治疗中的作用还有待研究.     

柯里拉京对顺铂抗卵巢癌Hey和SKOV3细胞的增敏作用

探讨柯里拉京(corilagin)与羟基喜树碱(HCPT)、顺铂(cDDP)单独及联合用药,体外抗卵巢癌细胞Hey,SKOV3的活性及与cDDP联用机制的初步研究.利用四唑盐(MTT)比色法检测柯里拉京,HCPT,cDDP在不同质量浓度下,单独及联合用药对卵巢癌细胞的增殖抑制率,并根据金氏公式计算其协同指数(Q),进而评价两药联用的增敏效果.通过形态学观察吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)和Hoechst 33258染色及线粒体膜电位变化,探究其诱导机制.结果表明:柯里拉京对卵巢细胞Hey,SKOV3的半抑制浓度(IC₅₀值)分别为19.20,17.17 μmol·L^-1;柯里拉京与cDDP联合作用对于SKOV3,Hey两种细胞均有协同作用,与HCPT联用只对SKOV3细胞有协同作用,对Hey细胞仅是相加效应;联合用药组对卵巢癌细胞的抑制效果显著高于单独用药组;柯里拉京与cDDP联合用药对卵巢癌细胞的杀伤效果可能是通过诱导细胞凋亡实现的.     

美洲大蠊多肽和顺铂联用对HepG2细胞凋亡及自噬的影响

采用MTT法检测美洲大蠊多肽（PAP-3）与不同浓度的顺铂（DDP）单用或联合使用对人肝癌HepG2细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测PAP-3、DDP单独或联合给药干预对HepG2细胞凋亡的影响;Western Blot检测PAP-3、DDP单独或联合给药后HepG2细胞内自噬相关蛋白p62、LC3、Beclin-1、Atg5及PI3K的表达。实验结果显示,与DDP单独给药相比,PAP-3与DDP联合给药对HepG2的细胞的抑制作用更强;PAP-3与DDP联合给药组中细胞的凋亡率与DDP和PAP-3单独给药组相比均有升高（P ＜ 0.05)。与对照组相比,DDP组中,p62蛋白水平降低,LC3II蛋白水平升高,LC3II/I的比例也升高,表现出细胞自噬流的活化;与DDP组相比,联合给药组中p62蛋白水平回升,LC3II蛋白水平和LC3II/I的比例均有回落。且联合给药组中PI3K、Atg5、Beclin-1等自噬相关蛋白的量均较DDP组减少,而凋亡相关的Caspase-3蛋白的表达量则较DDP组增加。据此推测,PAP-3和DDP的联用可以通过抑制HepG2细胞自噬相关蛋白的表达水平,抑制DDP带来的细胞自噬水平的升高,增加细胞对DDP的敏感性,从而诱导HepG2细胞凋亡。     

地西他滨对卵巢癌SKOV3的细胞 凋亡和增殖的影响

目的:探讨地西他滨(DAC)对人卵巢癌细胞株SKOV3的细胞凋亡和增殖等细胞生物学方面的影响.方法:采用不同浓度的地西他滨(10、100、 200 nmol/L)处理人卵巢癌细胞株SKOV3后,通过流式细胞仪检测地西他滨对人卵巢癌细胞株SKOV3的细胞凋亡的影响,细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测地西他滨、顺铂(Cisplatin)以及地西他滨联合顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖的影响.结果:浓度为100 nmol/L的地西他滨对人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖抑制最明显,细胞增殖抑制率达61.31%,有统计学差异(P0.05).地西他滨浓度超过100 nmol/L后对SKOV3的抑制率没有明显升高.低浓度地西他滨联合顺铂相比于单用地西他滨或者顺铂,SKOV3的细胞增殖抑制率升高,有统计学差异(P0.05).浓度为100 nmol/L的地西他滨处理人卵巢癌细胞株SKOV3后细胞凋亡率升高,有统计学差异(P0.05).结论:低浓度地西他滨促进人卵巢癌细胞株SKOV3的凋亡,抑制SKOV3的增殖,地西他滨可能通过增强铂类化疗药物的敏感性抑制肿瘤的发生发展.     

藻蓝色素蛋白通过调控miR-642a-5p抑制LTEP-a2细胞的增殖和迁移

研究藻蓝色素蛋白抑制非小细胞肺癌LTEP-a2体外增殖迁移的机制.以LTEP-a2细胞为模型,采用高通量miRNA转录组学对藻蓝蛋白处理后细胞中差异表达的miRNA进行了筛选;对筛选出的差异miRNA,利用体外转染mimics的方法对细胞的增殖、迁移能力进行验证.研究结果显示,藻蓝蛋白处理LTEP-a2细胞后能够显著增加细胞内miR-642a-5p的表达水平;过表达miR-642a-5p能够显著抑制细胞的体外增殖、迁移能力;此外,藻蓝蛋白可以通过上调miR-642a-5p表达抑制核受体NF-κB信号通路,降低蛋白磷酸化水平,进而抑制LTEP-a2细胞的增殖迁移能力.研究能够为藻蓝色素蛋白的应用以及非小细胞肺癌的治疗提供一定的理论基础.      

AKR1家族基因AKR1C1,AKR1C3,AKR1B1调控肺腺癌A549细胞顺铂耐药的研究

探究醛酮还原酶家族1(Aldo-Keto Reductases family 1,AKR1)3个基因AKR1C1,AKR1C3,AKR1B1调控肺腺癌A549细胞顺铂耐药的作用。通过对肺腺癌A549细胞及相应的顺铂耐药细胞A549/DDP的差异表达基因谱进行分析,发现AKR1家族的3个成员AKR1C1,AKR1C3及AKR1B1同时在A549/DDP细胞中显著上调。在细胞水平上对这3个基因进行了RNA定量实验,抑制剂实验和RNA干扰实验,观察其是否参与调控A549/DDP对顺铂的药物敏感性。研究结果证实:AKR1C1或AKR1B1酶活抑制剂与顺铂联合使用可显著提高A549/DDP细胞的顺铂敏感性,而抑制AKR1C3酶活性并不能引起A549/DDP对顺铂的敏感性增强;此外,基于RNA干扰技术,在A549/DDP细胞中同时敲减AKR1C1和AKR1B1不仅增强了顺铂的细胞毒性,且同时显著增强了顺铂诱导的细胞凋亡作用。以上结果表明,AKR1家族中的AKR1C1和AKR1B1基因在调节A549细胞顺铂耐药中起到了关键的作用。